灵芝孢子油提取物复合制剂对酒精性肝损伤的保护作用*

金凌云，黄样增，吴长辉，李 晔**，陈冠敏

（1．福建仙芝楼生物科技有限公司，药用菌栽培与深加工国家地方联合工程研究中心，福建 福州 350002；2．福建省疾病预防控制中心，福建 福州 350001）

〈生理生化〉

灵芝孢子油提取物复合制剂对酒精性肝损伤的保护作用*

金凌云1，黄样增1，吴长辉1，李 晔1**，陈冠敏2

（1．福建仙芝楼生物科技有限公司，药用菌栽培与深加工国家地方联合工程研究中心，福建 福州 350002；2．福建省疾病预防控制中心，福建 福州 350001）

探讨灵芝（Ganoderma lucidum）孢子油提取物复合制剂对小鼠急性酒精肝损伤的保护作用。分别设定0．167 g·kg－1、0．333 g·kg－1、1．00 g·kg－1三个剂量组，以及乙醇模型对照组和空白对照组。各剂量组经口灌胃给予受试物，溶剂对照组和乙醇模型组给予食用植物油。30 d后，用乙醇建立急性酒精性肝损伤小鼠模型。16 h后处死动物，测定肝组织中甘油三酯（TG）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA），同时取肝脏进行组织病理学检查。结果表明样品可以降低3个剂量组小鼠急性酒精性肝损伤后第16小时肝组织中TG含量和中剂量组MDA含量，肝脏组织病理学检查发现，乙醇模型对照组动物肝损伤程度高于溶剂对照组（P＜0．05）。结论证明灵芝孢子油提取物复合制剂对急性酒精肝损伤具有辅助保护功能。

灵芝孢子油提取物复合制剂；酒精性肝损伤；乙醇模型；ICR小鼠

我国是饮酒大国，因长期大量饮酒导致的酒精性肝病（alcoholic liver diseases，ALD） 发病率在我国有逐年上升的趋势，已成为继病毒性肝炎后导致肝损害的第二大病因。ALD的发病机制目前尚不完全清楚，可能与酒精的毒性作用、氧化应激等因素有关，西医对肝损伤的药物治疗疗法并不十分肯定，临床用药如糖皮质激素、己酮可可碱、英夫利昔等，仅能改善患者生存率或生存期，且容易出现副作用，治疗效果并不明显[1－2]。近年来中医在肝损伤治疗方面的研究有了长足发展，充分发挥中医药在肝病治疗方面的优势，日渐成为研究热点[3]。

灵芝（Ganoderma lucidum） 是担子菌纲（Basidiomycetes）多孔菌科（Polyporaceae） 赤芝或紫芝的干燥子实体，是我国传统中药材，已被广泛地用作治疗各种病因引起的肝炎[4]。灵芝中多糖和三萜类化合物被认为是对化学毒物所致肝损伤有保护作用的活性成分。灵芝多糖能抗酒精性肝损伤和病毒性肝炎[5]，灵芝三萜类化合物对CCl4等损伤模型鼠也显示出有效的保护作用[6]。灵芝孢子油提取物复合制剂是以灵芝孢子油、灵芝（赤芝、紫芝）提取物制成，集合了灵芝的多种功效成分。本文主要对灵芝孢子油提取物复合制剂在小鼠酒精性肝损伤保护方面的作用进行研究，进而对灵芝复合制剂的功能性提供理论支持。

1　材料

1.1动物

清洁级ICR小鼠，雌性，18 g～22 g，共50只，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK（沪）2012－0002。

1.2药物及试剂

受试物灵芝孢子油提取物复合制剂，由仙芝科技（福建）股份有限公司提供。生化试剂盒购自南京建成生化试剂有限公司，分析纯乙醇购自上海化学试剂一厂，用蒸馏水配制成浓度为50%的乙醇溶液。

1.3仪器

日立7060C全自动生化分析仪、生物U1800紫外可见分光光度计、电子天平、Leica CM－1950冰冻切片机、OlympusBX51T－32E显微镜。

2　方法

2.1分组、给药及造模

将小鼠随机分成5组，每组10只，即低、中、高剂量组（受试物浓度分别为0．167 g·kg－1、0．333 g·kg－1、1．00 g·kg－1），空白对照组、模型对照组。每日称取受试物样品10．0 g，加食用植物油定容至100 mL，摇匀，作为高剂量组受试物；取高剂量组受试物50 mL，加食用植物油定容至150 mL，摇匀，作为中剂量组受试物；取中剂量组受试物50 mL，加食用植物油定容至100 mL，摇匀，作为低剂量组受试物。模型对照组乙醇浓度为50%（V·V－1）。

3个剂量组动物每日经口灌胃给予受试物，空白对照组和模型对照组给予等量食用植物油，灌胃剂量为10 mL·kg－1，连续30 d。动物每周称重2次，以调整受试动物灌胃量，自由饮食、饮水。

2.2动物造模

实验第30天将各组动物称重，模型组及各剂量组动物按照0．012 mL·g－1一次性灌胃给予50%（V·V－1）乙醇染毒，空白对照组给予蒸馏水。

2.3指标测定

禁食16 h后，处死动物观察肝组织外观性状，并取部分肝组织，匀浆，测定肝组织中TG、GSH、MDA含量，同时取肝脏进行组织病理学检查。

2.4试验数据统计方法

试验数据以SPSS软件进行统计。空白对照组和乙醇模型对照组比较用t检验；各样品组与乙醇模型对照组比较用单因素方差分析。经方差齐性检验，方差齐的试验数据采用LSD法进行统计分析。对方差不齐或非正态的试验数据先进行变量转换，再进行统计。

3　结果

3.1灵芝孢子油提取物复合制剂对小鼠体重的影响

灵芝孢子油提取物复合制剂对小鼠体重的影响，结果见表1。

受试物各组小鼠的初始体重经方差分析检验，差异不显著（P＞0．05），即小鼠的初始体重在各组间较为均衡；经口灌胃30 d后，各组小鼠的体重增长值经方差分析检验，差异不显著（P＞0．05），即受试物对小鼠的体重增长无影响。

3.2灵芝孢子油提取物复合制剂对肝组织中TG、GSH、MDA含量的影响

灵芝孢子油提取物复合制剂对肝组织中TG、GSH、MDA含量的影响，结果见表2。

试验结束时，模型对照组小鼠肝组织中的TG、MDA含量均高于空白对照组，GSH含量低于空白对照组，经统计检验，差异显著（P＜0．05），说明动物模型建模较成功。受试物3个剂量组肝组织TG含量、中剂量组MDA含量低于模型对照组，经统计检验，差异显著（P＜0．05），说明灵芝孢子油提取物复合制剂可显著降低酒精性肝损伤小鼠肝组织中TG、MDA含量水平。

表1　各组小鼠的初始体重、结束体重、增重（±S）Tab．1　Initial body weight,final weight and weight gain of mice in each group（±S）

表1　各组小鼠的初始体重、结束体重、增重（±S）Tab．1　Initial body weight,final weight and weight gain of mice in each group（±S）

组别　动物数/只　初始体重/g　P　结束体重/g　P　增重/g　P空白对照组　10　19．9±1．4　1．000　38．3±1．9　1．000　18．4±2．6　1．000模型对照组　10　19．9±1．4　－　38．3±2．4　－　18．4±2．3　－低剂量组　10　19．8±1．5　0．875　38．7±1．9　0．683　18．9±2．0　0．668中剂量组　10　19．7±1．3　0．753　40．0±2．2　0．087　20．3±3．0　0．108高剂量组　10　19．7±1．3　0．753　39．4±2．4　0．264　19．7±2．9　0．268

表2　灵芝孢子油提取物复合制剂对小鼠肝组织TG、GSH、MDA含量的影响（±S）Tab．2 Effects of Ganoderma lucidum spore oil and extract complex preparation on the content of TG,GSH,MDA in mice liver tissue（±S）

表2　灵芝孢子油提取物复合制剂对小鼠肝组织TG、GSH、MDA含量的影响（±S）Tab．2 Effects of Ganoderma lucidum spore oil and extract complex preparation on the content of TG,GSH,MDA in mice liver tissue（±S）

注：*与模型对照组比较，P＜0．05；＃与空白对照组比较，P＜0．05。Note:*Compared with the model control group,P＜0．05;＃Compared with the control group,P＜0．05．

组别　动物数/只　TG/(mmol·kg－1)　P　GSH/(mg/g·prot－1)　P　MDA/(nmol/mg·prot－1)　P空白对照组　10　113．0±19．30　0．002　3．30±0．72　0．002　1．64±0．23　0．001模型对照组　10　153．0±29．50＃　－　2．30±0．50＃　－　2．65±0．64＃　－低剂量组　10　114．8±13．90*　0．016　2．54±0．55　0．345　2．29±0．52　0．156中剂量组　10　112．8±21．68*　0．018　2．56±0．58　0．304　2．08±0．50*　0．025高剂量组　10　120．6±13．70*　0．046　2．57±0．60　0．292　2．47±0．49　0．468

3.3肝脏组织病理学检查结果

3．3．1肉眼观察

空白对照组：肝脏表面平整光滑，色泽亮呈鲜红色，质软。

模型对照组：肝脏表面有颗粒状，色泽变淡呈土黄色，质稍硬。

各剂量组：肝脏表面有均匀细颗粒，色泽呈略黄、深褐色或土黄色，质软或稍硬。

3．3．2镜检

小鼠肝脏病组织学检查结果见表3。

表3　小鼠肝脏病理组织学检查结果（±S）Tab．3　Histopathological examination of mice liver tissue（±S）

表3　小鼠肝脏病理组织学检查结果（±S）Tab．3　Histopathological examination of mice liver tissue（±S）

注：*与模型对照组比较，P＜0．05；＃与空白对照组比较，P＜0．05。Note:*Compared with the model control group,P＜0．05;＃Compared with the control group,P＜0．05．

组别　动物数/只　脂滴面积积分　P空白对照组　10　0．4±0．7　0模型对照组　10　3．2±0．8＃　－低剂量组　10　2．0±0．7*　0．001中剂量组　10　1．8±0．8*　0高剂量组　10　2．5±0．8　0．051

由表3可见，模型组动物脂滴在肝脏的分布、范围和面积积分均高于空白对照组；低、中剂量组动物的脂滴在肝脏的分布、范围和面积积分均低于模型对照组，且差异显著（P＜0．05）。

4　讨论

肝损伤是指在一系列理化因素作用下，肝细胞发生不同程度的肿胀、变性、坏死和凋亡，是各种肝病发生发展的最基本病理状态[7]。酒精是导致肝损伤的一个重要因素。研究发现，机体大量摄入乙醇后，在乙醇脱氢酶作用下大量脱氢氧化，影响三羧酸循环，并减弱脂肪酸氧化，从而影响脂肪代谢；乙醇可致α－磷酸甘油增多而促进TG合成，致使脂肪在肝细胞内沉积，同时乙醇能激活氧分子，产生的氧自由基可导致细胞膜的脂质过氧化产生MDA及体内还原型GSH的耗竭。因而TG、GSH和MDA含量常可反映体内脂质过氧化程度，间接反映体内组织、细胞损伤程度[5，8]。

灵芝是我国传统的补益中药，被历代医家视为滋补强壮、扶正固本、延年益寿之珍品。现代药理与临床研究证实，灵芝具有多方面生理活性和药理作用，尤其在保肝护肝方面具有较好的功效[9－11]。目前研究多认为其保肝功效与其清除自由基、抗氧化等作用有关。陈琼瑶[12]等的研究表明灵芝孢子粉对酒精性肝损伤具有辅助保护作用。何慧[4]等研究表明灵芝肽对酒精性肝损伤具有保护功能，其良好的保肝效果可能与其优异的抗氧化能力有关。周昌艳[5]等研究表明灵芝多糖可以提高模型小鼠的GSH、GSH-Px和SOD水平，同时降低MDA、TG水平，具有一定的预防酒精性肝损伤作用。朴日龙[13]等、李晔[14]等、黄建康[15]等的研究均表明灵芝孢子油对CCl4诱导的化学性肝损伤也具有辅助保护作用。

本文所用材料灵芝孢子油提取物复合制剂中含有全灵芝的多种功效成分，其中以灵芝多糖和三萜类为主要活性物质，本研究结果得出样品可以降低3个剂量组小鼠急性酒精肝损伤后第16小时肝组织中的TG含量和中剂量组MDA含量，且低、中剂量组小鼠的脂滴在肝脏的分布、范围和面积积分低于乙醇模型对照组。结论表明灵芝孢子油提取物复合制剂在有效地降低了酒精代谢过程中TG、MDA的产生，并减少了受损肝脏中脂肪的沉积，对酒精性肝损伤具有辅助保护的功能。灵芝的保肝作用已经被国内外学者广泛证实，且与其较强的抗氧化、清除自由基功能有关，但其抗氧化、抗自由基的具体作用环节仍有待进一步研究。

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Effects of Ganoderma lucidum Spore Oil and Extract Complex Preparation on Mice with Alcoholic Liver Injury

JIN Ling-yun1,HUANG Yang-zeng1,WU Chang-hui1,LI Ye1,CHEN Guan-min2
(1．Fujian Xianzhilou Biological Science and Technology Co．Ltd．,Research Center of Medicinal Mushroom Cultivation and Deep Processing of Local and National United Engineering,Fuzhou 350002,China;2．Fujian Center of Disease Control and Prevention,Fuzhou,Fujian 350001,China)

Effects of Ganoderma lucidum spore oil and extract complex preparation on mice with alcoholic liver injury were studied in this paper．The experiment was employed with 5 treatments,such as 0．167 g·kg－1,0．333 g·kg－1,1．00 g·kg－1dosage group,blank control and ethanol model control group．Three dosages of samples were given orally with blank control and ethanol model control groups given edible vegetable oil．30 days later,the mouse model of acute alcoholic liver injury was established by ethanol．The animals were sacrificed after 16 hours,and the livers were collected for the triglycercide(TG),glutathione(GSH),methane dicarboxylic aldehyde(MDA)measurements and liver histopathological examination．The results showed that three dosages of samples significantly reduced the TG content in mice liver tissue at the 16th hour after the alcoholic treatments while the middle dosage sample reduced the MDA content．And the ethanol model control group showed higher damage degree than the blank control group(P＜0．05)．It was concluded that G.lucidum spore oil and extract complex preparation exhibited a protective effect on acute alcohol liver injury．

Ganoderma lucidum spore oil and extract complex preparation;alcoholic liver injury;ethanol model;ICR mice

S646.9

A

1003-8310（2016）06-0034-04

10．13629/j．cnki．53－1054．2016．06．008

公益性行业（农业）科研专项的部分研究内容（201303080）。

金凌云（1985－），女，硕士，工程师，主要从事珍稀食（药）用真菌的活性物质的研究。E－mail:yanfa8＠xianzhilou．com

**通信作者：李晔（1971－），男，本科，高级工程师，主要从事灵芝等食（药）用真菌栽培、深加工及活性物质的研究。E－mail:lee＠xianzhilou．com

2016－09－10