胃癌组织整合素α 2β1的表达和意义

李键淇，颜 勇，王 闯，齐洁敏

（承德医学院病理学教研室，河北承德 067000）

胃癌组织整合素α 2β1的表达和意义

李键淇，颜 勇，王 闯，齐洁敏△

（承德医学院病理学教研室，河北承德 067000）

目的：探讨整合素α 2 β 1在胃癌组织中的表达和意义。方法：采用免疫组化SP法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测85例胃癌组织和50例癌旁正常胃组织整合素α 2 β 1蛋白和mRNA的表达情况。结果：胃癌组织整合素α 2 β 1蛋白和mRNA的表达均明显高于癌旁正常胃组织（P＜0.05）。胃癌组织整合素α 2 β 1蛋白和mRNA的表达与患者年龄、性别无关（P＞0.05）；与胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移和浸润深度有关（P＜0.05）。结论：整合素α 2 β 1与胃癌的浸润、转移密切相关，有望成为胃癌检测、评估恶性程度及预后的重要指标。

胃癌；整合素α 2 β 1；RT-PCR；免疫组织化学染色

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，发病率居各恶性肿瘤的第二位，死亡率居第三位［1］。胃癌发病隐匿，一经发现多数已经浸润、转移［2］。因此，找到一种早期诊断胃癌的指标具有重要意义。研究发现，细胞黏附分子在胃癌的浸润、转移过程中起着重要作用［3］。整合素α 2 β 1作为细胞黏附分子的一员，在癌症的发生发展过程中扮演着重要角色。目前，整合素α 2 β 1在胃癌中的表达情况尚未见报道。本研究采用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测了胃癌组织整合素α 2 β 1蛋白和mRNA表达情况。

1 材料与方法

1.1 一般资料 2012年10月至2014年3月承德市多家医院手术切除并经病理诊断确诊为胃癌的组织85例，男54例、女31例，患者平均年龄67岁，高-中分化64例、低-未分化21例。以＞癌灶10cm处癌旁正常胃组织50例作为对照，男32例、女18例，平均年龄62岁。所有病例术前均未进行放、化疗，临床及病例资料完整。

1.2 试剂来源 兔抗整合素α 2 β 1多克隆IgG抗体，RD有限公司；LSAB免疫组化试剂盒，ZYMED公司。逆转录反应试剂盒和Marker，Takara公司；引物由上海Invitrogen公司合成。

1.3 实验方法

1.3.1 免疫组化染色检测整合素α 2 β 1蛋白的表达：采用免疫组化SP法，一抗浓度1：80，染色程序按试剂盒说明进行。整合素α 2 β 1阳性产物主要定位于细胞浆和（或）细胞膜，呈黄色颗粒。免疫组化染色结果采用阳性细胞数评分和染色强度评分综合判定：⑴在×400倍显微镜下选取视野，计数阳性细胞率：1分，阳性细胞数10%-25%；2分，阳性细胞数25%-50%；3分，阳性细胞数＞50%。⑵阳性染色强度：0分为阴性，与背景色完全一致；1分为弱阳性，呈淡黄色，略深于背景色；3分为强阳性染色，呈棕黄色或棕褐色。以⑴+⑵判定最终结果：0分（-），1-2分（+），3-4分（++），5-6分（+++）。

1.3.2 RT-PCR检测整合素α 2 β 1 mRNA的表达：新鲜组织标本于-80℃保存。按照Trizol试剂盒说明书提取组织总RNA，逆转录及PCR反应按照试剂说明书进行。目的基因为整合素α 2 β 1，以β-actin为内对照。整合素α 2 β 1引物序列：上游：5′-AGATGTTGTGGTTGTGTGTGATGA-3′，下游：5′-CTTTCTGTTGGAATACTAGCGATTG-3′，片段长度198bp；β-actin引物序列：上游：5′-CCTGTGG CATCCACGAAACT-3′，下游：5′-GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3′，片段长度100bp。反应条件为：94℃预变性2min，94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，共30个循环，最后72℃延伸5min。PCR产物行1.5%琼脂糖电泳，经凝胶成像系统采集，采用Quantity One 4.6.2 软件对显影条带进行分析，以目的条带吸光度与β-actin条带吸光度的比值，作为整合素α 2 β 1 mRNA的相对表达水平。

1.4 统计分析 采用SPSS 17.0统计软件处理数据，计数资料的比较采用卡方检验、计量资料的比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组化染色结果

2.1.1 整合素α 2 β 1蛋白的表达情况：胃癌组织整合素α 2 β 1蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常组织（P＜0.05）。见表1。

2.1.2 整合素α 2 β 1蛋白表达与胃癌临床病理参数的关系：胃癌组织整合素α 2 β 1蛋白的表达与患者年龄、性别无关（P＞0.05），与胃癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度有关（P＜0.05）。见表2。

表1 胃癌组织和癌旁正常组织整合素α 2 β 1蛋白的表达情况

2.2 RT-PCR结果

2.2.1 整合素α 2 β 1 mRNA的表达情况：胃癌组织整合素α 2 β 1 mRNA的表达量为4.39±1.20，明显高于癌旁正常组织整合素α 2 β 1 mRNA的表达量（1.36±0.63，P＜0.05）。

2.2.2 整合素α2β1 mRNA表达与胃癌临床病理参数的关系：胃癌组织整合素α2β1 mRNA的表达与患者年龄、性别无关（P＞0.05），与胃癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度有关（P＜0.05）。见表3：

表3 整合素α 2 β 1 mRNA表达与胃癌临床病理参数的关系

3 讨论

恶性肿瘤的发生发展是一个多步骤、多因素参与的复杂过程，其中涉及多种复杂的机制和信号转导的变化。在恶性肿瘤浸润、转移的过程中，黏附分子表达的异常扮演了重要角色。整合素是黏附分子家族成员，是由α亚基和β亚基组成的异二聚体，研究发现，α亚基至少有24种，β亚基至少有9种，共同组成至少25种不同的整合素［4］。整合素α 2 β 1在细胞信号转导、细胞周期、细胞凋亡过程中发挥重要作用。在肿瘤组织，整合素通过介导肿瘤细胞与细胞外基质相互作用，使肿瘤细胞的黏附特性发生变化，促进肿瘤细胞的浸润与转移［5］。同时查阅文献发现，在乳腺癌［6］、骨肉瘤［7］、软骨肉瘤［8］、神经母细胞瘤［9］、肝癌［10］等肿瘤组织整合素α 2 β 1均表达过量，但未见相关文献报道关于胃癌组织整合素α 2 β 1表达变化的研究。

本研究采用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测了85例胃癌组织和50例癌旁正常胃黏膜组织中整合素α 2 β 1蛋白和mRNA的表达情况，并分析了整合素α 2 β 1表达与胃癌临床病理参数的关系。结果发现，胃癌组织中整合素α 2 β 1在转录和翻译阶段的表达均高于癌旁正常胃黏膜组织，且与胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关。

综上所述，整合素α 2 β 1在胃癌的发生、发展过程中，尤其是胃癌的浸润、转移过程中起着重要作用。通过在分子和基因水平研究整合素α 2 β 1在胃癌发生、发展中的作用并分析其与胃癌临床病理参数的关系，可为胃癌的临床治疗和评估预后提供新的理论依据，但其具体作用机制，还需进一步研究。

［1］李雪平，惠起源.胃癌发生部位变化的流行病学研究进展［J］.中国医药导报，2014，11（17）：160-162.

［2］John C.Layke，Peter P.Lopez.胃癌：诊断和治疗方案的选择［J］.中国全科医学，2015，18（3）：248-249.

［3］张元清，舒鹏.黏附分子与胃癌侵袭转移的关系［J］.医学研究杂志，2015，43（2）：166-168，34.

［4］刘畅，赵锋，李庆章.整合素在细胞黏附中的生物学功能［J］.生物学杂志，2012，29（1）：75-78，70.

［5］Gerger A， Hofmann G， Langsenlehner U， et al. Integrin alpha 5 gene polymorphisms and colorectal cancer risk［J］. Int J Coloreetal Dis， 2009， 24（2）: 159-163.

［6］Langsenlehner U， Renner W， Yazdani-Biuki B， et al. Integrin Alpha-2 and beta 3 gene ploy-morphisms and breast cancer risk［J］. Breast cancer Res Treat， 2006， 97（1）: 67-72.

［7］Liu JF， Fong YC， Chang CS， et al. Cyclooxygenase-2 enhances α2β1 integrin expression and cell migration via EPl dependent signaling path way in human chondrosareoma cells［J］. Mol Cancer， 2010， 9: 43.

［8］胡晓晖，施鑫，吴苏稼.骨肉瘤肺转移患者血浆中整合素α 2 β 1的研究［J］.中国骨肿瘤骨病，2011，6（10）：277-281.

［9］刘智屏，文飞球，陈亦欣，等.神经节苷脂对整合素α 2 β 1介导神经母细胞瘤细胞粘附于胶原蛋白的影响［J］.中国当代儿科杂志，2007，9（1）：42-46.

［10］傅遍红，张述林，吴泽志.整合素α 2 β 1对肝癌细胞粘附与趋化行为的影响［J］.重庆大学学报（自然科学版），2007，30（2）：89-93.

（基础医学栏目编辑：陈志宏）

EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF INTEGRIN A2B1 IN GRASTIC CARCINOMA

LI Jian-qi， YAN Yong， WANG Chuang， et al
（Department of Pathology， Chengde Medical College， Hebei Chengde 067000， China）

Objective: To investigate the expression and signifi cance of integrin α2β1 in gastric carcinoma. Methods: SP immunohistochemical stain and RT-PCR were used to detect the integrin α2β1 protein and mRNA expression in 85 cases gastric carcinoma and 50 cases adjacent normal gastric mucosa. Results: The integrin α2β1 protein and mRNA expression in gastric carcinoma were all obviously higher than that in normal gastric mucosa （P＜0.05）. In gastric carcinoma， the integrin α2β1 protein and mRNA expression were irrelevant to age and sex （P＞0.05）； but related to differentiated degree， TNM stage， lymph node metastasis and infi ltration depth （P＜0.05）. Conclusions: Integrin α2β1 is closely related to infi ltration and metastasis of gastric carcinoma， so it is expected to be an important indicator for detection， evaluation of malignant degree and prognosis of gastric cancer.

Gastric carcinoma； Integrin α2β1； RT-PCR； Immunohistochemical stain

R735.2

A

1004-6879（2016）02-0104-03

△

（2015-09-25）