原桃胶中1 株芽孢杆菌的分离鉴定及其主要抗菌物质

贾 锐，陆兆新

（南京农业大学食品科技学院，江苏 南京 210095）

原桃胶中1 株芽孢杆菌的分离鉴定及其主要抗菌物质

贾 锐，陆兆新*

（南京农业大学食品科技学院，江苏 南京 210095）

从天然原桃胶分离到1 株产抑菌活性物质的芽孢杆菌TJ12。其发酵产物对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、藤黄微球菌（Micrococcus luteus）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）和串珠镰刀菌（Fusarium moniliforme）有抑菌活性。结合菌落形态、生理生化指标、16S rRNA序列和gyrB序列将TJ12菌株鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。通过硫铵沉淀、有机溶剂萃取、羟丙基葡聚糖凝胶、高效液相色谱分离纯化，得到其主要活性物质。该物质对pH值、温度和3 种蛋白酶（胰蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶）有较好的稳定性。经电喷雾电离质谱分析，初步鉴定该株地衣芽孢杆菌TJ12的主要抗菌物质为杆菌肽A。

原桃胶；地衣芽孢杆菌；抗菌物质；分离纯化；鉴定；杆菌肽A

抗菌肽（antimicrobial peptide）是一类广泛存在于自然界生物体中的小肽类物质，它是机体先天性免疫系统的重要组成部分。抗菌肽具有独特杀菌机制和抗菌广谱性，不易造成病原菌的耐药性。一些抗菌肽对肿瘤细胞有广谱杀灭活性效果，为癌症患者提供了一类新型的抗癌药物[1-2]，其在水产养殖业[3]、饲料添加剂[4]、食品防腐剂[5]等方面也具有很大的应用价值。目前抗菌肽已经成功应用在马铃薯、烟草、水稻等的病虫害防治中[6]。由于其在医药、养殖、食品、生物防治等方面有很高的应用价值，抗菌肽的研究备受人们关注和青睐。

微生物来源的抗菌肽是抗菌肽家族中的重要一员，它能特异性杀死竞争菌而对宿主本身无害，包括环形肽、糖肽和脂肽，如短杆菌肽、杆菌肽、多黏菌素和乳酸链球菌肽等[6]。其中芽孢杆菌（Bacillus spp.）是研究较多的抗菌肽产生菌，其在自然界分布非常广泛，生理特性丰富多样，是土壤和植物微生态优势种群之一。目前研究较多的芽孢杆菌有：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、多黏芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）和解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）等[7-9]。

桃树胶是桃树树干受机械创伤（如虫咬、切伤等）或病菌感染致病后分泌出来的胶质半透明物质，有较好的保健功能[10-11]。原桃胶是在树上自然风干未经除杂的桃胶。国内外涉及桃胶的文献多数是关于防治病虫害、提高树体抵抗力以减少桃胶分泌等方面[12]，鲜见桃胶中相关微生物及抗菌肽等抑菌活性物质的报道。本实验从原桃胶中分离出一株具抑菌活性的芽孢杆菌，并对这株芽孢杆菌主要抗菌物质进行研究，以期为人们更深入地开发、利用相关资源提供一定的依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 菌种

芽孢杆菌TJ12系从江苏省农业科学院桃树林的原桃胶中分离得到。

指示细菌：藤黄微球菌（Mirococcus luteus）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus Rosenbach）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）、大肠杆菌（Escherichia coli）；指示真菌：串珠镰刀菌（Fusarium moniliforme）、黑曲霉（Aspergillus nige）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、葡枝根霉（Rhizopus stolonifer）。以上均为南京农业大学酶工程实验室保存菌株。

1.1.2 试剂

LB培养基、营养琼脂培养基、马铃薯浸汁培养基按照文献[13-14]中的方法配制；糖发酵培养基、柠檬酸盐培养基等的配制均参照《常见细菌系统鉴定手册》[15]。

菌株DNA提取试剂 上海生物工程有限公司；酵母提取物和胰化蛋白胨 英国Oxoid公司；革兰氏染色试剂盒 杭州百思生物技术有限公司；Taq DNA聚合酶、dNTP 日本TaKaRa公司；细菌基因组提取试剂盒美国Omega公司；其他试剂均为国产分析纯。

1.1.3 仪器与设备

Centrifuge 5804R冷冻高速离心机 德国Eppendorf公司；PTC-100TM 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）仪 美国MJ Research公司；全温摇瓶柜 太仓实验设备厂；HT6029超净工作台 苏州进化设备有限公司；BL-220H电子精密天平 日本岛津公司；Orion 3 STAR pH计 美国Thermo公司；Eclipse 80i光学显微镜 日本Nikon公司；UltiMate 3000反相高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）仪 美国戴安公司；基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 德国Bruker Daltonics公司；BS-100A自动分布收集仪、HL-2B数显恒流泵 上海沪西分析仪器厂。

1.2 方法

1.2.1 抑菌活性物质产生菌的筛选

初筛：取10 g天然刮取的原桃胶，放入装有100 mL生理盐水的锥形瓶中，37 ℃条件下180 r/min培养6 h。培养液80 ℃水浴处理20 min，制成一定稀释梯度的菌悬液，分别取0.1 mL于LB平板涂布，37 ℃恒温培养12 h。分别将得到的单菌落采用无菌牙签分散转接于另一无菌LB平板，37 ℃条件下培养36 h。用无菌打孔器于生长菌落旁取出5 mm直径的琼脂块，贴放于含有指示菌的平板表面，37 ℃条件下培养12 h，观察抑菌圈大小。

复筛：将经初筛得到的抑菌圈较大的菌株划线，将单菌落接种液体LB培养基，37 ℃条件下180 r/min培养36 h。发酵液4 ℃、14 000 r/min离心15 min，上清液经0.22 μm的微孔滤膜过滤除菌，将除菌后的发酵上清液通过平板打孔法检测抗菌物质活性。

抑菌活性检测：各取50 μL过膜除菌后的不同样品加到5 mm的抑菌平板孔径中，37 ℃培养12 h以上，根据抑菌圈的大小判断供试菌株的抑菌活性。每个供试菌株设3 次重复。将得到的抑菌活性最好的菌株保藏菌种。

1.2.2 菌株鉴定

1.2.2.1 形态学、生理生化鉴定

参照《伯杰细菌鉴定手册》[15]及《常见细菌系统鉴定手册》[16]对菌株TJ12进行革兰氏染色、芽孢染色、运动性分析及生理生化实验（生长温度、耐酸碱度、运动性、耐盐性、接触酶、淀粉水解、V.P、甲基红、硝酸盐还原、碳源利用、硫化氢）[15-20]。

1.2.2.2 基于16S rDNA和gyrB基因序列的分子生物学鉴定

对抑菌活性较强、抗菌谱较广的菌株进行基因组DNA提取、16S rRNA基因及gyrB基因PCR扩增，割胶回收，回收产物同pMD-19载体连接，连接产物转化宿主细胞DH5α，筛选得到的阳性克隆由南京金斯瑞生物科技有限公司测序。测序所得16S rRNA序列及gyrB基因校对后，与NCBI的GenBank数据库进行BLAST分析，根据序列同源性，选取不同的模式菌株，采用MEGA（Ver. 5.0）软件的Neighbor-Joining phylogenetic tree构建系统发育树，确定菌株的种属关系[21-23]。

1.2.3 抗菌物质分离纯化[24-28]

1.2.3.1 硫酸铵分级沉淀[26,29]

分别采用饱和度20%～90%的硫酸铵梯度对发酵上清液（1.2.1节复筛步骤得到的上清液）进行分级沉淀处理，沉淀离心，超纯水复溶，以藤黄微球菌为指示菌，琼脂扩散法检测抑菌活性[19]，确定最适硫酸铵分级沉淀条件。在合适条件下收集足量沉淀，超纯水复溶，做进一步纯化处理。每个处理重复3 次。

1.2.3.2 有机溶剂萃取

分别用2 倍体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对抗菌物质水溶液进行萃取，选取最适有机溶剂。将最适有机溶剂下萃取得到的有机相45 ℃旋转蒸发浓缩，沉淀甲醇溶解，做进一步纯化处理。每个处理重复3 次[30]。

1.2.3.3 LH-20分离纯化

将Sephadex LH-20充分溶胀后装柱（1.6 cm× 120 cm），80%甲醇平衡2 个柱体积后，取1 mL甲醇复溶样品进行SephadexLH-20柱分离，研究最适分离条件。馏分收集后，以藤黄微球菌为指示菌，琼脂扩散法检测其抑菌活性[30]。

1.2.4 抗菌物质稳定性研究

将经LH-20纯化后收集到的足量活性物质旋蒸干燥后，超纯水复溶作为样品，探究其稳定性。所有稳定性实验以藤黄微球菌作指示菌，琼脂扩散法检测其抑菌活性，方法同复筛[26,31]。

1.2.4.1 pH值稳定性

取5 mL样品6 份，分别用1 mol/L HCl和1 mol/L NaOH溶液将其pH值调至2、4、6、8、10、12，室温处理10 h，测活性前将pH值调回7，以未经处理的样品为对照（CK），测试抑菌活性，每个处理重复3 次。

1.2.4.2 热稳定性

处理1：取5 mL样品5 份，分别于20、40、60、80、100 ℃水浴处理3 h，121 ℃条件下处理15 min，以未经处理的样品为对照（CK），测试抑菌活性，每个处理重复3 次。

处理2：取5 mL样品5 份，分别于20、40、60、80、100 ℃水浴处理6 h，121 ℃条件下处理35 min，以未经处理的样品为对照（CK），测试抑菌活性，每个处理重复3 次。

1.2.4.3 蛋白酶稳定性

胰蛋白酶：首先用pH 8.0的磷酸缓冲液将胰蛋白酶配成质量浓度为0.25、0.50、1.00、2.00、2.80 mg/mL的酶液。取7 支刻度试管，每支试管中添加0.5 mL抗菌提取物，1～5号管中加入以上5 种不同质量浓度酶液2 mL。6号管（CK1）不加酶液，仅加入2 mL磷酸缓冲液，作为抗菌物质经胰蛋白酶处理后活性是否发生变化的参照。1～6号管置37 ℃水浴6 h，100 ℃条件下水浴3 min终止酶活。7号管（CK2）不加酶液和缓冲液pH值调到8.0。实验重复3 次。

蛋白酶K：处理方法与胰蛋白酶相同，实验重复3 次。

胃蛋白酶：胃蛋白酶用pH 2.0磷酸缓冲液配制，1～5号管中加入的胃蛋白酶质量浓度依次为50、100、150、200、250 μg/mL，6号管（CK1）中仅加入缓冲液。1～6号管经过水浴处理、终止酶活性后，需将pH值调回7.0。7号管（CK2）不进行任何处理，其他处理方法与胰蛋白酶相同。实验重复3 次。

1.2.5 活性物质全波长扫描、反相HPLC法检测及电喷雾离子化质谱（electrospray ionization-mass spectrometry ESI-MS）分析[32-34]

将LH-20收集的活性组分用UV-2450分光光度计于190～400 nm波长范围内进行全波长扫描，以确定其特征吸收峰并作为反相HPLC法的检测波长。反相HPLC条件为：Agilent HC-C18柱（4.6 mm×250 mm，0.5 μm）；进样量20 μL；柱温35 ℃；紫外检测波长210 nm；流速0.8 mL/min；检测时间50 min；流动相A相为水-0.1%三氟乙酸，B相为乙腈-0.1%三氟乙酸（按10 min：15% A，85% B；30 min：30% A，70% B；50 min：50% A，50% B程序分离）。样品和流动相在上柱前都经0.22 μm微孔滤膜过滤。收集经反相HPLC分离得到的各个峰，于台式快速离心浓缩干燥器上浓缩后以藤黄微球菌为指示菌测定各个峰的抑菌活性。收集主要活性物质，再次用反相HPLC检测活性物质纯度，以确保样品的纯度适合进行ESI-MS分析。

2 结果与分析

2.1 菌株的筛选

经过初筛与复筛，得到一株抑菌谱较广的菌株TJ12，其发酵上清液对革兰氏阳性菌抑菌效果较好，对部分真菌有一定的抑菌效果（表1）。

表1 菌株TJ12发酵液对指示菌抑菌作用Table 1 Antibacterial activity of the fermentation broth from strain TJ12

由图1可知，菌株TJ12发酵上清液对藤黄微球菌抑菌效果较好，对金黄色葡萄球菌及蜡样芽孢杆菌有一定抑菌效果，但对大肠杆菌无明显抑菌效果。发酵上清300 倍浓缩液对串珠镰刀菌有较好的抑菌活性，对黑曲霉和葡枝根霉抑菌效果不明显，对酿酒酵母无明显抑菌效果。说明菌株TJ12对革兰氏阳性菌抑菌效果较明显，对部分真菌有一定抑菌效果。

图1 菌株TJ12发酵液对指示菌抑菌作用Fig. 1 Photographs showing the antibacterial activity of the fermentation broth from strain TJ12

2.2 菌株TJ12的分类鉴定

2.2.1 形态特征

菌体短杆状、革兰氏染色阳性、芽孢中生、菌落米黄色（图2未显示）、饱满凸起、表面湿润有光泽，菌落形态随培养时间延长变化，早期菌落边缘光滑整齐，12 h后菌落四周边沿逐渐出现凸起，含大量透明黏液，48 h后菌落中间皱起，边缘仍存在光滑饱满黏液泡（图2）。

图2 菌株TJ12的培养特征Fig. 2 Cultural characteristics of strain TJ12

2.2.2 生理生化特征

表2 菌株TJ12生理生化特性Table 2 Physiological and biochemical characteristics of strain TJ12

菌株TJ12具有运动性；接触酶反应、V.P实验、淀粉水解、硝酸盐还原、柠檬酸盐利用、甲基红实验、H2S实验呈阳性；菌株能分解利用大部分碳源，其中α-乳糖、山梨醇、肌醇利用速率较慢（大于5 d观察到阳性结果），但不能利用鼠李糖、棉子糖；其耐盐性为质量分数0～10% NaCl范围，但质量分数10%时菌体生长很缓慢；其生长pH值范围为5～9；生长适应温度范围为28～50 ℃（表2）。

综合以上培养特征及生理生化特征，并根据《常见细菌系统鉴定手册》和《伯杰细菌鉴定手册》，初步将TJ12菌株鉴定为芽孢杆菌属的地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）[15-16]。

2.2.3 16S rRNA、gyrB序列分析

图3 以16S rRNA（A）和gyrB（B）序列为基础的系统发育树Fig. 3 Phylogenetic relationship based on 16SrRNA (A) and gyrB (B) sequences

16S rRNA序列测序后采用NCBI数据库，通过BLAST比对，菌株TJ12的16S rRNA序列与GenBank中的空气芽孢杆菌（Bacillus aerius）、索诺拉沙漠芽孢杆菌（Bacillus sonorensis）及地衣芽孢杆菌16S rRNA序列相似性均达99%。再通过gyrB序列与NCBI数据库进行BLAST比对，菌株TJ12的gyrB基因与数据库中地衣芽孢杆菌相似度达到100%（图3）。

综合TJ12菌株的生理生化特征、形态学特征、16S rRNA和gyrB基因序列同源性分析结果，将菌株TJ12鉴定为地衣芽孢杆菌[15-16,35-39]。

2.3 抑菌活性物质分离纯化及鉴定

2.3.1 硫酸铵分级盐析

当硫酸铵饱和度在20%～90%之间时，沉淀溶解液均存在抑菌活性；饱和度达到70%时，沉淀溶解液的活性达到最大，但上清液中仍含有较多活性物质；当饱和度达到80%～90%时，上清液中残留的活性物质已较少且降低幅度变缓。硫酸铵饱和度小于20%时沉淀中存在较多杂蛋白，盐浓度过高对后续实验造成不便，参照文献[28]选择在20%～80%硫酸铵饱和度下沉淀析出的抑菌活性物质作进一步纯化处理（图4）。

图4 不同饱和度硫酸铵沉淀抑菌活性Fig. 4 Antimicrobial activity of precipitates with different saturation degrees of ammonium sulfate

2.3.2 有机溶剂萃取

表3 不同有机溶剂萃取相抑菌效果Table 3 Antimicrobial activity of extraction phases of different organic solvents

3 种有机溶剂极性依次为石油醚＜乙酸乙酯＜正丁醇，石油醚、乙酸乙酯均不能有效地提取抗菌物质，而正丁醇能将活性物质完全萃取，说明该活性物质为极性物质（表3）。故选取正丁醇作为有效的萃取试剂。

2.3.3 Sephadex LH-20分离纯化

图5 Sephadex LH-20分离抗菌物质Fig. 5 Purification of the antimicrobial substance by Sephadex LH-20 column chromatography

65 份组分中，第22～25管组分有抑菌活性，24管组分的抑菌活性最高（图5）。收集足量22～25管组分浓缩。以超纯水复溶样品探究物质稳定性；甲醇复溶样品进行全波长扫描，并在最大吸收波长下研究反相HPLC分析条件以进行纯度检测。

2.4 抗菌物质稳定性

图6 菌株TJ12抗菌物质的pH值（A）、温度（B）和蛋白酶（C）稳定性Fig. 6 Stability of the antimicrobial substance produced by TJ12

菌株TJ12抗菌物质在经过pH 2～12处理10 h都有抑菌活性，说明该抗菌物质的pH值稳定性较好。实验中发现pH 2～4的条件下溶液会出现少量沉淀，而pH 6～10环境下，物质能完全溶解，说明该物质pH值稳定性较好，但偏中性或碱性环境下溶解性更好（图6A）。该物质在低于100 ℃条件下处理6 h，抑菌活性都比较稳定，沸水浴中处理6 h后活性仅略有降低，121 ℃处理35 min后才能彻底失活。说明该物质具有较好的温度稳定性（图6B）。抗菌物质随着胰蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶质量浓度的增加，处理6 h后的抗菌物质活性基本没有变化，说明该物质有较好的蛋白酶稳定性（图6C）。综上，菌株TJ12主要抗菌物质具有较好的稳定性，为其实际应用提供了理论依据。

2.5 活性物质全波长扫描

抑菌活性物质在约210 nm和255 nm波长处都有吸收波长，其中210 nm为最大吸收波长（图7），选择以210 nm作为反相HPLC检测波长。

图7 TJ12抗菌物质全波长扫描图谱Fig. 7 Full-wavelength scanning spectrum of the antimicrobial substance from TJ12

2.6 反相HPLC检测与分离

经Sephadex LH-20分离后，在210 nm波长处按1.2.5节方法进行反相HPLC分离检测。经抑菌实验检测其主要活性峰为峰1（图8），通过反相HPLC分离收集足量活性单峰1，浓缩后用于质谱分析。

图8 反相HPLC检测抗菌物质Fig. 8 RT-HPLC separation of the antifungal substance produced by TJ12

2.7 活性物质ESI-MS鉴定

多数多肽类化合物带有多电荷，电荷数和丰度常不稳定，质谱将其碎裂后得到的可能是带有2 个或者更多电荷的离子。图9为TJ12主要抑菌活性物质ESI-MS图，结合相关文献，将TJ12主要抑菌活性物质鉴定为杆菌肽A（相对分子质量1 422）[40-42]，图谱中还可以看到出自于杆菌肽A带3 个正电荷的分子离子峰m/z 475和带2 个正电荷的分子离子峰m/z 712，其中带两个正电荷的分子离子峰丰度较强[43-44]。杆菌肽属多肽类抗生素，由地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌代谢产生，是由12 个氨基酸组成含有噻唑环的多肽复合体，它是多种氨基酸结合而成的多肽，杆菌肽A是其最主要的成分[42]。杆菌肽由于其高效、无毒副作用、无残留、不产生交叉耐药性及抗药性等优点被广泛应用于畜禽养殖业，其在饲料添加剂方面也有广泛的应用前景[45-46]。

图9 菌株TJ12抗菌物质的ESI-MS 图Fig. 9 ESI mass spectra of the antimicrobial substance produced by TJ12

3 讨 论

利用细菌、真菌分泌的抗菌物质，尤其是肽类物质，研制的抗菌药物，为医学、农牧业和水产养殖业提供无残留、无环境污染、不产生耐药性问题的新一代抗菌药物，是现代研究的热点。但目前人们对其原材料尤其是相关微生物的抑菌活性成分没有研究。

本研究从天然桃树上刮取原桃胶作为研究对象，筛选分离得到菌株TJ12，其发酵上清液对藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌等革兰氏阳性菌，以及串珠镰刀菌等真菌具有抑菌效果，但对革兰氏阴性菌几乎没有抑菌效果。用传统细菌学分类方法对菌株TJ12的特性进行鉴别，结合形态特征、生理生化特征以及16S rRNA基因序列和gyrB基因序列分析，菌株TJ12被鉴定为地衣芽孢杆菌。该株菌培养过程中，固体平板上形态特别，菌落四周产生大量黏稠泡状突起，液体发酵液极度黏稠，推测其生长过程中分泌大量糖类物质，不确定此生理特征与其所生长的桃树胶环境是否相关。对地衣芽孢杆菌胞外多糖功能有过初步报道，但研究尚不成熟，鉴于多糖具有抗氧化、增强免疫应答、抵抗有害菌、促进有益菌生长的作用，从而使机体增强抗肿瘤、抗衰老等能力，该株桃树胶来源的地衣芽孢杆菌TJ12具备多糖方向的研究潜力[47-48]。

TJ12菌株在生长发育过程中，能够分泌抗菌物质。硫酸铵分级沉淀研究表明，20%～80%硫酸铵饱和度下析出的活性物质可用作进一步萃取处理。通过有机溶剂萃取实验研究发现，极性较大的正丁醇萃取效果较好。用Sephadex LH-20进一步分离纯化出抑菌活性物质，检测其在210 nm波长处有最大吸收波长。

抗菌物质稳定性实验研究中，所设置的pH值和温度范围较广，在pH 2～10范围内仍保持较好的稳定性，120 ℃条件下处理35 min才能彻底失活。同时对蛋白酶设置较宽的作用浓度范围，分别通过3 种不同蛋白酶（胰蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶）的处理，抗菌物质活性几乎没有变化。说明该物质具备较好的稳定性。

最终通过反相HPLC分离纯化、ESI-MS分析，结合相关文献，推测其主要活性物质为杆菌肽A，其相对分子质量为1 422，对革兰氏阳性菌抑菌效果较好。研究表明，杆菌肽为一种多肽类抗生素，可特异地抑制细菌胞壁合成阶段的脱磷酸化作用，影响磷脂的转运和向细胞壁支架输送黏肽，抑制细菌细胞壁的合成，并损伤细胞膜，导致离子和氨基酸外流而使细菌死亡[42]。杆菌肽对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎球菌等革兰氏阳性菌有强大的抑菌活性，对某些革兰氏阴性球菌、放线菌和真菌有一定的活性[42,49-50]。

本研究为进一步利用原桃胶这种资源奠定了一定理论基础。该菌株的代谢产物及其抗菌物质有望在疾病治疗、生物防治、饲料防腐等领域进行应用，是一株有应用价值的抗菌物质产生菌。同时该菌株的筛选、鉴定、物质分离方法也为相关物质的研究提供一定的参考。

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Isolation and Identification of a Bacillus from Peach Tree Gum and Its Main Antimicrobial Substance

JIA Rui, LU Zhaoxin*
(College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)

A strain of Bacillus named as TJ12 was isolated from peach tree gum, which could produce antibacterial substances. Its fermentation products had antibacterial activity against Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Bacillus cereus and Fusarium moniliforme. Through colony morphology, physiological and biochemical characterization and 16S rRNA and gyrB sequence analysis, the strain was identified as Bacillus licheniformis. The major bioactive substance was separated from its fermentation supernatant and purified by ammonium sulfate precipitation, organic solvent extraction, Sephadex LH-20 column chromatography and high performance liquid chromatography. The major bioactive substance had strong resistance to pH, temperature, and three proteases (trypsin, proteinase K, and pepsin). By electrospray ionization-mass spectrometry analysis, we preliminarily identified this substance as bacitracin A.

peach tree gum; Bacillus licheniformis; antimicrobial substances; separation and purification; identification; bacitracin A

10.7506/spkx1002-6630-201621024

TS201.3

A

1002-6630（2016）21-0136-08

贾锐, 陆兆新. 原桃胶中1 株芽孢杆菌的分离鉴定及其主要抗菌物质[J]. 食品科学, 2016, 37(21): 136-143. DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201621024. http://www.spkx.net.cn

JIA Rui, LU Zhaoxin. Isolation and identification of a Bacillus from peach tree gum and its main antimicrobial substance[J]. Food Science, 2016, 37(21): 136-143. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201621024. http://www.spkx.net.cn

2016-01-02

国家自然科学基金面上项目（31271936）

贾锐（1990—），女，硕士研究生，研究方向为食品科学与工程。E-mail：13776618980@163.com

*通信作者：陆兆新（1957—），男，教授，博士，研究方向为食品生物技术。E-mail：fmb@njau.edu.cn