308 nm准分子激光对轻度斑块状银屑病患者外周血Th17细胞因子的影响

陆家睛　易雪梅　于　宁　陈福娟　丁杨峰



·论著·

308 nm准分子激光对轻度斑块状银屑病患者外周血Th17细胞因子的影响

陆家睛易雪梅于宁陈福娟丁杨峰

目的：确定308 nm准分子激光对轻度斑块状银屑病患者外周血Th17细胞相关细胞因子的表达的影响。方法：采用ELISA方法检测308 nm准分子激光治疗前后60例轻度斑块状银屑病患者及20名健康正常人血清中IL-17和IL-22的水平。结果：银屑病患者308 nm准分子激光治疗前外周血IL-17和IL-22的表达水平为(98.14±27.83)ng/L和(73.17±20.53)ng/L，高于正常对照组的(44.25±12.64)ng/L和(19.56±6.61)ng/L，差异有统计学意义(P<0.01)；治疗后银屑病患者外周血IL-17和IL-22水平下降至(51.73±26.32)ng/L和(25.24±18.16)ng/L，与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论：308 nm准分子激光可调节外周血IL-17和IL-22的水平。

轻度斑块状银屑病；308 nm准分子激光；IL-17；IL-22

Th17细胞属新型的CD4+T细胞亚群，分泌白细胞介素-17A(IL-17A)、IL-17F、IL-22等细胞因子[1]。目前认为T细胞是308 nm准分子激光作用的靶细胞，该激光通过抑制细胞因子的产生而发挥作用[2]。本研究通过检测轻度斑块状银屑病患者308 nm准分子激光治疗前后外周血IL-17、IL-22的表达水平，探讨其与银屑病发病及病情严重程度之间的关系，从而达到更有效地治疗银屑病的目的。

1　资料与方法

1.1病例资料本研究为开放性研究，所选患者来自2013年1月至2015年1月我院皮肤内科门诊及病房患者，根据适应证，确立入选标准、排除标准及剔除标准，筛选轻度斑块状银屑病患者60例，年龄18～70岁，平均(47.30±16.32)岁，病程1个月至20年，平均(5.04±3.81)年；以PASI评分评价银屑病严重程度，PASI评分1.23～7.69，60例患者平均(4.68±1.26)分。筛选正常健康志愿者20名作为对照组，年龄18～70岁，平均(47.15±14.70)岁。两组在性别、年龄上差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。试验组与对照组均签署知情同意书。

1.1.1入选标准a.临床上符合银屑病诊断标准，且皮损面积小于体表面积5%的斑块状银屑病；b.年龄18～70岁，性别不限；c.无严重的心脑血管器质性病变及肝、肾功能损害者；d.无免疫功能低下者；e.入选患者均未进行系统用药，仅局部外用我院自制制剂尿囊素维他乳膏，每日2次;f.已签署知情同意书的患者。

1.1.2排除标准a.患者有光敏性皮肤病以及可能因光照射诱发或加重的疾病等;b.近1周有服用光敏性药物;c.有恶性皮肤肿瘤史者;d.孕妇及哺乳期妇女;e.合并有精神、神经疾病患者;f.有不宜入选的其他原因。

1.1.3剔除标准 a.未按照治疗方案治疗者;b.入选后发现不符合入选标准或符合排除标准;c.入组后无任何随访记录者。

1.1.4评分标准按照银屑病治疗指南中PASI评分标准进行评分[3]。

1.2实验方法

1.2.1308 nm准分子激光照射试验组给予308 nm准分子激光局部照射2次/周，照射前测定MED，患者初始剂量为1倍的MED,每次剂量均在前次照射剂量的基础上增加10%～25%，如果局部出现明显红斑，则减少前次照射剂量的10%；如出现痛性红斑或水疱则停止照射1次或2次。一个疗程为10次，如照射部位在10次以内痊愈则停止照射308 nm准分子激光。

1.2.2观察时间每周1次，随访5次。

1.2.3观察内容a.每周1次治疗前研究者对患者症状进行评分；b.每周1次治疗前研究者对患者治疗的靶部位拍照；c.并询问患者是否发生不良事件并进行相关性分析；d.预约下次治疗、随访时间。

1.2.4治疗前后用ELISA法检测试验组和对照组外周血IL-17、IL-22的表达水平采集轻度斑块状银屑病患者和正常对照者静脉血3 mL，静置留取血清500 μL，1000 r/min离心15 min，吸取上层血清置于-20℃保存待检。正常对照组查体时采血，处理方法同前。采用双抗体夹心ELISA法检测血清IL-17、IL-22的含量。操作步骤严格按照ELISA检测试剂盒说明进行，用酶标仪在450 nm处测A值，建立标准曲线求出样品中含量。

2　结果

2.1.1外周血Th17细胞相关细胞因子IL-17、IL-22检测结果比较(表1)轻度斑块状银屑病患者308 nm准分子激光治疗前外周血IL-17和IL-22的表达水平分别为(98.14±27.83)%和(73.17±20.53)%，均显著高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；轻度斑块状银屑病患者308 nm准分子激光治疗后外周血IL-17和IL-22的表达水平分别为(51.73±26.32)%和(25.24±18.16)%，均显著低于治疗前患者，差异有统计学意义(P<0.01)；轻度斑块状银屑病患者308 nm准分子激光治疗后外周血IL-17和IL-22的表达水平分别为(51.73±26.32)%和(25.24±18.16)%，正常对照组外周血IL-17和IL-22的表达水平分别为(44.25±12.64)%和(19.56±6.61)%，差异无统计学意义(P>0.05)。

2.1.2Th17细胞相关细胞因子IL-17、IL-22与PASI评分的相关性分析本研究中所选轻度斑块状银屑病患者308 nm准分子激光治疗前PASI评分1.23～7.69，60例患者平均为(4.68±1.26)分；治疗后PASI评分0.96～5.48分，平均为(3.22±0.78)分。轻度斑块状银屑病患者PASI评分与Th17细胞相关细胞因子IL-17、IL-22的表达水平呈正相关(r值分别为0.613，0.547，P<0.01)。

表1　试验组治疗前后与正常对照组IL-17、IL-22表达水平的比较

注：t值为对照组与试验组(治疗前)比较，t1值为试验组(治疗前)与试验组(治疗后)比较，均P<0.01；t2值为对照组与试验组(治疗后)比较，均P>0.05

3　讨论

IL-17是Th17最主要的效应因子，IL-17因能直接参与银屑病的致病而成为研究热点[4]。IL-22属于IL-10细胞因子家族，主要由激活的Th1细胞、自然杀伤细胞以及最近发现的Th17细胞产生，通过结合上皮细胞表达的IL-22受体，激活信号转导和转录因子3(STAT3)途径，诱导上皮细胞产生炎症因子发挥作用[5]。IL-23诱导Th17细胞分化增殖,分化成熟的Th17细胞可以分泌IL-17、IL-22等多种细胞因子,Th17类细胞因子在银屑病的发病中起到重要作用[6]。

Coimbra等[7]用ELISA 方法检测寻常型银屑病患者外周血中IL-22、IL-17、IL-23等的表达水平，与正常对照组相比均明显升高。NB-UVB按疗程治疗，外周血中IL-23 的表达水平在治疗3周后首先下降，外周血中IL-22 和IL-17 的表达水平在治疗6周后明显下降，认为是由于IL-23水平的明显下降，随之Th17相关细胞因子IL-17和IL-22的表达水平均下降，该结果证实IL-23、Th17轴可能在银屑病的发病机制中有重要作用，故银屑病是以IL-23/Th17/IL-17免疫应答通路为主介导的免疫异常性疾病[8]。

本实验中涉及的308 nm准分子激光在1997年首次用于银屑病的治疗，已有研究显示，与传统UVB相比较，308 nm准分子激光能更有效地治疗斑块状银屑病[9]。目前认为T细胞是308 nm准分子激光作用的靶细胞，通过抑制细胞因子的产生而发挥作用[10]。 本研究结果显示308 nm准分子激光治疗前轻度斑块状银屑病患者外周血Th17细胞相关细胞因子IL-17、IL-22的表达水平显著高于正常对照组，说明两者在银屑病的发生发展中至关重要，并且目前两者的共同表达被认为是自身攻击性T细胞和促炎症T细胞的标志[11]。308 nm准分子激光治疗后轻度斑块状银屑病外周血Th17细胞相关细胞因子IL-17、IL-22的表达水平显著低于治疗前，说明308 nm准分子激光在治疗皮损的同时，可适当调节Th17细胞下游细胞因子的表达水平，而IL-17和IL-22水平下降有助于角质形成细胞正常分化[8]，从而对病情恢复起到一定作用。而轻度斑块状银屑病患者308 nm准分子激光治疗后外周血Th17细胞相关细胞因子与正常对照组比较，差异无统计学意义，说明通过308 nm准分子激光对皮损处的治疗，在一定程度上能充分调动抑制免疫反应的功能，使病情逐步趋于正常。且60例患者均按疗程经过308 nm准分子激光照射10次，42例患者原皮损处颜色明显转暗，厚斑块明显变薄，基本无脱屑，PASI评分较前明显下降；另18例患者的皮损达到基本治愈；治疗期间受试患者均未出现皮肤瘙痒、痛性红斑或水疱等副反应。同时经分析IL-17、IL-22与PASI评分呈正相关，说明IL-17、IL-22与银屑病的病情轻重程度密切相关。

综上所述，Th17细胞相关的细胞因子IL-17、IL-22与银屑病致病密切相关，308 nm准分子激光治疗可适当调节Th17细胞下游细胞因子IL-17、IL-22的表达水平，从而对银屑病的病情恢复起到一定作用。

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(收稿：2015-10-19修回：2015-12-24)

Effects of 308 nm excimer laser on the Th17 cytokines in the patients with mild plaque psoriasis

LUJiajing,YIXuemei,YUNing,CHENFujuan,DINGYangfeng.

ShanghaiSkinDiseasesHospital,Shanghai200443,China

Correspondingauthor：DINGYangfeng,E-mail：mmmm_111111@126.com

Objective: To determine the effects of 308 nm excimer laser on the levels of Th17 cytokines in the patients with mild plaque psoriasis. Methods: The levels of IL-17 and IL-22 in 60 patients with mild plaque psoriasis and 20 healthy controls were detected by ELISA. Results: The levels of IL-17and IL-22 in patients before treatment were (98.14±27.83) ng/L and (73.17±20.53) ng/L and those in controls were (44.25±12.64) ng/L and (19.56±6.61) ng/L, with significant differences (P<0.01). The levels of IL-17and IL-22 in the patients after treatment decreased to (51.73±26.32) ng/L and (25.24±18.16) ng/L. The differences in the levels of IL-17 and IL-22before and after the treatment were significant (P<0.01). Conclusion: 308 nm excimer laser can regulate the levels of Th17 cytokines in the patients with mild plaque psoriasis.

mild plaque psoriasis; 308 nm excimer laser; IL-17; IL-22

上海市皮肤病医院，上海,200443

丁杨峰，E-mail：mmmm_111111@126.com