异丙托溴铵对小儿哮喘患者白细胞介素13、转化生长因子β1及血管内皮生长因子表达的影响

刘彩霞　景卫利　程　雪　罗卉丽　黄梅.湖北医药学院附属太和医院儿科，湖北十堰442000；2.湖北省十堰市妇幼保健院检验科，湖北十堰442000；.湖北省十堰市妇幼保健院儿科，湖北十堰442000

异丙托溴铵对小儿哮喘患者白细胞介素13、转化生长因子β1及血管内皮生长因子表达的影响

刘彩霞1景卫利1程雪1罗卉丽2▲黄梅3
1.湖北医药学院附属太和医院儿科，湖北十堰442000；2.湖北省十堰市妇幼保健院检验科，湖北十堰442000；3.湖北省十堰市妇幼保健院儿科，湖北十堰442000

目的探讨异丙托溴铵对小儿哮喘患者血清白细胞介素13（IL-13）、转化生长因子β1（TGF-β1）、血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法选取2013年12月～2015年10月于湖北医药学院附属太和医院就诊的小儿哮喘患者60例作为研究对象，将所有患者随机分为实验组和对照组，每组各30例。对照组患者使用沙丁胺醇及氨茶碱进行治疗，实验组在对照组治疗的基础上加用异丙托溴铵。治疗前后检测IL-13、TGF-β1、VEGF及肺功能水平，同时比较两组治疗后临床总有效率。结果与治疗前比较，两组患者治疗后血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平明显降低，第1秒用力呼气容积（FEV1）和FEV1/用力肺活量（FVC）明显提高，差异均有统计学意义（P＜0.05）。实验组治疗后血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平明显低于对照组，FEV1和FEV1/FVC明显高于对照组，临床总有效率也明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论异丙托溴铵能够改善小儿哮喘患者的肺功能，提高临床疗效，推测其机制可能与降低患者血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平有关。

异丙托溴铵曰小儿曰哮喘曰白细胞介素13曰转化生长因子β1曰血管内皮生长因子

哮喘（bronchial asthma）又称支气管哮喘，是一种由淋巴细胞、嗜酸粒细胞、肥大细胞等多种细胞参与的慢性气道炎症性疾病，为小儿常见疾病之一［1］。近几年小儿哮喘的患病率逐年升高，目前在我国的患病率为1.5%～2.0%，已严重威胁到我国小儿的生长发育健康，其中25%的患儿在1岁左右出现轻微症状，75%～85%的患儿会在4～5岁前出现胸闷、呼吸困难、反复可逆性喘息及咳嗽等症状。有研究指出急性发作哮喘患者血清白细胞介素13（IL-13）、血管内皮生长因子（VEGF）等指标表达提高［2］，当前学者已经证实IL-13与哮喘炎症密切相关［3］，在气道重塑中，转化生长因子β1（TGF-β1）指标占据重要地位，同时也能够促进IL-13的表达，VEGF能够引起组织纤维化发展，引起气道管腔缩小。目前，临床上医者主要采用沙丁胺醇及氨茶碱进行治疗，但临床疗效一般，故应寻找疗效更好的治疗方案，异丙托溴铵（Ipratropium Bromide）为强效抗胆碱药，对支气管平滑肌M受体有较高的选择性，且具有促进支气管黏膜纤毛运动以利于痰液排出的优点［4］，但临床上运用异丙托溴铵治疗小儿哮喘的研究较少，因此，本研究通过观察异丙托溴铵对小儿哮喘患者血清IL-13、TGF-β1、VEGF表达的变化，以期为异丙托溴铵治疗小儿哮喘提供可能的临床依据。

1　资料与方法

1.1一般资料

选择2013年12月～2015年10月于湖北医药学院附属太和医院（以下简称“我院”）门诊及病房进行治疗的哮喘患儿60例作为研究对象，其中男36例，女24例；年龄3～15岁，平均（7.34±1.03）岁；体重指数（BMI）19.3～23.5 kg/m2。按照随机数字表法将所有患者随机分为实验组与对照组。实验组30例，男18例，女12例；年龄3～14岁，平均（7.25±0.95）岁；BMI（21.5± 1.8）kg/m2。对照组30例，男18例，女12例；年龄4～15岁，平均（7.52±1.08）岁；BMI（21.7±1.9）kg/m2。经统计学分析，两组患者性别、年龄、BMI等一般情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经我院伦理委员会批准，患儿家属签署知情同意书。

1.2纳入标准

符合中华医学会制订的《哮喘诊治指南》中关于小儿哮喘的诊断标准，且患儿于急性发作期就诊。

1.3排除标准

①合并慢性阻塞性肺疾病；②合并严重感染或肝肾功能不全；③合并先天性心脏病；④合并荨麻疹、过敏性鼻炎等疾病；⑤对研究中使用的药物过敏。

1.4方法

对照组：沙丁胺醇（江苏平光制药有限责任公司，国药准字H32025021），用法：气雾吸入，每次0.1～0.2mg，必要时4 h 1次，每天不超过8次，持续治疗7 d；氨溴索（扬州中宝制药有限公司，国药准字H32024040），用法：每次2～3 mg/kg，以25%～50%葡萄糖20～40 mL稀释后缓慢静注，或以5%葡萄糖500 mL稀释后静滴，持续治疗7 d。实验组：治疗方法与对照组相同，并在对照组治疗的基础上加用异丙托溴铵（北京海德润制药有限公司，国药准字H11022421），用法：雾化吸入，3～6岁儿童1.25 mL/次，6～15岁儿童2.5 mL/次，持续治疗7 d。

1.5观察指标及疗效判定标准

1.5.1血清IL-13尧TGF-β1尧VEGF水平检测治疗前后1 d抽取所有患者肘部静脉血3 m L，以3500 r/min的速度离心10min后送至我院检验科进行检验。IL-13、TGF-β1、VEGF水平均采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ELASA）法，试剂盒由浙江爱康生物科技有限公司生产，所用仪器为FX-6MG酶联免疫光谱分析仪。检测方法严格按照试剂盒说明书进行，并严格按照仪器操作规程进行操作和质控。

1.5.2肺功能检测对所有患者均进行肺功能检测，方法：先对所有患者的用力肺活量（FVC）及第1秒用力呼气容积（FEV1）进行检测，然后计算出FEV1/FVC的百分比，仪器由日本佳能公司生产，所用仪器为佳能AS-505型肺功能仪。

1.5.3临床疗效判定显效：患儿的症状及体征有大幅度的改善；有效：患儿的症状及体征在一定程度上有所减轻；无效：患儿的症状及体征无变化甚至有所加重。总有效率=（显效例数+有效例数）/总例数×100%。

1.6统计学方法

采用SPSS 19.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差（x依s）表示，组间比较采用t检验，计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组治疗前后血清IL-13尧TGF-β1尧VEGF水平比较

与治疗前比较，两组患者治疗后血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平均明显降低（P＜0.05）；实验组患者治疗后血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平明显低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2两组治疗前后肺功能指标比较

与治疗前比较，两组患者治疗后FEV1和FEV1/ FVC均显著提高（P＜0.05），且实验组治疗后FEV1和FEV1/FVC均高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表1　两组治疗前后血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平比较（ng/L，依s）

表1　两组治疗前后血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平比较（ng/L，依s）

注：与本组治疗前比较，*P＜0.05；与对照组治疗后比较，#P＜0.05；IL-13：白细胞介素13；TGF-β1：转化生长因子β1；VEGF：血管内皮生长因子

组别IL-13 TGF-β1VEGF对照组（n=30）治疗前治疗后实验组（n=30）治疗前治疗后67.59±9.42 34.52±4.46*730.14±103.36 410.24±52.38*440.73±62.88 157.36±21.37*66.74±9.25 25.26±2.88*#728.83±103.46 356.56±40.25*#442.35±62.68 110.23±13.68*#

表2　两组治疗前后肺功能指标比较（依s）

表2　两组治疗前后肺功能指标比较（依s）

注：与本组治疗前比较，*P＜0.05；与对照组治疗后比较，#P＜0.05；FEV1：第1秒用力呼气容积；FVC：用力肺活量

组别FEV1（L）FEV1/FVC（%）对照组（n=30）治疗前治疗后实验组（n=30）治疗前治疗后53.03±5.44 72.46±9.37*63.33±6.71 74.75±9.47*52.63±5.65 82.68±11.35*#63.26±6.63 86.73±12.47*#

2.3两组临床疗效比较

实验组治疗后临床总有效率明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3　两组临床疗效比较［n（%）］

3　讨论

哮喘是支气管哮喘的简称，是由多种炎症细胞与细胞组分共同参与介导的气道慢性炎症性疾病，以气道高反应性（AHR）与可逆而广泛的气流阻塞为特征［5］。哮喘是由复杂而尚未完全理解的基因和环境相互作用而导致的，可能引起疾病的相关因素包括宿主因素，例如遗传、肥胖、性别；环境因素，例如过敏原、吸烟、空气污染、职业性致敏物、感染、饮食药物、内分泌、精神紧张及运动等。本病的发病机制相当复杂且尚未十分明确，目前主要的几种认识包括变态反应、气道炎症、气道神经-受体调节失常及气道重构与其相互作用等［6-7］。反复发作的并伴有哮鸣音的呼气性呼吸困难为本病的典型临床症状，多在夜间或凌晨时发作、加重，可伴有发作性胸闷或咳嗽［8］，体征以发作时两肺广泛的哮鸣音、呼气延长为主，发作十分严重时哮鸣音反而减弱即沉默肺［9］。支气管哮喘近年来在全世界的发病率都有明显增加的趋势，其中儿童哮喘的发病率为3.3%～29.0%，成人为1.2%～25.5%，中国的哮喘患者约有3000万例，小儿哮喘患者的学习生活与生长发育均被严重影响［10］。异丙托溴铵是一种抗胆碱药物，对支气管平滑肌上的M受体具有较高选择性的阻滞作用［11］，可以使节后迷走神经通路阻断，从而使迷走神经的兴奋性降低而舒张支气管，其松弛气道平滑肌的作用较强，且作用持续时间较长，对呼吸道腺体及心血管系统的影响都较小，还具有使黏液分泌减少的特点［12-13］。本研究通过对患者血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平的检测以及肺功能与临床疗效的观察，来研究异丙托溴铵对小儿哮喘的作用机制。

气道炎症是哮喘最重要的发病机制，是引起哮喘气道高反应性和气道可逆且弥漫性阻塞的病理基础［14］。IL-13是一种可以介导变态反应的多效能细胞因子，其主要来源是活化的Th2细胞，其在哮喘相关的炎性因子中位于主导地位。IL-13能够促进IgE的合成使其水平升高，对IL-12与干扰素7的分泌具有抑制作用［15］；使Th1/Th2平衡失调，而偏向Th2，增加Th2型细胞因子的表达，加重炎性反应；对嗜酸性粒细胞的凋亡产生抑制作用，使其存活时间加长，维持了气道炎症［16］；还能直接使成纤维细胞受刺激而增殖活化，加强纤维素的产生，进而参与到气道重塑的过程中；同时对VEGF与TGF-β1的生成都具有诱导促进作用［17］。TGF-β1是一种同时具有抗炎与促炎双重作用的因子，其致纤维化的作用公认十分强烈［18］。一方面TGF-β1能对气道平滑肌细胞的增殖和分化进行刺激，引起平滑肌发生肥大与增生，还对胶原的沉积具有促进作用，在气道重构的过程中扮演十分关键的角色。另一方面，它通过对炎症细胞的影响来参与气道炎症：它能使Th2细胞的存活时间延长，从而增加IL-13的合成，对上皮细胞、平滑肌细胞进行刺激使其产生IL-1、IL-8等；对炎症细胞趋化浸润向哮喘气道具有诱导促进的作用，使相关免疫炎症细胞的存活时间延长，加强肥大细胞脱颗粒作用，引起哮喘气道中的炎症细胞大量聚集，使气道炎症程度加重［19］。VEGF是特异性影响血管形成的重要细胞生长因子，又被称为血管通透因子。VEGF对由嗜酸性粒细胞介导的炎性反应具有十分重要的作用，它可以和其表面的flt-1受体结合，使磷脂酰肌醇-3-激酶与PKC的活性增强，从而对嗜酸性粒细胞的活性物质的释放以及趋化与活化产生促进作用，进而加重了气道炎症，使气道反应性与黏液分泌增加［20］。同时，在炎症过程中血管反应是重要的中心环节之一，VEGF既能增加血管的通透性，使血浆蛋白的渗出增多，又能对血管的新生进行诱导，这两种反应相互增强，导致炎症加剧，持续时间延长。VEGF能引起上皮下组织纤维化、使基底膜增厚，导致气道壁黏膜发生水肿及增厚，最终引起气道管腔直径减小，参与气道重构，其机制可能与VEGF对Th2细胞与TGF-β1的生成促进有关。本研究结果显示，治疗后与对照组比较，实验组患者血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平明显较低（P＜0.05），提示异丙托溴铵能够有效减轻哮喘患儿气道炎性反应，减缓气道重构。

哮喘发病时患者的呼吸功能受到明显的影响，相关指标下降显著。肺功能检查属于物理检查方法的一种，对患者身体没有任何损害，没有痛苦与不适反应，且具有较高的敏感度，方便重复检查，患者也容易接受，能够对患者的呼吸功能情况进行诊断，对肺功能的损伤程度与性质进行确诊。在肺功能的多项指标中，以FEV1/FVC最为可靠。实验结果表明，治疗后与对照组比较，实验组患者的肺功能明显较好（P＜0.05），提示异丙托溴铵能明显改善小儿哮喘患者的肺功能。

根据对治疗后患儿的统计，本研究发现实验组的30例患者中有12例的临床相关症状与体征有明显缓解或基本消失，表现出显效的治疗效果，15例患者的临床相关症状与体征有一定缓解，表现出有效的治疗效果，总有效率高达90%；而对照组中有8例患儿的临床相关症状与体征没有缓解甚至出现加重的情况，其总有效率为73.33%。本研究结果显示，实验组治疗后临床总有效率高于对照组（P＜0.05），提示异丙托溴铵能明显提高小儿哮喘的临床疗效。

本研究通过对60例小儿哮喘患者的血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平变化的检测以及肺功能与临床疗效的观察，提示异丙托溴铵能明显减轻气道炎性反应，减缓气道重构，改善肺功能，提高临床疗效。今后笔者将对其具体作用机制进行更深入的研究，以期对本研究中所反映出的结果做出更具体的论证。

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Effect of Ipratropium Brom ide for the expression of interleukin 13,trans－form ing grow th factor-茁1and vascular endothelial grow th factor in chil－dren w ith asthma

LIU Caixia1JINGWeili1CHENG Xue1LUOHuili2▲HUANGMei3
1.Department of Pediatrics，Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine，Hubei Province，Shiyan 442000，China；2.Department of Clinical Laboratory，Shiyan Maternal and Child Health-Care Hospital，Hubei Province，Shiyan 442000，China；3.Department of Pediatrics，Shiyan Maternal and Child Health-Care Hospital，Hubei Province，Shiyan 442000，China

Ob jective To investigate the effect of Ipratropium Bromide for the expression of interleukin 13（IL-13），transforming growth factor-β1（TGF-β1）and vascular endothelial growth factor（VEGF）in children with asthma.Meth－ods Sixty children with asthma treated in Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine from December 2013 to October 2015 were selected as research objects，and they were random ly divided into the experiment group and the control group，with 30 cases in each group.The control group was treated by Salbutamol and Aminophylline，on basis of the control group，the experiment group was added with Ipratropium Bromide.The levels of IL-13，TGF-β1，VEGF and pulmonary function of the two groups before and after treatmentwere detected，at the same time，the clinical total effective rates of the two groups after treatmentwere compared.Resu lts Compared with before treatment，the levels of IL-13，TGF-β1，VEGF of the two groups after treatmentwere significantly decreased，the forced expiratory volume in one second（FEV1）and FEV1/forced vital capacity（FVC）were significantly increased，the differences were all statistically significant（P＜0.05）.The levels of IL-13，TGF-β1，VEGF of experiment group after treatmentwere all lower than those of control group，the FEV1and FEV1/FVC were higher than those of control group，the clinical total effective rate was also higher than that of control group，the differences were all statistically significant（P＜0.05）.Conclusion Ipratropium Bromide can improve the pulmonary function of children with asthma and enhance clinical efficacy，the mechanism may be related to decreasing the levels of IL-13，TGF-β1，VEGF.

Ipratropium Bromide；Children；Asthma；Interleukin 13；Transforming growth factor-β1；Vascular endothelial growth factor

R725.6

A

1673-7210（2016）06（c）-0149-05

湖北省十堰市科学技术研究与开发项目计划（14Y67）。

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（2016-02-08本文编辑：张瑜杰）