聚维酮碘对凡纳滨对虾偷死综合征的防治研究

吴岗，周启良，郭秀玲，季晨，莫泽权，但学明

（1.深圳市安多福动物药业有限公司，广东深圳 518083；2.华南农业大学海洋学院，广东广州 510642）

聚维酮碘对凡纳滨对虾偷死综合征的防治研究

吴岗1，周启良2，郭秀玲1，季晨1，莫泽权2，但学明2

（1.深圳市安多福动物药业有限公司，广东深圳 518083；2.华南农业大学海洋学院，广东广州 510642）

对虾偷死综合征对凡纳滨对虾养殖业造成了严重危害，但是目前还无有效的防控措施。本实验开展了聚维酮碘的体外杀菌实验、生产实验和生物安全性实验，对聚维酮碘防控凡纳滨对虾偷死综合征的作用进行了系统的评估。实验结果显示，聚维酮碘能有效杀灭常见水产致病菌如副溶血弧菌、拟态弧菌、无乳链球菌；投喂含不同浓度聚维酮碘的饲料均未对凡纳滨对虾肝胰腺造成组织损伤；拌料投喂和全塘泼洒聚维酮碘可以让偷死病的死亡量明显下降；全塘泼洒聚维酮碘后水泥养虾池浮游动物和藻类的密度会显著升高。

聚维酮碘；凡纳滨对虾；偷死综合征

凡纳滨对虾因其耐温、耐盐广，生长速度快，含肉率高，肉质鲜美等特点，已逐渐成为我国重要的养殖虾品种，并与中国对虾和斑节对虾一起被列为世界上养殖产量最高的三大虾类[1]。然而随着集约化养殖规模越来越大，养殖密度不断攀升，凡纳滨对虾在养殖过程中也出现了各种疾病，对对虾养殖产业造成严重损失，其中因大部分对虾死亡前无明显征兆，且死虾外表无明显发病症状，故被称为“偷死综合征”或“偷死病”[2-7]。

现在对偷死综合征产生的原因仍存在争议，顾水江[8]认为偷死病的发生一方面是由于水体中条件性致病菌在水质富营养化和天气骤变等条件下大量繁殖，使得塘底缺氧，甚至感染健康的对虾，最终导致大量的死亡；另一方面恶劣的天气对虾长期处于应激的状态，抵抗力下降，既而得病。然而也有报道指出在发生大规模的急性偷死症的虾塘并没有检出病毒或细菌等病原；另外在一些连续降雨的月份也并未出现大规模的急性死亡现象[9]。而近年来也有学者提出该病主要是由一种偷死野田村病毒（CMNV）所引起的[10]，虽然现在该病的发病原因还没有定论，但都认为水质恶化是导致该病发生的主要条件。

聚维酮碘是聚乙烯吡咯烷酮与碘的络合物，对细菌、病毒乃至寄生虫都有很好的消毒杀菌效果，作为一种高效低毒的消毒剂在水产中已经得到广泛地使用[11-14]。本实验选取出现偷死现象的虾塘，通过拌料投喂和泼洒聚维酮碘进行大塘试验，研究聚维酮碘能否对该病的防控起到作用，旨在为该病的防治提供对策。此外，笔者对泼洒聚维酮碘的虾塘水质及浮游生物分别进行了检测和统计，分析该药对水质及生物群落产生的影响，有助于进一步阐明聚维酮碘有效防控凡纳滨对虾偷死病的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

实验所用的凡纳滨对虾购自正大水产（珠海）有限公司斗门虾苗场，体质量为（6.9±1.2）g，体长为（10.8±0.8）cm。先使用50 mg/L聚维酮碘对虾消毒0.5 h，然后在循环水系统中暂养7 d，海水盐度为8，水温29℃。每天早晚各投喂虾体质量2%的虾料，1 h后吸污，每天换20%的海水。

实验药物为深圳安多福动物药业公司生产的“渔多福”聚维酮碘溶液（口服），有效碘浓度为5%，实验中将此药液作为原药按要求配制成不同的浓度，所有实验使用的药液均在使用前配制。

实验使用的水产动物致病菌包括副溶血弧菌、拟态弧菌和无乳链球菌，均为华南农业大学水产动物病害防控实验室保存菌株。

1.2 方法

1.2.1 聚维酮碘体外杀菌实验将实验室保种的副溶血弧菌、拟态弧菌、无乳链球菌分别接种于TCBS培养基、lB培养基、BHI培养基上进行划板，各挑一单菌落于lB液体培养基，30℃，150 rpm培养12 h，混匀后取100 μL菌液梯度稀释至105cfu/ mL。加入聚维酮碘溶液于上述稀释后的菌液中，使其终浓度分别为0、2、4、6、8、10、20、50 mg/L，孵育15 min后分别涂布于培养基上，培养12 h后进行菌落计数。

1.2.2 投喂聚维酮碘对凡纳滨对虾肝胰腺的影响使用喷洒的方式配制5种含不同聚维酮碘浓度的饲料：0 mL药液/kg饲料、2.5 mL药液/kg饲料、5 mL药液/kg饲料、10 mL药液/kg饲料、25 mL药液/ kg饲料；实验虾分为5组，每组30尾虾，每天早晚分别投喂上述饲料，投喂量为虾体质量2%，连续投喂15 d，然后取各组对虾的肝胰腺使用Bouin氏液固定24 h，水洗后经70%、80%、95%、100%酒精逐级脱水各1 h，使用二甲苯透明15 min，浸入热石蜡2 h后进行包埋，经4 μm切片后使用HE染色，封片观察。

1.2.3 聚维酮碘拌料投喂和全池泼洒对偷死病的防治实验于广州番禺区三民岛某凡纳滨对虾养殖场进行，共6个实验塘，每个塘面积均为667 m2，水深1.2 m，放苗时间为2015年3月31号，于5月8号，出现零星死亡，早期并不严重，随后死亡数量逐渐增加，每天从增氧机下面能捞到2～3 kg的死虾。对虾死亡前无明显征兆，且死虾外表无明显发病症状，与偷死现象符合。于5月18号开始实验，6号塘不用药作为阴性对照，1～5号塘均使用含聚维酮碘药液10 mL/kg的饲料进行投喂，另外1～3塘每个塘泼洒500 mL聚维酮碘药液，4～5号塘每个塘泼洒250 mL聚维酮碘药液，每天1次，连续3 d，然后每天记录各塘死亡情况。

1.2.4 泼洒聚维酮碘对对虾养殖水体的影响本实验分别在养殖凡纳滨对虾的土池和水泥池中进行，面积均为667 m2，水深1.2 m。在泼洒聚维酮碘前，连续5 d于10：00采取水面下40 cm处水样检测氨态氮、亚硝酸盐氮、溶氧、水温、pH值等水质指标及浮游动植物密度。第6天和第12天土池和水泥池各泼洒500 mL聚维酮碘，泼药当天分别于泼药后0、4、8 h采集水样检测水质指标和浮游生物密度，其余时间每天10：00采取水样检测。

2 结果

2.1 聚维酮碘体外杀菌效果

不同浓度药物处理后，对每种细菌菌落计数，结果折算为相对存活率（见图1）。结果显示聚维酮碘对副溶血弧菌、拟态弧菌和无乳链球菌均有显著的杀菌作用。

2.2 投喂聚维酮碘对凡纳滨对虾肝胰腺的影响

组织切片显示（见图2），与空白组相比，投喂不同浓度聚维酮碘的凡纳滨对虾肝胰腺并未出现明显组织变化。各组的肝胰腺都保持完整的肝小管结构，呈四角或五角星形且轮廓清晰。4种肝胰腺的主要细胞：吸收细胞、分泌细胞、纤维细胞和胚细胞均未见异常。

2.3 拌料和泼洒聚维酮碘对偷死病的防治作用

各拌料和泼洒聚维酮碘组及对照组死亡情况如图3所示。可以发现对照组依然每天有近3 kg的对虾死亡，而各实验组对虾的死亡情况在用药后2～3天就明显得到改善，其中1～3号塘效果最为明显。

2.4 泼洒聚维酮碘对对虾养殖水体的影响

实验期间各池均未发现对虾大量死亡的现象，水泥池水温29.7～32.2℃，溶氧>4.50 mg/L，pH值6.3～8.7，亚硝酸盐浓度<0.8 mg/L；土池水温为29.5～31.7℃，溶氧>4.50 mg/L，pH值6.7～8.4，亚硝酸盐浓度<0.8 mg/L。实验结果显示泼洒聚维酮碘后水泥池藻类和浮游动物的密度显著升高（见图4—6）。

3 讨论

图1 聚维酮碘体外杀菌效果

图2 对虾肝胰腺切片

图3 用药后对虾的死亡情况

图4 用药后亚硝酸盐含量的变化

图5 用药后藻类密度的变化

图6 用药后浮游动物密度的变化

聚维酮碘通过缓慢释放碘离子，可直接作用于病毒、细菌等病原，破坏其蛋白活性达到消毒效果[15-17]。此外，聚维酮碘是一种低毒安全的消毒剂，在水产养殖中得到广泛的应用。张萍等[18]报道了聚维酮碘对凡纳滨对虾无节幼体急性毒性试验，认为其24、48 h的半数致死浓度和安全浓度分别为8.737、6.512、和0.650 mg/L。而熊斌[19]则认为聚维酮碘对凡纳滨对虾仔虾（体质量为7.7 mg）24、48 h的半数致死浓度和安全浓度分别为4.293、3.162、0.515 mg/ L。高晓华[20]也报道了聚维酮碘对凡纳滨对虾成虾的96的半数致死浓度和安全浓度分别为7.781和0.78 mg/L。综上所述，聚维酮碘对不同时期对虾无论是半数致死浓度还是安全浓度都有所差异。本实验中投喂不同浓度的聚维酮碘并未引起对虾的死亡，且切片结果显示投喂不同浓度的聚维酮碘并未引起对虾肝胰腺的病理变化。因此笔者认为使用深圳安多福动物药业公司生产的聚维酮碘拌饲投喂凡纳滨对虾成虾是安全的，该方法可以应用到生产当中。并且该公司的聚维酮碘（口服）已经获得了国家的新兽药证书，是目前中国唯一的口服类聚维酮碘。

聚维酮碘对偷死病防治的实验结果显示，相对于对照组，5个试验塘的对虾死亡量显著下降，偷死现象得到有效控制。另外，泼洒500 mL聚维酮碘药液的1—3号塘效果尤为显著，泼洒250 mL聚维酮碘药液的4、5号塘也在泼洒后的第3、4天得到控制。因此，本实验证实拌饲投喂和全池泼洒聚维酮碘相结合的方式可以显著降低偷死病的病死率。

虽然使用聚维酮碘能一定程度上控制偷死病的发生，但对其产生机制尚未得到充分研究。笔者认为聚维酮碘主要是通过改变水质和直接、持续地杀灭病原来完成的。首先，体外的杀菌结果显示聚维酮碘能高效杀灭水体的致病菌。其次，高晓华[20]指出在一定浓度下，聚维酮碘可促进小球藻的生长，而益生菌对其的最小耐药浓度较高；此外聚维酮碘对大型蚤的半数致死浓度也比常用的消毒药物如溴氯海因、二氯异氰尿酸、三氯异氰尿酸等高23～48倍；最后聚维酮碘还可降低水体氨氮和亚硝酸盐等有害因子。本实验结果也证实了聚维酮碘的确不会影响浮游动物和藻类的生长，在水泥池中还能促进浮游生物的繁殖。

[1]张高静，韩丽萍，孙剑锋，等.南美白对虾营养成分分析与评价[J].中国食品学报，2013（08）：254-260.

[2]李谦.南美白对虾“偷死病”的防治[J].科学养鱼，2011（02）：53.

[3]孙成波.南美白对虾“偷死综合征”的病因分析及调控措施探讨[J].中国水产，2008（03）：65-67.

[4]刘宏刚，刘磊.南美白对虾“偷死症”的辨证防治[J].科学养鱼，2012（09）：66.

[5]蒋爱国.南美白对虾偷死病的防治[J].农村百事通，2013（12）：53-54.

[6]徐志进.南美白对虾偷死症的区别监测与综合防范[J].科学养鱼，2009（04）：52-53.

[7]梁健文.如何预防南美白对虾“偷死病”?[J].海洋与渔业，2014（05）：68-69.

[8]顾水江.南美白对虾偷死病发病原因分析及防治对策[J].科学养鱼，2012（08）：62-63.

[9]甘日昌.追寻对虾急性偷死症元凶[J].当代水产，2014（10）：68-71.

[10]陈石娟.虾体系专家解读对虾“偷死病”[J].海洋与渔业，2014（02）：36-37.

[11]谭凤霞.聚维酮碘对气单胞菌的抑菌杀菌效果研究[J].安徽农业科学，2011（29）：17955-17956.

[12]龚珞军，付国斌，李赛城，等.水产用聚维酮碘的使用技术[J].渔业致富指南，2007（11）：51-52.

[13]李成，张善忠，林巧.黄颡鱼斜管虫和杯体虫病的防治[J].安徽农业科学，2011（15）：9302-9304.

[14]程云生.聚维酮碘治疗鳗鱼细菌性烂鳃病有特效[J].安徽农业，1999（08）：33.

[15]刘全离.聚维酮碘体外抑菌效果试验观察[J].中国消毒学杂志，2008（01）：28-29.

[16]李磊.聚维酮碘杀灭微生物效果的试验观察[J].沈阳医学院学报，2006（02）：150-151.

[17]陈杨芳，邹珂.聚维酮碘对铜绿假单胞菌杀菌效果及抗性的观察[J].全科医学临床与教育，2009（04）：350-352.

[18]张萍，乔振国.PVP-碘对南美白对虾无节幼体的急性毒性试验[J].海洋渔业，2002（02）：68-69.

[19]熊斌.聚维酮碘和高锰酸钾对南美白对虾仔虾的急性毒理试验[J].科学养鱼，2014（06）：56-57.

[20]高晓华.水产用聚维酮碘的安全性评价及其杀菌效果研究[D].上海海洋大学，2013.

The prevention of povidone iodine to Litopenaeus vannamei AHNS

Wu Gang，Zhou Qiliang，Guo Xiuling1，Ji Chen1，Mo Zequan2，Dan Xueming2
（1.ADF Animal Pharmaceutical Co.ltd.，Shenzhen 518083，China；2.College of Animal Science，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China）

Acute hepatopancreas necrosis syndrome(AHNS)had caused destructive economic losses in the breeding of Litopenaeus vannamei，and there was no effective way to control it so far.In this experiment，we evaluated the disinfectant effect and bio-safety test of povidone iodine(PVP-I).Afterwards，a pond trial was conducted to observe whether the shrimp with AHNS could be controlled by feeding PVP-I feed as well as PVP-I splashing.The results showed that the PVP-I had a strong disinfectant effect and was able to kill the common aquatic pathogenic bacteria such as Vibrio parahaemolyticus，Vibrio mimicus and Streptococcus agalactiae.The different concentrations of PVP-I feed couldn't cause pathological change of the L.vannamei's liver and pancreas.The mortality was significantly decreased after feeding PVP-I feed and PVP-I splashing.The zooplankton and phytoplankton were increased in cement tank after PVP-I splashing.

Povidone iodine；Litopenaeus vannamei；AHNS

10.3969/j.issn.1004-2091.2016.10.005

S948

A

1004-2091（2016）10-0023-06

2016-03-16）

吴岗（1973-），男，研究方向：药理学.E-mail：45090854@qq.com

但学明（1972－），男，教授，研究方向：水产病害防控.E-mail：dxm72@scau.edu.cn