结直肠癌组织中ABCG2蛋白的表达及其与CPT-11化疗方案疗效的相关性

朱　礼

(中国医科大学肿瘤医院 辽宁省肿瘤医院 放疗一科, 辽宁 沈阳, 110042)



结直肠癌组织中ABCG2蛋白的表达及其与CPT-11化疗方案疗效的相关性

朱礼

(中国医科大学肿瘤医院 辽宁省肿瘤医院 放疗一科, 辽宁 沈阳, 110042)

目的探讨结直肠癌组织中ABCG2蛋白的表达情况及其与CPT-11化疗方案疗效的相关性。方法选取结直肠癌住院患者89例。采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法检测ABCG2表达情况，分析结直肠癌组织中ABCG2蛋白的表达情况与CPT-11化疗方案疗效的相关性，并分析ABCG2蛋白的表达情况与患者年龄、性别等临床资料的相关性。结果89例直肠癌住院患者组织标本中，阳性率达89.89%。52例临近正常肠黏膜组织标本中，阳性率为48.08%, 表明结直肠癌组织中ABCG2表达较正常肠黏膜组织显著升高(P<0.05)。结直肠癌组织标本ABCG2表达情况与患者年龄、性别、分化程度、病变部位、肝转移无相关性(P>0.05)。结直肠癌组织标本ABCG2表达情况与CPT-11化疗疗效无相关性(P>0.05)。结论结直肠癌组织中ABCG2蛋白的表达情况与CPT-11化疗方案疗效无相关性。

ABCG2; CPT-11; 结直肠癌

喜树碱衍生物伊立替康(CPR-11)是目前临床用于结直肠癌晚期化疗的常用药物之一，不同个体使用的疗效差别巨大，并且不良反应多发，如腹泻、骨髓抑制等[1]。现阶段结直肠癌的主要研究方向集中在如何为患者选择个性化疗法，提高疗效，降低不良发应。研究[2]发现一种属于ABC转运超家族的多耐药转运蛋白ABCG2可利用ATP水解释放的能量将多种底物转运到膜外。有研究[3-4]证实ABCG2在CPT-11耐药性中起到了重要作用。Hiraki M等[5]发现，用CPT-11产物SN-38筛选细胞系, ABCG2的mRNA转录与蛋白质的表达在耐药细胞株中明显高于敏感细胞株。Inoue Y等[6]发现，在转移性结直肠癌患者中, ABCG2的扩增程度与患者耐药程度有直接的关系。本研究探讨结直肠癌组织中ABCG2蛋白的表达情况与CPT-11化疗方案疗效的相关性，现报告如下。

1　资料与方法

1.1临床资料

选取2012年1月—2015年1月肿瘤内科结直肠癌住院患者89例。入选标准：病理组织学确诊为结直肠癌；接受CPT-11化疗；有肿瘤组织标本保留；有或可进行疗效评价。收集入选患者的病历、病史资料及肿瘤组织标本。选取的89例直肠癌住院患者中，男45例，女44例；结肠癌患者49例，直肠癌患者40例；分化程度好患者52例，分化程度差患者37例。89例患者均接受CPT-11化疗，其中CPT-11单药者8例, CPT-11联合恩度5例, CPT-11联合爱必妥6例, CPT-11联合希罗达、爱必妥2例，使用FOLFIRI方案者42例, FOLFIRI联合泰欣生6例, FOLFIRI联合爱必妥10例, FOLFIRI联合贝伐珠单抗9例, FOLFOXIRI者1例。

1.2实验方法

本研究采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP)。获得患者肿瘤组织标本后制作石蜡包埋切片保存并等待处理。脱蜡使用二甲苯浸泡3次，每次15 min。无水乙醇、95%乙醇各5 min, 90%、85%、80%乙醇各2 min, 蒸馏水清洗3次完成水化。1×柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液浸泡并高压煮沸后自然冷却，完成抗原修复。3%H2O2浸泡15 min灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水清洗3次, PBS缓冲液浸泡5 min。5%封闭液室温封闭10 min。滴加一抗，4℃孵育过夜。PBS缓冲液浸泡震荡清洗4次，每次5 min。滴加二抗，室温孵育20 min。PBS缓冲液浸泡震荡清洗3次，每次5 min。滴加链亲合素-辣根过氧化物酶，室温15 min。PBS缓冲液浸泡震荡清洗3次，每次5 min。滴加DAB工作液至反应部位黄褐色，蒸馏水清洗3次，完成显色。浸入苏木精溶液5 min, 蒸馏水清洗至不再变色，1%盐酸酒精分化1～2 s, 蒸馏水反复清洗，反蓝水清洗2 min, 完成复染。PBS缓冲液做一抗阴性对照液，不滴加任何一抗及一抗对照液做空白对照，已知阳性切片做阳性对照。

1.3评价标准

免疫组化结果由不少于2位本院病理科医师做出判定。判定标准：细胞膜及细胞质出现黄褐色颗粒判定为免疫反应阳性细胞。连续10个高倍镜视野，免疫反应阳性细胞<25%判定为阴性，25～50%判定为弱阳性，50～75%判定为阳性，>75%判定为强阳性。疗效评价：按照RECIST 1.0实体瘤疗效统一评价标准对疗效进行评价，疗效分级依次为完全缓解(CR), 部分缓解(PR), 病情稳定(SD)和疾病进展(PD)。每隔1周评价1次，可针对病情进展情况进行调整。

1.4统计学分析

使用SPSS 19.0进行数据处理分析，分析结直肠癌组织中ABCG2蛋白的表达情况与CPT-11化疗方案疗效的相关性，并分析ABCG2蛋白的表达情况与患者年龄、性别等临床资料的相关性，分析采用卡方检验，当P<0.05时为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1结直肠癌组织标本ABCG2表达情况

免疫组化染色结果显示，结直肠癌组织中ABCG2普遍表达。选取的89例直肠癌住院患者组织标本中，阴性(-)9例(10.11%)，弱阳性(+)11例(12.36%)，阳性(2+)43例(48.31%)，强阳性(3+)26例(29.21%)，阳性率89.89%。选取的89例直肠癌住院患者组织标本中，有52例有临近正常肠黏膜组织标本，其中阴性(-)27例(51.92%)，弱阳性(+)5例(9.62%)，阳性(2+)11例(21.15%)，强阳性(3+)9例(17.31%)，阳性率48.08%。结直肠癌组织中ABCG2表达较正常肠黏膜组织显著升高(P<0.05)，见图1。

2.2结直肠癌组织标本ABCG2表达与患者临床

资料的相关性

本研究结果显示，结直肠癌组织标本ABCG2表达情况与患者年龄、性别、分化程度、病变部位、肝转移无相关性(P>0.05), 见表1。

2.3结直肠癌组织标本ABCG2表达与CPT-11化疗疗效的相关性

按照RECIST 1.0实体瘤疗效统一评价标准对疗效进行评价，选取的89例直肠癌住院患者中，达到CR/PR疗效患者21例(23.60%)，SD疗效患者44例(49.44%), PD疗效患者24例(26.97%)。结直肠癌组织标本ABCG2表达情况与CPT-11化疗疗效无相关性(P>0.05)。本研究中使用FOLFIRI方案者68例，对此部分患者单独进行统计学分析，其中达到CR/PR疗效患者16例(23.53%), SD疗效患者33例(48.53%), PD疗效患者19例(27.94%)。结直肠癌组织标本ABCG2表达情况与FOLFIRI方案化疗疗效无相关性(P>0.05)。

A. 强阳性(3+)

B. 阳性(2+)

C. 弱阳性(+)

D. 阴性(-)

3　讨　论

大肠癌是常见的恶性肿瘤，包括结肠癌和直肠癌。大肠癌的发生与高脂肪低纤维素饮食、大肠慢性炎症、大肠腺瘤、遗传因素和其他因素如血吸虫病、盆腔放射、环境因素(如土壤中缺钼)、吸烟等有关。大肠癌早期无症状或症状不明显，仅感不适、消化不良、大便潜血等。随着癌症发展，症状逐渐出现，表现为大便习惯改变、腹痛、便血、腹部包块、肠梗阻等，伴或不伴贫血、发热和消瘦等全身症状。肿瘤因转移、浸润可引起受累器官的改变。大肠癌因其发病部位不同而表现出不同的临床症状及体征。目前常用的治疗方法有手术治疗、辅助化学治疗、IV结直肠癌的治疗、放射治疗等方法。

近年来研究人员发现一种属于ABC转运超家族的多耐药转运蛋白ABCG2, ABCG2可利用ATP水解释放的能量将多种底物转运到膜外[7-8]。ABCG2蛋白是ABC超家族成员之一，是一种P-糖蛋白，基因定位于4q22, 由多药抗性蛋白(MDR1)基因和多药抗性相关蛋白(MAP)基因编码[9-10]。研究[11-12]表明，大多数肿瘤组织中都有ABCG2的表达，以肺、子宫内膜、消化道最为多见。目前关于结直肠癌癌组织与临近正常肠黏膜组织ABCG2表达情况研究较少，且结果不一。有研究[13]显示结直肠癌癌组织与临近正常肠黏膜组织ABCG2表达情况相近(66.2%∶50%)，同时有研究[14]显示结直肠癌癌组织ABCG2表达明显高于临近正常肠黏膜组织ABCG2表达(68.3%∶0%)。本研究显示，结直肠癌组织中ABCG2普遍表达。选取的89例直肠癌住院患者组织标本中，阳性率达89.89%。有52例有临近正常肠黏膜组织标本，阳性率48.08%，证实结直肠癌组织中ABCG2表达较正常肠黏膜组织明显升高(P<0.05)。本研究显示结直肠癌组织标本ABCG2表达情况与患者年龄、性别、分化程度、病变部位、肝转移无相关性(P>0.05)，可能与研究对象的入选标准、样本量的大小、试验方法等多种因素有关。

有研究[15-16]显示, ABCG2表达情况与化疗治疗的临床疗效可能存在相关性。Jia Q等[17]研究显示, ABCG2的表达与肿瘤患者化疗治疗的临床疗效并无关系。Seong SJ等[18]发现ABCG2可作为结直肠癌预后较差的指征。因此, ABCG2表达情况与化疗疗效的相关性存在较大的争议。本研究结果显示，结直肠癌组织标本ABCG2表达情况与CPT-11化疗疗效无相关性(P>0.05)。总之，本研究显示结直肠癌组织中ABCG2表达较正常肠黏膜组织明显升高，结直肠癌组织标本ABCG2表达情况与患者年龄、性别、分化程度、病变部位、肝转移无相关性，结直肠癌组织标本ABCG2表达情况与CPT-11化疗疗效无相关性。

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Expression of ABCG2 in colorectal cancer tissues and its correlation with efficacy of CPT-11 chemotherapy

ZHU Li

(DepartmentofRadiotherapy,LiaoningProvincialTumorHospital,TumorHospitalofChinaMedicalUniversity,Shenyang,Liaoning, 110042)

ObjectiveTo explore the expression of ABCG2 in colorectal cancer tissues and its correlation with efficacy of CPT-11 chemotherapy. MethodsA total of 89 patients with colorectal cancer were selected. The SP method was used to detect ABCG2 expression level. The correlation between the expression of ABCG2 and the efficacy of CPT-11 chemotherapy was analyzed, and correlations between the expression of ABCG2 and the patient′s age, sex were analyzed as well. ResultsThe positive rate was 89.89% in 89 cases of rectal cancer. Positive rate was 48.08% in 52 cases of normal intestinal mucosa, which showed that the expression of ABCG2 in colorectal carcinoma was significantly higher than that in normal intestinal mucosa (P<0.05). The expression of ABCG2 in colorectal cancer tissue showed no correlation with the age, sex, degree of differentiation, location of lesion and liver metastasis (P>0.05). Expression of ABCG2 in colorectal cancer tissue had no correlation with efficacy of CPT-11 chemotherapy efficacy (P>0.05). ConclusionThere is no correlation between ABCG2 expression in colorectal cancer tissues and the efficacy of CPT-11 chemotherapy.

ABCG2; CPT-11; colorectal cancer

2016-05-21

R 735.3

A

1672-2353(2016)19-040-04DOI: 10.7619/jcmp.201619012