抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体在诊断类风湿性关节炎中的意义

许为民，徐 静，万 瑛

（江苏大学附属医院，江苏镇江212001）

抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体在诊断类风湿性关节炎中的意义

许为民，徐 静，万 瑛

（江苏大学附属医院，江苏镇江212001）

目的 探讨抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体（anti-mutated citrullinated vimentin antibody，Anti-MCV）在诊断类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）中的价值。方法 选取确诊的RA患者51例（RA组）、非RA自身免疫性疾病患者36例（疾病对照组）和健康查体者30例（对照组）作为研究对象。根据临床资料计算DAS28评分，将RA组分为活动组和稳定组。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中的抗MCV抗体、抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）及白细胞介素-6（IL-6）水平，采用免疫比浊法检测血清中C-反应蛋白（CRP）的浓度水平，并进行比较。结果 RA组抗MCV抗体的浓度水平显著高于非RA组和对照组（P均＜0.01）；活动组抗MCV抗体的浓度水平显著高于稳定组和对照组（P均＜0.01）；经Spearman相关性分析，抗MCV抗体的浓度水平与CRP及IL-6呈正相关，而与DAS28无相关性；抗MCV抗体与抗CCP抗体的诊断效率无显著差异，但是灵敏度高于抗CCP抗体。结论 抗MCV抗体具有较高的灵敏度和特异性，并且能提示RA病情的活动情况，可以成为新的辅助RA诊断的血清学指标。

抗MCV抗体； 抗CCP抗体； 白细胞介素-6； 类风湿性关节炎

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种常见的慢性、进行性自身免疫性疾病，发病机制较为复杂，临床表现为不可逆的关节破坏与畸形，最终导致患者劳动力的丧失，因此早期诊断与治疗对疾病的控制有着至关重要的意义［1］。目前，RA的诊断除了依靠临床症状、X线检查外，还需要结合血清学指标的检测。近年来有研究表明，抗MCV抗体与RA患者病情的活动度及关节的放射学改变有关，但仍然存在着争议［2-4］。本文通过对RA患者血清中抗MCV抗体、抗CCP抗体及炎性指标的检测，探讨抗MCV抗体在RA诊断中的意义。

资料与方法

1 研究对象

1.1 RA患者组 收集2015年3月至2015年11月期间江苏大学附属医院风湿科住院的RA患者51例，其中男性9例，女性42例，年龄36～78（59.2± 10.9）岁。所有患者的诊断均符合美国风湿病学学会（ACR）和欧洲抗风湿病联盟（EULAR）2010年修订的RA分类标准（ACR/EULAR2010标准）。根据DAS28≥5.1病情高度活动；DAS28 3.2～5.1病情中度活动；DAS28 2.6～3.2病情低度活动；DAS28≤2.6病情缓解的评分标准，将RA患者分为活动组和稳定组。

1.2 非RA组 收集同时期与RA患者性别及年龄相匹配的其他自身免疫性疾病患者38例，其中系统性红斑狼疮25例，强直性脊柱炎4例，皮肌炎2例，干燥综合征3例，结缔组织病4例。所有患者的临床诊断均符合目前国内或国际上通用的诊断标准。

1.3 健康对照组 同期选择与RA患者性别及年龄相匹配的江苏大学附属医院健康查体人员30例，排除类风湿性关节炎及其他自身免疫性疾病、感染、肿瘤等。上述三组病例的年龄、性别分布差异无统计学意义（P＞0.05）。

2 标本采集

所有病例均空腹采集静脉血3mL，3000rpm/min离心10 min，收集血清标本，-20℃保存至实验时，一次性冻融后测定。

3 试剂和测定方法

采用德国 ORGENTEC公司的Alegria自身免疫全自动定量分析系统测定血清中抗MCV抗体的浓度水平；采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清抗CCP抗体和IL-6的浓度水平，试剂盒分别由上海富纯中南生物技术有限公司和美国RB公司提供；采用美国贝克曼库尔特有限公司的IMMAGE 800特种蛋白分析仪检测血清CRP的浓度水平，试剂盒由贝克曼库尔特公司提供。

4 统计学处理

实验数据采用GraphPad Prism 5.0软件进行处理，计量资料用均数±标准差（±s）表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。相关性分析采用Spearman检验，均以P＜0.05为有统计学意义。

结 果

1 各组间抗MCV抗体的浓度值比较

RA组的抗MCV抗体的水平（212.3± 34.6U/mL）明显高于非 RA组（19.48±4.1U/mL）（t=4.662，P＜0.01）及健康对照组（5.4±0.4U/ mL）（t=4.578，P＜0.01），差异有统计学意义。活动组抗MCV抗体的浓度水平（373.7±56.7U/mL）显著高于稳定组（72.6±8.7U/mL）（t=6.222，P＜0.01）及健康对照组（5.4±0.4U/mL）（t=7.792，P＜0.01），差异有统计学意义。见图1。

2 血清抗MCV抗体的水平与其他炎性指标的相关性分析

我们将抗MCV抗体的水平与DAS28、CRP及IL-6经Spearman进行相关分析。结果显示，血清抗MCV抗体的水平和CRP及IL-6呈正相关，但是和DAS28无相关性。见图2。

3 抗MCV抗体与抗CCP抗体对RA的诊断效率的比较

我们分别比较了抗MCV抗体和抗CCP抗体的诊断效率。抗MCV抗体的灵敏度（81.3%）高于抗

CCP抗体（75%），特异性相似分别为 93.7%、94.2%。ROC曲线下面积分别为92.2、87.5。（Z= 0.946，P=0.620＞0.05）。见表1。

表1 抗MCV抗体、抗CCP抗体诊断效率的比较

讨 论

长期以来，RA的实验室诊断主要依靠传统检测项目类风湿因子（RF），但由于 RF的灵敏度及特异性均不够理想，常常导致临床诊断的偏差。近年来，越来越多的抗瓜氨酸化蛋白抗体（ACPAS）在RA患者体内被发现，由于这些抗体表现出较高的特异性和灵敏度而得到广泛的研究和关注。抗MCV抗体作为ACPAS家族的新成员，我们试图全面了解其在RA诊断中的意义。

从实验结果来看，RA患者外周血中抗MCV抗体的浓度水平显著增高（P＜0.01）且活动期尤其明显（P＜0.01），提示RA患者体内抗MCV抗体水平的变化与疾病的活动度有关，动态监测患者血清中的水平有助于判断病情的活动性。

DAS28、CRP、ESR是目前公认的能够有效地评估RA病情活动性的指标，抗MCV抗体和这些指标的关系也成为讨论研究的焦点。Yousefghahari B等［5］通过研究表明血清抗MCV抗体的水平和 DAS28无相关性，Mansour H E等［6］的研究结果却是血清抗MCV抗体的水平和DAS28密切相关，Sizova L［2］通过实验证明血清抗MCV抗体的水平与DAS28、肿胀关节数、压痛关节数均无相关性，却与红细胞沉降率（ESR）及类风湿因子（RF-IgM）成正相关。Liu X等［3］发现抗MCV抗体与DAS28、CRP、ESR、抗 角蛋白 抗体（AKA）、抗核周因子（APF）等均无相关性。我们的数据结果显示抗 MCV抗体与 DAS28无相关性，但是却与CRP成正相关。我们分析各结果大相径庭的原因可能与标本量的多少、分期不同的患者所占的比例以及药物治疗等影响因素有关，此外DAS28在评判肿胀关节和压痛关节数，存在着一定的主观偏差，也是导致结果不相一致的直接原因。

近年来，越来越多的研究报道证明炎症、感染、创伤导致的蛋白质瓜氨酸化，可能是RA自身抗原的主要来源［7-9］。IL-6是一种多效性的细胞因子，能够调控免疫反应及炎症反应，在RA的病理过程中发挥重要作用且IL-6的水平与疾病的活动度有密切的关系。同时最近有文献报道IL-6除了能刺激B淋巴细胞分化，还能诱导滤泡辅助性T细胞的成熟，证明IL-6和自身抗体的大量分泌有密切的关系［10］。那RA患者体内过度的瓜氨酸化是否和IL-6相关？于是我们将抗MCV抗体与IL-6进行了相关性分析，结果显示抗MCV抗体和IL-6成正相关，提示 RA患者体内过度的瓜氨酸化可能会诱导IL-6的大量分泌，从而刺激B淋巴细胞产生大量的自身抗体，继而诱发一系列的免疫反应，导致RA患者滑膜关节不可逆的炎性改变。这为阐明复杂的RA病理机制提供了新的研究思路。

此外有报道称［11-12］，抗MCV抗体的滴度水平还对早期RA患者的预后，特别是骨的侵蚀性的发展，具有指导意义。高浓度水平的抗MCV抗体和骨的侵蚀性有很好的相关性，而低浓度的抗MCV抗体与RA患者的预后无关。由于我们的受试对象中，早期初发的患者较少，暂时还不能得出明确的结论，有待于后续进一步的研究。

最后我们比较了抗MCV抗体、抗CCP抗体的对RA的诊断效能。在 ACR/EULAR2010新的标准中，血清学检测首次将抗CCP抗体纳入其中，抗CCP抗体的诊断价值得到了肯定。我们的数据显示，抗MCV抗体的敏感度高于抗CCP抗体，为81.3%，特异度仅比抗CCP抗体低0.5%，达到93.7%，其敏感度和特异度均达到满意。同时抗MCV抗体ROC曲线下的AUC面积也高于抗 CCP抗体，为92.2，但是两者的诊断效能没有差别。

综上所述，抗MCV抗体在RA诊断中具有较高的灵敏度和特异性，同时与RA病情活动密切相关，抗MCV抗体可以成为RA新的血清学指标，对于早期不典型患者或者抗CCP抗体为阴性的患者，联合检测抗MCV抗体，可以减少RA的漏诊率。

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（李 凌编辑）

The Diagnostic Value of Anti-mutated Citrullinated Vimentin Antibodies in Patients with Rheumatoid Arthritis

XU Wei-min，XU Jing，WAN Ying
（The Affiliated Hospital of Jiangsu University，Zhenjiang 212001，China）

Objective To investigate the diagnostic value of Anti-mutated CitrullinatedVimentin（anti-MCV）antibodies in patients with rheumatoid arthritis（RA）.Methods Fifty-one patients diagnosed with rheumatoid arthritis were enrolled in the study.Disease activity was evaluated by calculating the 28-joint Disease Activity Score（DAS28）based on the clinical information RA patients were divided into active group and inactive group according to the DAS28 score.The antibodies and interleukin-6（IL-6）were measured by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）and C-reactionprotein（CRP）by nephelometry.Results The serum levels of anti-MCV antibodies increased significantly in RA group than the other two groups（P＜0.01）.The serum levels of anti-MCV antibodies in active group was higher than that in the inactive group and control group，The serum levels of anti-MCV antibodies was positively correlated with the serum level of CRP and IL-6，but not DAS28 by Spearman′s test.Anti-MCV with high sensitivity has approximately the same accuracy for the diagnosis of rheumatoid arthritis compared to anti-CCP.Conclusion Anti-MCV antibodies has high sensitivity and specificity.It might indicate the disease activity of RA and may become a valuable marker for the evaluation of RA.

Anti-MCV； Anti-CCP； IL-6； RA

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.11.008

2016-01-15；

2016-05-26

许为民（1981—），硕士，主管检验师，主要从事免疫学检验