清肺化痰逐瘀汤对慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者T淋巴细胞的干预研究

史 捷 喻 敏 强宁侠

(陕西中医药大学附属医院呼吸一科，陕西 咸阳 712000)



清肺化痰逐瘀汤对慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者T淋巴细胞的干预研究

史 捷 喻 敏 强宁侠

(陕西中医药大学附属医院呼吸一科，陕西 咸阳 712000)

目的 观察清肺化痰逐瘀汤对慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者肺泡灌洗液(BALF)及血清中T淋巴细胞的干预作用。方法 将60例AECOPD患者随机分为2组，另选取健康老年人28人作为健康组。对照组30例予西医常规治疗，治疗组30例在对照组治疗基础上应用清肺化痰逐瘀汤治疗。2组均治疗14 d。于治疗前及治疗结束后第2 d检测患者BALF液及血清CD4+、CD8+及CD4+/CD8+T淋巴细胞，比较2组疗效。结果 总有效率治疗组93.33%，对照组76.67%，2组总有效率比较差异有统计学意义(P<0.05)，治疗组疗效优于对照组。治疗组治疗后BALF液、血清CD4+、CD4+/CD8+均较本组治疗前升高(P<0.05)，CD8+降低(P<0.05)；治疗组治疗后BALF液、血清CD4+、CD4+/CD8+均高于对照组(P<0.05)，CD8+低于对照组(P<0.05)；治疗组治疗后BALF液、血清CD4+、CD4+/CD8+均低于健康组(P<0.05)，CD8+高于健康组(P<0.05)；治疗组、对照组治疗前BALF液、血清CD4+、CD4+/CD8+均低于健康组(P<0.05)，CD8+高于健康组(P<0.05)。结论 AECOPD患者存在细胞免疫功能下降和T淋巴细胞介导的肺部炎性损伤，清肺化痰逐瘀汤联合西医常规治疗可有效改善症状及细胞免疫状态。

肺疾病，慢性阻塞性；中药疗法；T淋巴细胞

1 资料与方法

1.1 一般资料 全部60例均为我院呼吸科住院患者，随机分为2组。治疗组30例，男18例，女12例；年龄58～83岁，平均(71.63±5.53)岁；病程8～28年，平均(18.20±6.68)年。对照组30例，男17例，女13例；年龄57～84岁，平均(70.63±5.71)岁；病程7～30年，平均(19.00±7.30)年。另选取健康老年人28人作为健康组，男17人，女11人；年龄54～76岁，平均(69.89±5.47)岁。治疗组与对照组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；3组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 病例选择

1.2.1 诊断标准 参照世界卫生组织(WHO)公布的COPD诊断标准[4]，并符合咳、痰、喘加重，或出现发热及呼吸困难等急性加重期条件。

1.2.2 纳入标准 ①符合AECOPD诊断标准；②年龄60～80岁，男女不限；③知情同意。

1.2.3 排除标准 ①其他各种疾病所致的呼吸困难；②严重的呼吸困难或意识模糊、嗜睡或昏迷需使用机械通气者；③严重的心、肝、肾功能衰竭；④精神疾病；⑤依从性差，不能完成观察者；⑥1周内使用过糖皮质激素或其他中药者；⑦自身免疫性疾病、免疫缺陷性疾病，3个月内使用免疫抑制剂者。

1.3 治疗方法

1.3.1 对照组 应用西医常规治疗。①持续低流量鼻导管吸氧。②抗感染治疗，根据经验及痰培养结果调整抗生素。③支气管扩张剂：吸入用硫酸沙丁胺醇溶液(英国葛兰素史克公司，注册证号H20140029)2 mg，每日2次氧气驱动雾化吸入；注射用多索茶碱(陕西博森生物制药股份集团有限公司，国药准字H20052407)0.2 g，加入5%葡萄糖注射液100 mL中，每日1次静脉滴注。④化痰药物：盐酸氨溴索注射液(河北爱尔海泰制药有限公司，国药准字H20113063)60 mg，加入5%葡萄糖注射液100 mL中，每日1次静脉滴注。⑤其他治疗：纠正水电解质紊乱、补液、营养支持等，病情加重上述药物可酌情加量。

1.3.2 治疗组 在对照组治疗基础上应用清肺化痰逐瘀汤。药物组成：鱼腥草15 g，桑白皮15 g，黄芩10 g，瓜蒌10 g，杏仁10 g，浙贝母10 g，大黄(后下)6 g，厚朴10 g，丹参15 g，水蛭6 g。日1剂，水煎2次取汁300 mL，分早、晚2次服。

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1.3.3 疗程 2组均治疗14 d。

1.4 观察指标 比较治疗组、对照组疗效；观察治疗组、对照组治疗前后及健康组肺泡灌洗液(BALF液)T淋巴细胞变化及血清T淋巴细胞变化。

1.5 BALF液T淋巴细胞收集及方法 ①签署纤维支气管镜知情同意书，操作时吸氧，予心电监测、指脉氧监测。②收集时间：治疗前及治疗结束后第2 d进行收集。③于双肺下叶用37 ℃灭菌0.9%氯化钠注射液进行灌洗，每次20 mL，2个呼吸周期后用50～100 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)负压吸引回收灌洗液，总量60～100 mL。④BALF液经300目金属网细胞过滤器过滤去掉杂质和痰液，600 g，5 min离心后弃上清液，再用0.5%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(PBS)洗脱，再次600 g，5 min离心后弃上清液，再次PBS洗脱第2遍；取BALF液100 L加入20 L荧光抗体，室温避光孵育20 min，600 g，5 min离心后弃上清，加1∶9配制的溶血素450 L，避光10 min，600 g，5 min离心弃上清，加PBS液洗脱第3遍，600 g，5 min离心后弃上清，加入PBS液500 L重新混匀等待上机。

1.6 血清T淋巴细胞收集及方法 ①收集时间：治疗前及治疗结束后第2 d进行收集。②用EDTA-K2抗凝管收集患者清晨空腹外周血2 mL，混匀后取50 μL，加入15 μL荧光抗体，室温避光孵育30 min，加溶血素450 μL，避光10 min，600 g，5 min离心弃上清，加PBS液洗脱离心2遍，弃上清，加入PBS液500 L重新混匀等待上机。

以上抗体均为美国BD公司生产的三色荧光单克隆抗体产品(CD4/CD8/CD3)。

1.7 流式细胞仪测定 按前述预处理的BALF液及血清标本依次上机；上机前调整仪器达到最佳工作状态，双色免疫荧光染色，三色荧光/侧向散射光设门，用CD3细胞群圈门以排除巨噬细胞、碎片等干扰，调节电压、阈值，血清标本每管获取1万个细胞，BALF标本每管获取0.2～0.5万个细胞，建立CD4+CD8-、CD8+CD4-、CD4+CD8+、CD4-CD8-散点图，分析其表达情况，同时计算CD4+/CD8+比值。以上采用BD FACSCalibur流式细胞仪。

1.8 疗效标准 显效：咳嗽、咯痰消失，喘憋明显减轻，可从事轻体力劳动；有效：偶有咳嗽、咯痰，静息状态下无明显喘息；无效：症状无明显改善或病情恶化[4]。

2 结 果

2.1 2组疗效比较 见表1。

表1 2组疗效比较 例

与对照组比较，*P<0.05

由表1可见，2组总有效率比较差异有统计学意义(P<0.05)，治疗组疗效优于对照组。

2.2 治疗组、对照组治疗前后及健康组BALF液T淋巴细胞比较 见表2。

治疗组(n=30)治疗前治疗后对照组(n=30)治疗前治疗后健康组(n=28)CD4+(%)0.348±0.071#0.413±0.057*△#0.358±0.065#0.386±0.0540.455±0.045CD8+(%)0.413±0.075#0.358±0.061*△#0.418±0.065#0.388±0.0570.328±0.042CD4+/CD8+0.904±0.370#1.213±0.374*△#0.907±0.344#1.037±0.3141.428±0.319

与本组治疗前比较，*P<0.05；与对照组治疗后比较，△P<0.05；与健康组比较，#P<0.05

由表2可见，治疗组治疗后BALF液CD4+、CD4+/CD8+均较本组治疗前升高(P<0.05)，CD8+降低(P<0.05)；治疗组治疗后BALF液CD4+、CD4+/CD8+均高于对照组(P<0.05)，CD8+低于对照组(P<0.05)；治疗组治疗后BALF液CD4+、CD4+/CD8+均低于健康组(P<0.05)，CD8+高于健康组(P<0.05)；治疗组、对照组治疗前BALF液CD4+、CD4+/CD8+均低于健康组(P<0.05)，CD8+高于健康组(P<0.05)。

2.3 治疗组、对照组治疗前后及健康组血清T淋巴细胞比较 见表3。

表3 治疗组、对照组治疗前后及健康组血清T淋巴细胞比较

治疗组(n=30)治疗前治疗后对照组(n=30)治疗前治疗后健康组(n=28)CD4+(%)0.449±0.071#0.513±0.057*△#0.458±0.065#0.486±0.0540.555±0.045CD8+(%)0.514±0.074#0.459±0.062*△#0.518±0.065#0.488±0.0570.428±0.042CD4+/CD8+0.912±0.287#1.155±0.280*△#0.916±0.268#1.021±0.2411.320±0.232

与本组治疗前比较，*P<0.05；与对照组治疗后比较，△P<0.05；与健康组比较，#P<0.05

由表3可见，治疗组治疗后血清CD4+、CD4+/CD8+均较本组治疗前升高(P<0.05)，CD8+降低(P<0.05)；治疗组治疗后血清CD4+、CD4+/CD8+均高于对照组(P<0.05)，CD8+低于对照组(P<0.05)；治疗组治疗后血清CD4+、CD4+/CD8+均低于健康组(P<0.05)，CD8+高于健康组(P<0.05)；治疗组、对照组治疗前血清CD4+、CD4+/CD8+均低于健康组(P<0.05)，CD8+高于健康组(P<0.05)。

3 讨 论

现代医学认为，AECOPD的发病机制集中在几个方面：炎症介质和细胞因子、蛋白酶-抗蛋白酶失衡、氧化/抗氧化失衡、肽类因子与COPD的发病等。成熟的T淋巴细胞可根据其表型不同分为CD4+、CD8+两大亚群。CD4+分子能辅助B细胞产生抗体和诱导抑制T细胞功能，CD8+分子是早期抗肿瘤、抗感染的细胞，称为细胞毒性T淋巴细胞，但其数目增高可引起机体损伤；CD4+和CD8+二者相互影响形成T细胞网络，其中CD4+/CD8+是评价细胞免疫平衡的重要指标之一[5]。本研究结果表明，治疗组、对照组治疗前与健康组比较，患者CD4+T淋巴细胞下降，CD8+T淋巴细胞上升，CD4+/CD8+下降，存在T淋巴细胞亚群异常，说明机体免疫功能尤其是细胞免疫功能紊乱，与COPD患者的反复感染及病情的发展有密切关系。

除存在上述免疫平衡紊乱外，AECOPD患者T淋巴细胞在气道持续炎性病变中也发挥重要作用，T淋巴细胞可分泌多种细胞因子，如γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)-β、白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-5、IL- 6、IL- 9、IL- 10、IL- 13等，这些细胞因子可激活气道上皮细胞，募集中性粒细胞、巨噬细胞及嗜酸细胞向肺组织浸润。病理组织学研究显示，AECOPD的主要炎症病变在细支气管和肺实质[6]。AECOPD患者气道、肺实质、肺血管周围均有T淋巴细胞浸润[7]。有研究表明，AECOPD患者CD4+和CD8+T淋巴细胞与肺功能密切相关[8]，T淋巴细胞浸润与气流受限程度密切相关[9]；2009年，Cosio MG等提出肺内T淋巴细胞介导的炎症可在戒烟后持续多年，是COPD发生的关键因素[10]。AECOPD炎症反应中的淋巴细胞改变主要是CD8+T淋巴细胞增多，CD4+/ CD8+比值下降，同时Ⅳ型变态反应增加引起组织、细胞的损伤[11]。

根据AECOPD发病机制，现代医学对AECOPD的基础治疗一般为吸入表面激素、长效β2受体激动剂、长效M受体抑制剂等以降低炎性细胞、炎性因子、趋化因子等活性，降低气道炎性反应。但单纯现代医学治疗对患者仍有不可逆转且逐年加重的咳、痰、喘及活动受限，且长期使用抗生素及糖皮质激素易导致机体免疫力下降、细菌耐药，长期吸入β2受体激动剂、M受体抑制剂易导致相应受体数目减少，功能减低，正是由于单纯现代医学治疗AECOPD存在上述局限性及反复性，近年来联合中医中药治疗成为了研究热点。AECOPD属中医学肺胀范畴，肺、心、脾、肾气虚是主要内因，痰、瘀既是AECOPD的病理产物也是致病因素，肺脾肾虚，聚津成痰，伏藏于肺，成为发病“夙根”，痰湿阻肺，郁而化热，肺气壅遏不畅，咳喘遂生，肺虚不能调节心血运行，心气、心阳虚衰，无力运行血脉则血瘀，均提示了肺胀的发生与痰瘀互结、阻碍肺气有关，故肺热、痰湿、血瘀为AECOPD的主要病理机制。我们应用清肺化痰逐瘀汤治疗肺胀，突出了“急则治其标”，扶正祛邪，强主逐寇，始终抓住“肺热”“痰湿”“血瘀”“俱虚”的肺胀本质，在论证了清肺化痰逐瘀汤显著的临床疗效同时，也证实了该方确能降低AECOPD患者肺部及全身炎症反应。清肺化痰逐瘀汤方中鱼腥草、桑白皮、瓜蒌、黄芩、杏仁、浙贝母清热化痰，止咳平喘；厚朴燥湿降气平喘，行气消胀；大黄清热通腑，泄浊逐瘀；丹参活血化瘀通络；水蛭破血逐瘀通络。诸药合用，共奏清热泄肺、止咳化痰、通腑泄浊、活血化瘀之效[12]。现代药理研究表明，黄芩、浙贝母、鱼腥草、桑白皮、厚朴、瓜蒌等对多种革兰阳性及阴性杆菌均有抑制作用，其中鱼腥草能提高白细胞吞噬能力[13]；黄芩能通过抑制组胺、白三烯和前列腺素E的生成，减轻气道炎性反应，还能通过稳定肥大细胞、抑制炎性介质的生成调节免疫，尤其对Ⅳ型变态反应抑制强烈[13]；杏仁苷除抑制咳嗽中枢外，还可通过影响核因子κB表达，发挥抑制免疫过激、平喘作用[13]；浙贝母、厚朴均能拮抗气管平滑肌M受体，从而扩张气道[13]；丹参酮可通过抑制5-羟色胺(5-HT)释放，改善微循环，防止血栓，丹参多酚能降低人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达，抑制气道炎症[13]；水蛭有抗凝、清除氧自由基等作用[13]。

本研究结果显示，2组AECOPD患者治疗前CD4+T淋巴细胞均下降，推测该类患者存在辅助性T淋巴细胞缺失，协助B细胞产生抗体和辅助其他淋巴细胞的功能减弱，机体免疫功能低下，从而导致反复感染且不易治愈。CD8+T淋巴细胞上升，推测该类患者CD8+T淋巴细胞过度募集，虽能清除一定的感染细胞，但也加重肺部小气道炎性反应、Ⅳ型变态反应，从而导致气流不可逆性受限及肺功能持续下降，CD4+/CD8+下降倒置，说明体内存在细胞免疫功能紊乱。2组治疗后CD4+T淋巴细胞上升，CD8+T淋巴细胞下降，CD4+/CD8+上升，且治疗组改善更明显，因此清肺化痰逐瘀汤能改善外周血T淋巴细胞亚群相关指标，调节细胞免疫功能，改善肺部炎症损伤，可能是其发挥临床疗效的作用机制之一。

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(本文编辑：习 沙)

Intervention study of Qingfei-huatan-zhuyu decoction on T-lymphocyte in patients with acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease

SHIJie,YUMin,QIANGNingxia.

FirstDepartmentofPneumology,HospitalAffiliatedtoShanxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanxi,Xianyang712000

Objective To observe the effects of Qingfei-huatan-zhuyu decoction on T-lymphocyte of the serum and bronchoalveolarlavage fluid (BALF) in patients with acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease (AECOPD). Methods 60 patients with AECOPD were randomly divided into two groups, another 28 healthy elderly were selected as healthy group. The control group (n=30) received western routine treatment, the treatment group (n=30) received Qingfei-huatan-zhuyu decoction on the basis of control group treatment, continuously treatment for 14 d. The CD4+, CD8+and CD4+/CD8+in serum and BALF before and 2 d after treatment were observed in two groups, and the curative effect was compared. Results The total effective rate in treatment and control group was 93.33% and 76.67%, respectively. The total curative effect in treatment group was superior to that in control group (P<0.05). The CD4+and CD4+/CD8+in serum and BALF after treatment were increased in treatment group (P<0.05), the CD8+was decreased (P<0.05). The CD4+and CD4+/CD8+in serum and BALF after treatment in treatment group were higher than those in control group (P<0.05), and the CD8+was lower (P<0.05). The CD4+and CD4+/CD8+in serum and BALF after treatment in treatment group were lower than those in healthy group (P<0.05), and the CD8+was higher (P<0.05). The CD4+and CD4+/CD8+in serum and BALF before treatment in treatment and control group were lower than those in healthy group (P<0.05), and the CD8+was higher (P<0.05). Conclusion The decrease of cellular immunity function and pulmonary inflammatory injury mediated by T-lymphocyte were existed in AECOPD. The Qingfei-huatan-zhuyu decoction combined with routing western medicine can effectively improve the symptoms and cellular immunity.

Pulmonary; Chronic obstructive; Traditional Chinese herbs therapy; T-lymphocyte

10.3969/j.issn.1002-2619.2016.09.007

史捷(1978—)，女，副主任医师，硕士。研究方向：中西医结合治疗肺系疾病。

R287；R563.9；R563.905.8；R289.6

A

1002-2619(2016)09-1308-05

2016-02-22)