超声辅助法浸提荷叶中黄酮类化合物研究

刘宗睿 于红卫

摘 要：该文利用超声辅助法提取荷叶中黄酮类化合物，并用分光光度法测定所提取的黄酮类化合物的含量，探究了提取溶剂中乙醇的含量、荷叶质量与提取溶剂的体积比（料液比）、超声辅助浸提时间变化及浸提重复次数等因素对荷叶中黄酮类化合物提取率的影响情况。通过研究确定了超声辅助浸提荷叶中黄酮类化合物的控制条件为：溶剂中乙醇的含量为60%，荷叶质量与提取溶剂的体积比为1∶25（g/mL），浸提次数为3次，超声辅助浸提时间控制25min。在该控制条件下，荷叶中黄酮类化合物的提取率为4.81%。

关键词：荷叶；黄酮类化合物；超声提取

中图分类号 TS255 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）19-0035-03

Abstract：To study the optimal conditions of flavones extraction from lotus leaf by ultrasonic.The content of flavones in lotus leaf was determined by spectrophotography.The effects of ethanol concentration，solid-liquid ratio，ultrasonic time and extraction times on the extraction rate of flavonoids in lotus leaf were investigated.The optimum extraction conditions were as follows： ethanol concentration 50%，solid-liquid ratio 1∶20（g/mL），extraction 3 times，ultrasonic extraction time 25min.Under the optimum extraction conditions，the extraction rate of flavonoids from lotus leaf was 4.81%.

Key words：Lotus leaf；Flavonoids；Ultrasonic extraction

荷叶是睡莲植物莲的干燥叶片，具有清热解毒、升发清阳、凉血止血的功效，以及清心火、平肝火、降肺火、降压利尿作用，在食用、药用两方面均有广泛的应用[1-2]。据报道，荷叶中含有多种具有生物活性成分，如多酚、生物碱、黄酮类化合物等，大量研究表明，荷叶中黄酮类化合物具有显著的调脂作用、抗病毒作用、润肤美容作用、抗氧化、抗衰老、清除自由基作用等[3-4]。荷叶资源丰富、材料易得，为了更好地利用和开发这一植物，笔者选取荷叶为研究对象，利用超声辅助浸提法研究了提取溶剂中乙醇的含量、荷叶质量与提取溶剂的体积比（料液比）、超声辅助浸提时间变化及浸提次数等因素的影响规律，获得了荷叶中黄酮类化合物的最佳提取条件。

1 材料与方法

1.1 材料与设备 上海精密科学仪器有限公司生产的722N型可见分光光度计和电子天平（精度0.1mg），超声波清洗器（型号KQ2200B）。卢丁标准品：国药集团化学试剂有限公司生产，95%乙醇，氯化铝（无水，分析纯）。干荷叶购于当地药店，粉碎后保存于冰箱中。

1.2 实验方法

1.2.1 芦丁标准曲线 用分析天平称取0.025g的芦丁标准品，用乙醇（50%）溶剂溶解，转移至200mL容量瓶中、定容，该溶液为0.125mg/mL的芦丁标准溶液。准确移取该芦丁标准液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL至25mL比色管中，用乙醇（50%）溶剂稀释到10mL，然后加入3.0mL AlCl3（0.1mol/L）溶液，摇匀，再用乙醇（50%）稀释至25mL，放置显色20min，然后用722N型光度计于415nm波长处测其吸光度，以芦丁标准液浓度为横坐标，测得的吸光度值为纵坐标绘制标准曲线（图1）。

1.2.2 超声辅助浸提及黄酮类化合物含量测定 将从当地药店买回的荷叶粉碎、称量，放于锥形瓶中，加入一定体积的的乙醇水溶液超声浸提，然后用0.22μm滤膜抽滤。滤渣按同样的步骤进行重复浸提，并将重复浸提的提取液合并，用制作标准曲线同样的方法，测定荷叶样品中黄酮类化合物的含量。并探究提取溶剂中乙醇的含量、荷叶质量与提取溶剂的体积比（料液比）、超声辅助浸提时间变化及浸提次数对荷叶中黄酮类化合物提取率的影响。

2 结果与分析

2.1 乙醇浓度对荷叶中黄酮类化合物提取率的影响 按料液比为1∶25（g/mL），超声辅助提取30min，溶剂中乙醇的含量对荷叶黄酮类化合物提取率的影响见图2。图2显示，提取溶剂中乙醇的含量增加，浸提液中黄酮类化合物的得率不断增加，当提取溶剂中乙醇的含量为60%时黄酮类化合物得率最佳，继续增加溶剂中乙醇的含量，提取率反而逐步降低。这是由于所提取的黄酮类化合物其中一部分是水溶性的，如果溶剂中乙醇的含量高、水分含量低时，就会影响黄酮类化合物在溶剂中的溶出[5]。因此选用60%的乙醇水溶液。

2.2 料液比对荷叶中黄酮类化合物提取率的影响 取浓度为60%的乙醇水溶液为提取溶剂，超声提取30min，考察了料液比分别为1∶10，1∶15，1∶20，1∶25，1∶30，1∶35，1∶40时对荷叶中黄酮类化合物提取率的影响，结果如图3。当料液比增加时，浸提液中黄酮类化合物的溶出量也随之增加、提取率增大，当增加到1∶25（g/mL）时黄酮类化合物的溶出量最高，提取率最佳。料液比大于1∶25（g/mL）后黄酮类化合物的溶出量减少、提取率下降。这是因为在超声波的作用下基体的细胞膜快速膨胀并破裂，样品中黄酮类化合物快速溶出。当浸提液的量不断增加时，黄酮类化合物溶出量也逐渐增加直到饱和，此阶段提取率随着溶剂量的增加逐渐升高。但当料液比增加到1∶25（g/mL）后，样品中的黄酮类化合物溶出的同时，其它成分也会溶出，影响荷叶中黄酮类化合物的溶出，使黄酮类化合物的提取率下降[6]，故此选用料液比为1∶25。

2.3 超声时间对荷叶中黄酮类化合物提取率的影响 料液比为1∶25，浓度为60%的乙醇水溶液为提取溶剂，选取超声时间分别为5，10，15，20，25，30，35min，探究荷叶黄酮类化合物提取率受超声辅助浸提时间变化的影响（图3）。图3中提取率的变化结果表明，超声辅助浸提时间明显影响黄酮类化合物的提取率，当浸提时间在5～25min范围内，提取率随浸提时间的增加而增大，浸提25min时，提取率达到最高点。超声提取时间大于25min后，黄酮类化合物的提取率逐渐减少。这是由于随着时间的延长，样品中粘液质等物质逐渐溶入到溶剂中，使溶剂的粘度增大，分子的扩散速度逐渐变慢，使得黄酮类化合物溶出较难。

2.4 提取次数对荷叶中黄酮类化合物提取率的影响 料液比为1∶25（g/mL），乙醇浓度为60%的乙醇水溶液为溶剂，超声辅助提取25min，提取次数对荷叶中黄酮类化合物提取率的影响如表1。由表1可知，提取次数越多黄酮类化合物的提取率越高，提取次数达到3次提取率已接近最大值，黄酮类化合物已接近完全溶出；再继续提取，黄酮类化合物的提取率也不会有明显增加，所以测定次数3次为宜。

3 结论

利用超声法辅助法提取荷叶中黄酮类化合物，探究了提取溶剂中乙醇的含量、荷叶质量与提取溶剂的体积比（料液比）、超声辅助浸提时间变化及浸提次数等因素对提取荷叶中黄酮类化合物的影响，并且获得了提取荷叶中黄酮类化合物的适宜条件，即：乙醇浓度为60%、料液比1∶25（g/mL），超声提取时间25min，提取次数为3次，在此条件下荷叶中黄酮类化合物的提取率为4.81%。

参考文献

[1]陶波，陈慕英，李晓宁，等.荷叶药用研究概况[J].中医药信息，2001，18（2）：14.

[2]梁佳文，刘艾洁，马冰馨，等.高效液相色谱法同时测定荷叶中6种黄酮类成分[J].植物科学学报，2015，33（6）：861-866.

[3]唐裕芳，张妙玲，刘忠义，等.荷叶研究现状与展望[J].食品研究与开发，2004，25（4）：14-16.

[4]涂宗才，寇玉，王辉，等.荷叶多糖的超声波辅助提取和抗氧化活性[J].食品科学，2013，34（16）：108-112.

[5]胡生威.超声辅助提取芒草中黄酮类物质研究[J].安徽农学通报，2015，21（16）：15-17.

[6]韩雅慧，顾赛麒，陶宁萍，等.甘草总黄酮提取工艺及总抗氧化活性研究[J].食品工业科技，2012，2：239-242.

（责编：张宏民）