中西药治疗牛环形泰勒虫病的效果观察

郭庆勇，伊春阳，海尼木古力艾合买提，杨红霞，谢小婉，巴音查汗*

(1.新疆农业大学，新疆乌鲁木齐 830052；2.托克逊县夏乡畜牧业服务中心，新疆吐鲁番 830031)



中西药治疗牛环形泰勒虫病的效果观察

(1.新疆农业大学，新疆乌鲁木齐 830052；2.托克逊县夏乡畜牧业服务中心，新疆吐鲁番 830031)

托克逊县是牛环形泰勒虫病的疫区之一，准确诊断以及有效治疗是防控该病的要点。论文采用流行病学调查、实验室方法检测和临床诊断的方法综合确诊45头舍饲患牛作为研究对象。将45头阳性牛随机分为西药治疗组、中药治疗组以及空白组，按1、2、3、4、5 d以及1周，分别对每组患牛进行临床症状观察、体温测定、血涂片观察、染虫率统计,评价治疗效果。结果表明，托克逊县夏乡5个镇散养户的194头牛血液涂片中62份有环形泰勒虫虫体；PCR检测有57份DNA样品得到与预期结果相同的534 bp条带；临床诊断有45头牛表现为牛环形泰勒虫病症状；西药治疗组治愈率为93.33%(14/15)明显高于中药治疗组治愈率为73.33%(11/15)。西药组对于治疗环形泰勒虫病具有显著的效果，可为新疆有效治疗环形泰勒虫病提供参考。

牛；泰勒虫病；中药；西药；对比治疗

牛环形泰勒虫是寄生在单核巨噬系统与红细胞中的一种原虫，虫体多呈圆形、梨形、逗点形；牛环形泰勒虫病的临床症状主要以淋巴结肿胀、高热、食欲减退以及贫血为主。本病具有明显的季节性和地区性，春季多发且发病率和病死率高。印度畜牧业每年因该病造成的损失高达3.843亿美元[1]。新疆吐鲁番地区夏季气温高达约35 ℃～45 ℃，地貌复杂多样，十分适合璃眼蜱的滋生，从而使得牛环形泰勒虫病在该地区常年广泛地流行；加之，基层县、乡一级单位缺乏有效防治本病的有效方法，导致了本地区每年牛环形泰勒虫病感染，造成了严重的经济损失。目前国内对于本病的治疗主要以西药为主，包括黄色素、贝尼尔(血虫净、三氮脒)及青蒿琥酯等药物[2-4]，偶有中药治疗的报道。但对其与西药治疗效果对比的研究很少。国外报道中常用布帕伐醌加其他辅助治疗药物对病牛进行治疗[5-7]。本试验通过流行病学调查、临床症状以及实验室诊断等方法对患牛进行综合诊断，然后经中西药方剂治疗并观察治疗效果。有效地控制了疫情，获得了较好的临床治疗效果，这对新疆牛环形泰勒虫病的综合防控具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物 2015年4月12日至2015年6月15日对吐鲁番市托克逊县夏乡5个镇散养户的194头牛进行检测。了解和收集当地兽医站就诊的病牛资料并采集疑似病牛的耳缘静脉血和全血分别进行血涂片和PCR检测。综合确诊为牛环形泰勒虫病的45头舍饲患牛作为试验对象。

1.1.2 试剂与仪器 甲醇、姬姆萨染料、二甲苯、香柏油、蒸馏水、全血基因组提取试剂盒、PCR仪、电泳仪及数码互动显微镜等均由新疆农业大学寄生虫实验室提供;贝尼尔(三氮脒、血虫净)为河北远征药业有限公司产品(1 g/瓶)；50 g/L葡萄糖为甘肃武威新天马制药有限责任公司产品(25 g/瓶)；9 g/L生理盐水为陕西圣奥动物药业有限公司产品；维生素C为河南官渡兽药制造有限公司产品(1 g/支)；复合维生素B12为西乡长江动物药品有限责任公司产品(0.5 mg/支)；柴胡为山西芮城维尔富兽药有限公司产品(1 g/支)；PCR诊断性引物由上海生物工程技术服务有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 综合诊断法 根据临床症状诊断 通过观察牛只精神状态、测量体温、体表是否有璃眼蜱寄生、淋巴结是否肿胀以及是否贫血；并通过询问畜主牛只进食情况和是否有发病史等临床症状综合诊断。

1.2.2 血涂片检查诊断 耳缘静脉无菌采血，滴至载玻片做血液涂片，待自然干燥后滴适量甲醇固定；待其完全晾干后按参考文献中的方法进行染色[10]；染色结束后，用蒸馏水将血涂片冲洗干净，自然晾干后滴香柏油并进行镜检。

1.2.3 PCR诊断 采集牛全血并通过全血基因组提取试剂盒提取DNA；根据牛环形泰勒虫裂殖子的表面抗原(Tams1)基因，设计一对特异性引物，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。上游引物：5′- TTCGTTATCTCATCCGTT-3′；下游引物：5′- ATACTTGGCATTGTTTGG-3′；采用25 μL反应体系以全血基因组DNA为模板，反应条件为：95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s；55 ℃ 1 min；72 ℃ 1 min；30个循环；72 ℃延伸10 min。PCR产物用10 g/L琼脂糖凝胶电泳观察结果。综合以上诊断结果，确诊为牛环形泰勒虫病的45头患牛作为治疗对象。

1.2.4 治疗方案 将45头患牛环形泰勒虫病的牛随机分为中药治疗组、西药治疗组以及空白组3个组。按治愈疗程分别对中、西药治疗组以及空白组进行为期7、5、5 d的临床症状观察、体温测定、血涂片观察以及染虫率统计。综合分析以上试验结果，对比中西药治疗效果。

1.2.5 西药治疗组 贝尼尔(血虫净、三氮脒)用量为3 mg/kg～5 mg/kg体重，临用前配成5%～7%溶液，做臀部深层肌肉注射，每天1次，连用3 d；辅助治疗采取静脉注射50 g/L～100 g/L葡萄糖500 mL～1000 mL，100 g/L维生素C 20 mL～40 mL,100 g/L维生素B1210 mL～20 mL,100 g/L柴胡20 mL～40 mL。

1.2.6 中药治疗组 地骨皮40 g,生地50 g,白芍40 g,丹皮40 g,青蒿100 g,黄柏 50 g,木通30 g,龙胆草40 g,大青叶50 g,大黄40 g,知母40 g。将上述药物粉碎成细粉混入饲料中，每日1次，连用3剂。

1.2.7 空白组 不采取任何治疗措施。

1.2.8 数据处理 数据均用平均值±标准差表示，统计分析采用SPSS19.0进行描述性统计。

2 结果

2.1 综合诊断结果

对调查的194头牛进行临床症状观察，并将其血液进行血涂片观察以及PCR检测。结果显示45份血涂片中含有环形或戒指状的环形泰勒虫虫体(图1)；57份DNA样品PCR检测结果得到预期534 bp条带，与实际情况相符(图2)；62头牛表现出牛环形泰勒虫病临床症状：病初临床症状表现为食欲减退，精神不振，喜卧。后期体温升到39℃～42℃，呈稽留热，体表淋巴结肿胀，其中肩前淋巴结肿胀明显。重症患牛初期眼结膜潮红，鼻镜湿润，偶有白色或透明状鼻汁流出，肩前淋巴结肿胀明显。后期病牛贫血，可视黏膜、肛门周围、乳房等薄皮肤处黄染或苍白，食欲废绝，消瘦。少数病牛具有异嗜性，流涎，磨牙等特征。

图1 患牛红细胞内寄生的环形泰勒虫(10×100)

Fig.1Theileriaannulatain bovine erythrocytes

M.DNA标准DL 2 000；1.阴性对照；2.阳性对照；3.PCR阳性产物

M.DNA Marker DL 2 000; 1.Negative control; 2.Positive control; 3.PCR positive product

图2 牛环形泰勒形虫PCR扩增结果

Fig.2 PCR amplification results ofTheileriaannulata

2.2 治疗结果

西药治疗组治愈率为93.33%(14/15)；中药治疗组治愈率为73.33%(11/15)；空白组100%(15/15)发病(表1)。通过比较西药治疗组、中药治疗组以及空白组平均染虫率变化可以看出，空白组染虫率及体温变化均呈上升趋势；西药治疗组平均染虫率以及体温下降幅度较中药治疗组均明显(图3和图4)。

图3 不同治疗组治疗后体温变化表

Fig.3 Body temperature changes in different groups after treatment

图4 不同治疗组治疗后染虫率变化表

Fig.4 Erythrocyte infection rates in different groups after treatment

3 讨论

托克逊县隶属于新疆吐鲁番地区，属典型大陆性暖温带荒漠气候。充足的光照为泰勒虫病传播媒介-璃眼蜱的孳生提供了充分条件，使得该病广泛传播，继而给作为当地第一产业的农牧业带来了巨大的经济损失。在试验进行中发现当地基层兽医对于该病存在诊断技术滞后、治疗药物使用混乱、治疗方法不妥当等问题。故本试验结合临床症状、病原检查和PCR检测等三种方法来综合诊断、确诊病例；选用中药和西药处方，进行对比治疗及其药效观察。

在综合确诊为牛环形泰勒虫病的前提下，各试验组治疗结果表明，西药治疗组治愈率为93.33%(14/15)显著高于中药治疗组治愈率73.33%(11/15)；染虫率及体温变化的描述性统计结果表明，西药治疗组较中药治疗组平均染虫率、体温下降幅度均较大，说明西药组治疗效果优于中药组。这可能与中药见效缓慢且疗程较西药长，而牛环形泰勒虫病常呈急性发病有关。因此对于部分急性病例起不到及时治愈的效果，临床可针对慢性病例酌情应用该方法治疗[11-14]。笔者建议牛环形泰勒虫病疫区的兽医人员应预先对急性、慢性病例进行综合性诊断，在准确诊断的基础上针对急性病例、慢性病例分别进行西药方和中药方治疗，既可以及时、有效地控制疫情，又能弥补西药的抗药性与局限性，缓解西药的毒副作用。

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Therapeutic Observation of Bovine Theileriosis by Western Medicine and Chinese Herb Prescription

GUO Qing-yong1, YI Chun-yang1, HAI Ni-muguliaihemaiti2, YANG Hong-xia1, XIE Xiao-wan1,BA Yin-chahan1

(1.XinjiangAgriculturalUniversity,Xinjiang,Urumchi, 830052,China; 2.AnimalHusbandryServiceCenterofToksunCounty,Turpan,Xinjiang,838100,China)

Bovin theileriosis is a common disease in cattle caused byTheileriaannulata.Appropriate diagnosis and effective treatment are essential in the treatment of this disease.In this study,we tested Chinese herbs (Artemisiacaruifolia) as the alternative treatment for the theileriosis.A total of 194 blood samples from cattle were collected and screened forTheileriaannulatainfection in a high prevalent area of Toksun, Xinjiang, China.Blood smears from 62 of these samples showed circular or ring shaped parasites that indicated the infection ofTheileriaannulata.Fifty-seven of the 62 samples were confirmed asTheileriaannulatainfection by PCR amplification of a 534 bp fragment.Among these PCR positive cattle, 45 with clinical symptoms of theileriosis were selected for treatments.These cattle were randomly divided into three groups, including one group with diminazene aceturate(3 mg/kg-5 mg/kg body weight, intravenous injection), one forArtemisiacaruifolia(one dose per day, per oral) and one group as negative control.Clinical symptoms, body temperature, blood smear and infection rate were recorded for days 1, 2, 3, 4, 5 and 7 post treatment.The results showed that diminazene aceturate treatment cured 93.33% (14/15) cattle, which was significantly higher thanArtemisiacaruifoliagroup that cured 73.33% (11/15) of the cattle (P<0.05 ).The control group had no change in infection.Our study illustrated that western medicine diminazene aceturate is more effective than the Chinese herbArtemisiacaruifoliain the treatment of theileriosis in cattle.

cattle; Theileriosis; Chinese herb; western medicine; contrast treatment

2015-10-09

新疆维吾尔自治区高校科研计划科学研究重点项目资助(XJEDU2013I18)

郭庆勇，(1973-)，男，山东人，博士研究生，主要从事兽医寄生虫学研究。*通讯作者

S852.7

B

1007-5038(2016)11-0129-04