维生素D受体基因位点单核苷酸多态性与梅毒易感性相关研究

胡文龙，张婷婷，刘仲伦，任 虹

维生素D受体基因位点单核苷酸多态性与梅毒易感性相关研究

胡文龙，张婷婷，刘仲伦，任 虹

目的探讨维生素D受体（VDR）基因Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I位点多态性与梅毒易感性之间是否存在关联。方法应用质谱分析的方法检测106例梅毒患者及134名健康对照者VDR基因Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I位点基因型及等位基因分布频率。结果病例组和对照组间VDR基因Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I 4个基因位点基因型分布无明显差异（Fox I: P=0.922；Bsm I: P=0.460；Apa I: P=0.287；Tap I: P=0.093）；两组间等位基因分布也均无统计学差异（Fox I C vs. T: P=0.742；Bsm I C vs. T: P=0.345；Apa I G vs. T: P=0.113；Tap I A vs. G: P=0.345）；两组间在隐性遗传模型和显性模型下比较也未发现有统计学差异（Fox I CC vs. CT+TT: P=0.687; Fox I TT vs. CT+CC: P=0.905；Bsm I CC vs. CT+TT: P=0. 336; Apa I TT vs. GT+GG: P=0.438; Apa I GG vs. GT+TT: P=0.123；Tap I AA vs. AG+GG: P=0.204）。结论VDR基因Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I位点多态性与梅毒易感性之间无显著相关。

梅毒；VDR基因；单核酸多态性；遗传易感性

胡文龙

梅毒是由苍白螺旋体感染所致的性传播疾病，近年来我国梅毒发病呈明显上升趋势[1,2]。梅毒的免疫发病机制尚不明确，人体感染梅毒螺旋体后，体内发生一系列复杂的细胞免疫和体液免疫改变，但不同的患者在临床表现、疾病进程及转归上有较大差异，说明人体对梅毒感染存在遗传易感性。维生素D受体（vitamin D receptor，VDR）基因位于第12号染色体长臂，是维生素D发挥作用的效应基因，具有重要的生理作用。近年来研究发现，VDR基因多态性与多种感染性疾病的发生密切相关，本研究初步探讨VDR基因Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I位点多态性与梅毒易感性之间的关系。

1　对象与方法

1.1研究对象

1.1.1患者组选自2013年 7月—2014年10月在我科门诊确诊的106例梅毒患者，甲苯胺红未加热血清试验（TRUST）和梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）均为阳性，TRUST滴度1:1～1:128；人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗体检测阴性；通过询问病史排除与梅毒无关的其他疾病；所有个体均无血缘关系。

1.1.2对照组 随机选取我科门诊健康体检者134名，TRUST、TPPA及HIV检测均为阴性；通过询问病史排除其他疾病；所有个体均无血缘关系。

1.2方法

1.2.1基因组DNA提取采用基因组 DNA纯化试剂盒（天根生化科技公司，北京），按试剂盒说明书进行操作。所得DNA样本 -80 ℃保存。

1.2.2VDR基因检测Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I位点多态性检测 PCR扩增引物见表1，引物由深圳华大基因公司合成。利用MassARRAY system（Agena公司，美国）对VDR基因Fox I（rs2228570）、Bsm I（rs1544410）、Apa I（rs7975232）和Tap I（rs731236）位点进行基因分型。

1.3统计学方法

采用SPSS17.0软件对不同组别基因型及等位基因频率进行χ2检验，通过计算Hardy-Weinberg平衡判断样本的代表性。

2　结果

2.1VDR Fox I基因多态性与梅毒易感性分析

患者组与对照组间基因型分布无明显统计学意义（χ2=0.162，P=0.922）；患者组C、T等位基因频率分别为0.590和0.410，对照组C、T等位基因频率分别为0.604和0.396，两组间等位基因分布无统计学差异(χ2=0.109，P=0.742)；在隐性遗传模型和显性遗传模型下，患者组和对照组均无统计学差异（CC vs. CT+TT：χ2=0.162，P=0.687；TT vs. CT+CC：χ2=0.014，P=0.905）。对照组基因型分布符合Hard-Weinberg平衡（P=0.152）(表2)。

2.2VDR Bsm I基因多态性与梅毒易感性分析

病例组与对照组组间基因型分布差异无统计学意义（P=0.460）；病例组C、T等位基因频率分别为0.972和0.028，对照组C、T等位基因频率分别为0.955和0.045，两组间等位基因频率差异无统计学差异(χ2=0.890，P=0.345)；在显性遗传模型下，病例组和对照组均无统计学差异（CC vs. CT+TT：χ2=0.926，P=0. 336）。对照组基因型分布符合Hard-Weinberg平衡（P=0.587）（表2）。

表1　扩增引物序列

表2　患者组、对照组VDR基因型及等位基因分布频率比较

2.3VDR Apa I基因多态性与梅毒易感性分析

病例组与对照组组间基因型分布无明显统计学意义(χ2=2.494，P=0.287)；病例组G、T等位基因频率分别为0. 821和0.179，对照组G、T等位基因频率分别为0.761和0.239，两组间无统计学差异(χ2=2.509，P=0.113)；在隐性遗传模型和显性遗传模型下，病例组和对照组均无统计学差异（TT vs. GT+GG: χ2=0.601，P=0.438；GG vs. GT+TT：χ2=2.384，P=0.123）。对照组基因型分布符合Hard-Weinberg平衡（P=0.865）(表2)。

2.4VDR Tap I基因多态性与梅毒易感性分析

病例组与对照组组间基因型分布无明显统计学意义（P=0.093）；病例组A、G等位基因频率分别为0.972和0.028，对照组A、G等位基因频率分别为0.955和0.045，两组间无统计学差异（χ2=0.890，P=0.345）；在隐性遗传模型下，病例组和对照组均无统计学差异（AA vs. AG+GG：χ2=1.615，P=0.204）。对照组基因型分布符合Hard-Weinberg平衡（P=0.587）（表2）。

3　讨论

VDR其配体为维生素D，维生素D作为一种甾体激素，在转化为1,25（OH）2D3后发挥免疫调节作用[3,4]。VDR可以直接影响干扰素（IFN）-γ的分泌，进而抑制Th1细胞的功能[5]，促进白细胞介素（IL-4）的分泌，进而促进Th2细胞的分化和功能，还可以诱导C/EBP蛋白的表达，进而抑制Th17 细胞的功能[6]。Bruce等[7]研究发现VDR基因敲除后CD4+T淋巴细胞更易分化为Th17效应细胞，且分泌IFN-γ和IL-17的量增加近2倍。此外，1,25（OH）2D3可以产生诱导调节性T淋巴细胞（Treg），而调节性T淋巴细胞通过分泌IL-10和转化生长因子（TFG）-β等抑制效应性T淋巴细胞的功能。Yu和Cantorna[8]研究发现VDR可导致NKT细胞发育终止，引起胸腺及外周NKT细胞的缺失。人类VDR基因多态性位点主要位于第2外显子、第8内含子和第9外显子上，分别为Fox I（rs2228570）、Bsm I（rs1544410）、Apa I（rs7975232）和Tap I（rs731236）。Fox I位点多态性位于第2外显子区第1个起始密码子上，T→C变异导致翻译产生两种不同的蛋白而引起不同的生物学功能。Tap I位点位于第9外显子区，T→C变异为同义突变，并不改变氨基酸的顺序。Bsm I和Apa I均位于第8内含子区。近年来研究发现，VDR基因多态性与众多感染性疾病相关。Huang等[9]和Xu等[10]通过荟萃分析的方法均发现Fox I多态性与结核杆菌易感性有关。Wu等[11]研究发现VDR基因多态性与丙型肝炎病毒（hepatitisc，HCV）易感性有关，而Cusato等[12]发现VDR基因多态性可影响部分亚型HCV感染治疗的疗效。Torres等[13]研究发现VDR基因多态性与HIV易感性有关，并且可影响获得性人免疫缺陷综合征（aequired immunodeficiency syndrome，AIDS）的发展进程。

梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的慢性性传播疾病，宿主的免疫状态与梅毒的归转密切相关[14]。梅毒的免疫反应主要包括体液免疫和细胞免疫，体液免疫的保护作用较弱，由T淋巴细胞介导的细胞免疫对梅毒的感染、转归和预后产生有重要的影响[15]。目前研究发现 T 淋巴细胞亚群主要包括 Th1、Th2、Th17和Treg 等，其分泌的多种细胞因子具有特定的免疫调节和杀伤功能，在机体抗梅毒螺旋体感染的过程中发挥着重要作用，有多项研究表明梅毒的发病与T淋巴细胞亚群失衡密切相关[16,17]。

目前对梅毒的易感基因报道较少，鉴于梅毒的发病机制和VDR基因的生物学功能以及VDR基因在其他感染性疾病易感性中的作用，笔者首次探索了VDR 基因多态性与梅毒易感性之间的关系。本研究发现Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I 4个基因位点基因型分布在患者组和对照组无统计学差异，进一步做了等位基因及显性遗传模型和隐性遗传模型分析，均未发现两组间存在统计学差异。既往研究发现，VDR基因多态性可通过影响树突状细胞和巨噬细胞的功能与部分感染性疾病易感性有关[13]，而本次研究提示VDR基因Fox I、Bsm I、Apa I和Tap I 4个位点多态性与梅毒易感性无相关性，其原因可能为梅毒螺旋体感染的免疫机制与其他感染性疾病之间存在差异，VDR在梅毒螺旋体感染中的作用特异性可能不强。但是，由于本次研究纳入样本较少，可能使结果产生偏移，还有待扩大样本进一步研究。

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（本文编辑耿建丽）

Association of vitamin D receptor gene single nucleotide polymorphism with human susceptibility to syphilis

HU Wen-long，ZHANG Ting-ting，LIU Zhong-lun，et al
Department of Dermatology, Xuzhou Medical University Affiliated Lianyungang Municipal Frist People Hospital, Lianyungang 222002, China

Objective To explore the association of vitamin D receptor (VDR) gene Fox I, Bsm I, Apa I and Tap I single nucleotide polymorphism with human susceptibility to syphilis. Methods The study recruited 106 patients with syphilis and 134 health volunteers as the normal control. The Fox I, Bsm I, Apa I and Tap I single nucleotide polymorphism of VDR gene were detected in all subjects by MassArray system. Results No significant difference was found in genotypic frequencies of the 4 SNPs (Fox I, Bsm I, Apa I and Tap I) between the two groups (Fox I: P=0.922; Bsm I: P=0.460; Apa I: P=0.287; Tap I: P=0.093). The allelic frequencies of these SNPs also showed no significant difference between the two groups (Fox I C vs. T: P=0.742; Bsm I C vs. T: P=0.345; Apa I G vs. T: P=0.113; Tap I A vs. G: P=0.345). Furthermore, these 4 SNPs in the recessive model or dominant model showed no significant difference between the two groups (Fox I CC vs. CT+TT: P=0.687; Fox I TT vs. CT+CC: P=0.905; Bsm I CC vs. CT+TT: P=0. 336; Apa I TT vs. GT+GG: P=0.438; Apa I GG vs. GT+TT: P=0.123; Tap I AA vs. AG+GG: P=0.204). Conclusion The Fox I, Bsm I, Apa I and Tap I single nucleotide polymorphism of VDR gene may be not associated with the susceptibility to syphilis.

Syphilis；Vitamin D receptor gene；Single nucleotide polymorphism；Genetic susceptibility [J Pract Dermatol, 2016, 6(5):293-295]

R759.1

A

1674-1293(2016)05-0293-03

10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20160502

连云港市科技局基金资助项目（SH1409）；连云港市卫生局基金资助项目（SJ1307）

222002连云港，徐州医科大学附属连云港市第一人民医院皮肤科（胡文龙，张婷婷，刘仲伦，任虹）

胡文龙，硕士，主治医师，研究方向：遗传性皮肤病，E-mail: lyghuwl@163.com

任虹，E-mail: lygrenh@163.com

（2016-06-16

2016-08-24）