Gli-1、Smo蛋白在术前化疗与未化疗肺癌中的表达及其临床意义

王佳瑞　郑贤波　李　明　马　玥　于　洋　聂慧玲

（大连市第五人民医院 呼吸内科，辽宁 大连 116021）

Gli-1、Smo蛋白在术前化疗与未化疗肺癌中的表达及其临床意义

王佳瑞郑贤波李明马玥于洋聂慧玲

（大连市第五人民医院 呼吸内科，辽宁 大连 116021）

目的 为了探讨Gli-1和Smo蛋白在术前化疗和未化疗肺癌组织中的表达及其临床意义。方法 通过Western Blot、RT-PCR法分别检测40例术前化疗，60例术前未化疗肺癌患者的组织及50例癌旁组织中Gli-1和Smo的蛋白和核酸水平的表达情况，并分析Gli-1和Smo蛋白在术前化疗和未化疗肺癌组织中的表达及其临床意义。结果 未化疗和术前化疗缓解的肺癌组织中Gli-1和Smo的表达无论在蛋白水平还是核酸水平均明显高于癌旁正常组织；经过化疗缓解的肺癌组织标本两种蛋白的表达明显下降。结论 Sonic Hedgehog信号传导通路在肺癌中有异常激活，检测肺癌组织中Gli-1和Smo的表达水平可能为肺癌的早期诊断提供依据，此外两种蛋白可能成为监测肺癌患者病情变化和化疗反应的生物学指标。

Gli-1；Smo；肺癌

肺癌目前已经成为全球病死率最高的恶性肿瘤。近年来研究表明多条通路设为异常激活与肿瘤的发生发展有关，最新研究证实Sonic Hedgehog信号传导通路在乳腺癌，大肠癌，食道癌，胰腺癌中起着重要作用［1-2］。之前我们研究表明Gli-1和Smo在肺癌组织中的阳性表达明显高于癌旁组织，两种蛋白在肺癌中的表达与淋巴结转移、远处转移、侵袭范围及临床分期显著相关［3-4］。本研究除了研究两种蛋白在未化疗肺癌组织中的表达外，还进一步研究其在术前化疗肺癌组织中的表达，从而探讨两种蛋白在肺癌治疗中的意义。

1　材料与方法

1.1一般资料：收集大连市第五人民医院2008年～2014年手术切除并经病理证实肺癌为手术标本100例，其中术前化疗缓解的肺癌标本40例，术前未经放化疗的肺癌标本60例，同时选取50例癌旁组织作为对照组。

1.2研究方法

1.2.1材料：Gli-1、Smo单抗购自美国Epitomics公司；凯基全蛋白提取试剂盒购自凯基生物科技有限公司；Western blotting BCA蛋白定量试剂盒、配胶试剂盒、ECL发光试剂盒、PVDF膜均购自江苏碧云天公司；Trizol、RT-PCR反转录试剂盒、Premix Taq酶、DNA Marker购自TaKaRa（大连宝生物）公司。

1.2.2Western blot检测Gli-1、Smo蛋白表达：按照凯基全蛋白提取试剂盒提取组织总蛋白，BCA法定量。上样量40 μg，采用10%SDSPAGE凝胶电泳分离，采用湿法转膜（1 kD/min）至PVDF膜，用含5%脱脂奶粉的TBST封闭液封闭1 h。后加入一抗（1∶200），BST洗膜后加入二抗（1∶5000），室温孵育1 h，TBST洗膜后ECL发光。用Quantity-One软件对条带的吸光度值进行半定量分析，以目的蛋白条带的吸光度值/内参β-actin度值的比值表示目的蛋白的相对量。

1.2.4RT-PCR检测Gli-1、Smo mRNA的表达：按照Trizol试剂盒说明书提取组织总RNA，采用TaKaRa公司反转录试剂盒合成cDNA。反应条件：94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s，61 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40个循环；72 ℃4 min。PCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳分离，采用Bio-Rad凝胶成像仪成像，Quantity-One软件对条带吸光度值进行半定量分析，以目的条带吸光度值/内参条带吸光度值的比值作为目的基因的相对表达量。

1.3统计学处理：所有实验均重复3次以上，实验数据用均数±标准差表示，采用 SPSS17.0软件处理，单因素方差分析比较多组间均数的差异，以P＜0.05表示有显著性差异。

2　结　果

2.1 Gli-1、Smo在未化疗及已化疗肺癌组织及癌旁组织中Western Blot检测结果。Gli-1在未化疗肺癌组织中，化疗后肺癌组织及癌旁组织中的相对表达量分别为（0.86±0.16）、（0.54±0.08）、（0.34± 0.07），三者间有显著差异（P＜0.05）。Smo在未化疗肺癌组织中的表达（0.64±0.12）明显高于化疗后肺癌组织（0.47±0.10）及癌旁组织（0.24±0.05），三者间有显著差异（P＜0.05）。见表1。

表1　Gli-1、Smo在未化疗及已化疗肺癌组织及癌旁组织中Western Blot检测结果

表1　Gli-1、Smo在未化疗及已化疗肺癌组织及癌旁组织中Western Blot检测结果

注：与肺癌未化疗组相比较，aP＜0.05；与肺癌已化疗组相比较，bP＜0.05

组别Gli-1Smo肺癌未化疗组0.86±0.160.64±0.12肺癌已化疗组0.54±0.08a0.47±0.10a癌旁组织0.34±0.07ab0.24±0.05ab

2.2Gli-1、Smo RT-PCR检测结果：Gli-1在未化疗肺癌组织中，化疗后肺癌组织及癌旁组织中的相对表达量分别为（0.92±0.15）、（0.64± 0.11）、（0.24±0.09），三者间有显著差异（P＜0.05）。Smo在未化疗肺癌组织中的表达（0.62±0.09）明显高于化疗后肺癌组织（0.42± 0.06）及癌旁组织（0.21±0.08），三者间有显著差异（P＜0.05）。见表2。

表2　Gli-1、Smo在未化疗及已化疗肺癌组织及癌旁组织中RT-PCR检测结果

表2　Gli-1、Smo在未化疗及已化疗肺癌组织及癌旁组织中RT-PCR检测结果

注：与肺癌未化疗组相比较，aP＜0.05；与肺癌已化疗组相比较，bP＜0.05

组别Gli-1Smo肺癌未化疗组0.92±0.150.62±0.09肺癌已化疗组0.64±0.11a0.42±0.06a癌旁组织0.24±0.09ab0.21±0.08ab

3　讨　论

Sonic Hedgehog信号传导通路与胚胎的发生、发育密切相关，除此研究表明其在肺癌的发生和发展中也起着重要的作用。其主要由Hh配体，膜蛋白受体Ptch、Smo和下游转录因子Gli组成。杨铎等研究表明Sonic Hedgehog信号通路可能参与了肺癌的发生和发展［5-6］。

本研究对未化疗，术前已化疗和癌旁组织中Gli-1和Smo两种蛋白的表达进行了检测，结果显示未化疗和经过化疗缓解的肺癌组织中Gli-1和Smo的表达无论在蛋白水平还是核酸水平均明显高于癌旁正常组织；结果提示：Sonic Hedgehog信号传导通路在肺癌中有异常激活，检测肺癌组织中Gli-1和Smo的表达水平可能为肺癌的早期诊断提供依据。本研究结果还显示经过化疗缓解的肺癌组织标本两种蛋白的表达明显下降。提示Gli-1和Smo可能成为监测肺癌患者病情变化和化疗反应的生物学指标。两种蛋白在肺癌中的高表达为肺癌分子生物治疗靶向治疗提供了的理论依据。

［1］ Bray F，Ren J-S，Masuyer E，et al.Global estimates of cancer prevalence for 27 sites in the adult population in 2008［J］.Int J Cancer，2013，132（5）:1133-1145.

［2］ Trimboli AJ，Cantemir-Stone CZ，Li F，et al.Pten in stromal fibroblasts suppresses mammary epithelial tumours［J］.Nature，2009，461（7267）: 1084-1091.

［3］ 黄美欧，姚洪莹，刘涛，等.Gli-1在肺癌患者的癌组织中的表达及临床意义［J］.中国民康医学，2015，27（9）:83-84.

［4］ 姚洪莹，黄美欧，刘涛.程谟朝.Smo在肺癌患者的癌组织中的表达及临床意义［J］.中国民康医学，2015，27（10）:70-71.

［5］ 杨铎，臧东钰，李晓明.Shh 蛋白及其下游转录因子Gli-1在非小细胞肺癌中的表达及意义［J］.解放军医学院学报，2013，34（11）:1182-1184.

［6］ Watkins DN，Berman DM，Burkholder SG，et al.Hedgehog signalling within airway epithelial progenitors and in small-cell lungCancer［J］.Nature，2003，422（6929）:313-317. 400 mg/m2，于首次给药间隔28 d再给药1次，周而复始，持续治疗4个

R734.2

B

1671-8194（2016）29-0165-02