小鹅瘟病毒抗原免疫鸡对蛋黄抗体产生规律的实践

2016-11-24庄光陈祥珍

乡村科技 2016年14期

关键词：小鹅水剂剂型

庄光陈祥珍

（1.雷州市东里畜牧兽医站，广东雷州 524200；2.雷州市雷高畜牧兽医站，广东雷州 524200）

小鹅瘟病毒抗原免疫鸡对蛋黄抗体产生规律的实践

庄光1陈祥珍2

（1.雷州市东里畜牧兽医站，广东雷州 524200；2.雷州市雷高畜牧兽医站，广东雷州 524200）

小鹅瘟疫是一种发生在3周龄以内雏鹅身上的亚急性或急性的败血传染性疾病，这种病毒具有传染速度快、致死亡率高、发病率高的特征。基于此，通过向产蛋鸡注射不同剂量的小鹅瘟病毒抗原的试验，来寻找抗体产生的规律，创造一种高质量、高效率的抗体方法，降低养鹅的风险。

小鹅瘟病毒；免疫；抗体

小鹅瘟病毒是一种发生在雏鹅身上的急性或亚急性败血传染病，这种病毒主要产生于3周左右的雏鹅身上，具有高死亡率、高传播率、高发病率的特征［1］。该文阐述的试验是对蛋鸡注射不同剂型的小鹅瘟病毒免疫抗原，从蛋黄中检测抗体产生的规律，为研究小鹅瘟病蛋黄抗体提供资料。

1 蛋黄抗体的简介

蛋黄抗体是指蛋黄中存在的抗体，也称蛋黄免疫球蛋白。科学家在鸟类的血液循环中发现了3种免疫球蛋白。母鸡在细胞分裂产蛋的过程中，会将其免疫球蛋白转移至鸡蛋；母鸡血浆中的IgA与IgM，会在输卵管中与其他的蛋白质结合而构成鸡蛋蛋白部分。比较特别的是，在成熟期中，血清IgG会经蛋黄薄膜转移到蛋黄中，蛋黄的IgG与哺乳类的IgG在分子量、等电点、细胞膜上Fc受质的键结构上存在着相异点而被特定称为IgY。鸡卵黄免疫球蛋白G抗体是一种7S免疫球蛋白，与哺乳动物IgG略有不同。该蛋白质分子量约为180 KDA，含2个亚单位，即67-70KDA的重链和22-30KDA的轻链，存在于免疫后母鸡的卵黄中。

2 材料和试剂

水剂抗原体，灭活的小鹅瘟病毒绒尿液与生理盐水按照1∶1的比例稀释。油剂抗原体，灭活的小鹅瘟病毒绒尿液与矿物油按照1∶1的比例混合在一起。标准剂量的小鹅温琼扩诊断抗原体。挑选健康的可以产蛋的鸡35只。

琼扩平板：将1.0 g的优质琼脂粉添加到含8%氯化钠的溶液中，将混合液进行加热待完全溶化后再加入浓度约为0.01%的硫柳贡防腐，浇制凝胶板，冷却后放置在温度约为4℃的空间内保存。

表1 第一次免疫后蛋黄中的抗体水平

表2 第二次免疫后蛋黄中的抗体水平

3 试验方法

3.1 免疫的方式方法

将35只鸡分在7个鸡笼中，每笼5只鸡，给挑选出的35只健康鸡注射抗原体，用肌肉注射的方式给每只鸡注射水剂抗原体1 mL。每天都要注射，从第6天开始，每隔3、5 d就取鸡蛋进行测验，当鸡的免疫力降到log2时开始注射二次疫苗。在进行第2次疫苗接种时，将7笼进行分类注射，前3笼的鸡只给注射1 mL的水剂抗原体，后4笼的鸡只注射1 mL的油剂抗原体。

3.2 抗体的检测方式

在免疫前后要检测蛋黄中的抗小鹅瘟病毒琼扩抗体，将每组产出的鸡蛋具体细化分组，在每只鸡蛋中取相同等量的蛋黄，按照1∶1的比例将蛋黄混合在一起并稀释，等到离心弃脂肪后取出蛋液留作检测。再将琼扩抗体凝胶板按照中央1孔，外围6孔的方式进行打孔，孔径要控制在3 mm左右，间距约为4 mm，加入的样本量为25 μL，并将样本做阴阳性的血清对照。加入样本后放置在恒温为37℃的湿度空间内进行鸡蛋孵卵24 h，再在室内放置24～48 h。根据初步的观察现象可以判断出的结果为：蛋黄抗体的效价就是在标准抗原体形成的白色沉淀线的最大抗体稀释倍数值。

4 试验过程与结果

4.1 试验过程

取出小鹅瘟病毒水剂抗原体，给35只普通鸡翅下肌肉注射阴性的1 mL小鹅瘟病毒抗原琼扩抗体，据观察发现35只鸡并未出现应激的现象，鸡群仍在正常的生活、产蛋。注射后按时收集鸡蛋并对蛋黄进行检测，推断抗小鹅瘟病毒的蛋黄抗体水平。

第27天检测发现鸡蛋中蛋黄抗小鹅瘟病毒体的抗体滴已经下降到了log2，则需要给鸡群进行分组注射，第2次注射要按照分组的形式注射不同的抗原体，前3组注射水剂抗原体，后4组注射油剂抗原体。将收集到的鸡蛋进行分组并按照1∶1的比例稀释，等到蛋黄离心弃脂肪后取出蛋液进行检测，检测的结果具体如表1和表2所示。

4.2 试验结果

①水剂抗原体在第1次使用后，在第6天达到了有效的治疗效果，其当时的小鹅瘟病毒抗体效价约为2.8log2，平均抗体水平为5.7log2。

②第1次使用的水剂型抗原体对小鹅瘟病毒的抵抗时间为20 d左右，20 d后蛋黄的抗体水平在逐渐下降，已不能抵抗小鹅瘟病毒。等到27 d后就检测不到蛋黄中的抗体水平。

③第2次免疫的剂型分为水剂和油剂，水剂型抗原体在再次免疫后，蛋黄的抗体水平有所上升，然后不再变化。油剂型抗原体注射后，蛋黄的抗原体水平上升的比较快且可以持续很久。