宁宫止血胶囊提取工艺研究*
2016-10-28河北省石家庄市第四医院药剂科
河北省石家庄市第四医院药剂科
张红霞 王朝卿△ 冯梅梅 李彩霞(石家庄 050017)
宁宫止血胶囊提取工艺研究*
河北省石家庄市第四医院药剂科
张红霞王朝卿△冯梅梅李彩霞(石家庄 050017)
提要目的:优选宁宫止血胶囊提取工艺,最大限度提出有效成分,方便服用(减少服用量)。方法:采用正交试验法,以浸膏得率及黄芪甲苷含量为评价指标,考察乙醇浓度(A)、加醇量(B)、提取次数(C)、提取时间(D)4个因素对提取工艺的影响。根据筛选出的最佳提取工艺条件,做3批验证试验。结果:宁宫止血胶囊醇提部分最佳提取工艺为加8倍量90%的乙醇,煎煮3次,每次1 h。结论:根据方差分析及3批验证试验结果,考虑到生产实际情况,宁宫止血胶囊醇提部分最佳提取工艺为:加8倍量90%乙醇,提取3次,每次1 h。
宁宫止血胶囊;正交试验;黄芪甲苷;醇提;HPLC;崩漏;提取工艺;优选
宁宫止血胶囊处方出自长期从事中医妇科疾病治疗的临床专家,为临床医生治疗崩漏(功能失调性子宫出血)的应用多年的经验处方,处方由女贞子、黄芪、墨旱连、白芍、当归、茜草、三七、海螵蛸、甘草等组成。以汤剂广泛用于临床,九十年代后又改为口服液(三七另服)在医院广为应用。止血作用快,服药时间短,疗效确切,服用安全,应用前景广阔。但是口服液口味难矫,易生成沉淀,不太稳定,携带、运输、贮存不方便,且三七粉另外冲服也不便于患者服用。为了使本方推向社会,更好地服务于患者,笔者对其进行了剂型改革,进而对其提取工艺进行了优选研究。
根据方中各药味文献资料报道的有效成分的理化性质,并考虑到生产、临床应用情况,为达到最大限度提出有效成分,方便服用(减少服用量)的目的,提取部分分成两个工艺路线,即以乙醇为溶媒的醇提工艺路线和以水为溶媒的水提工艺路线。本文仅对宁宫止血胶囊的醇提工艺路线加以研究。
1 仪器与试药
1.1仪器9FW-320B型粉碎机(丹东市制药机械厂);KQ2200E型医用超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司);日本岛津LC-10A系列高效液相色谱仪;BP211D型电子天平(德国赛多利斯股份公司)。
1.2试药试验药材女贞子、黄芪、墨旱连、白芍、当归、茜草、三七、海螵蛸、甘草等均购自安国药材市场,并经河北医科大学药学院生药教研室聂凤禔教授鉴定。试验所用乙醇、甲醇、正丁醇等试剂均为分析纯。
2 方法
2.1提取工艺选择依据[1-3]女贞子:文献报道女贞子水煎剂可提高肌体的免疫功能,有扶正固本的作用。而其所含标识性成分,齐墩果酸为广谱抗菌素,对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌等都有抗菌作用。且齐墩果酸在水中溶解度很小。黄芪:文献报道,黄芪的化学成分主要有皂苷、多糖、黄酮、氨基酸等,其水煎液有补气固表,扶正固本之功效。黄芪甲苷作为黄芪主要有效成分之一,具有抗炎、降压、镇痛、镇静的作用,对免疫器官也有影响,但黄芪甲苷在水中的溶解度小。墨旱莲:其主要成分为皂苷、烟碱、鞣质、维生素A、鳢肠素、多种噻吩化合物、蟛蜞菊内酯等,在水中有一定的溶解度,采用传统的水煎煮法提取。白芍主要成分为芍药苷。有文献报导,用水提取芍药苷,效果优于用甲醇、乙醇及丙酮等提取。当归:主要成分为挥发油及非挥发性成分,在本方中当归养血和营,临床上取其补血和血之功效,故不另提挥发油,直接用水煎煮法提取。茜草:主要成分为蒽醌类、萘醌类(茜草酸苷、大叶茜草素、茜草内酯)、萜类等。药理试验证明,茜草中含有的水溶性成分具有止血作用,故采用水煎煮法。三七:主要成分为三七总皂苷、挥发油、三七素、氨基酸等。另据报道,三七含有大量淀粉,打粉后可代替辅料使用。海螵蛸:主要成分为碳酸钙、壳角质、黏液质、大环内酯类物质及氨基酸、无机盐和多种微量元素。现代药理研究证明,它具有收敛止血作用,临床上常用水煎煮法提取。甘草:主要成分为甘草甜素、甘草酸、甘草次酸、甘草萜醇、甘草苷、甘草素、甘草香豆素等,属于三萜类化合物及黄酮类化合物,基本上能溶解于水,故采用水煎煮法提取。
根据本方的功能主治和方中各味药的主要化学成分及其药理作用,确定了方中各药味的提取方法:女贞子、黄芪采用乙醇提取,药渣与白芍、墨旱莲等再用水为溶媒提取。
2.2药材前处理取方中药材,分别净选,分别处理,按处方量称量。
2.3醇提工艺研究[4-6]女贞子具有滋肾养肝之功,黄芪具有补气作用,女贞子主要成分为齐墩果酸、多量葡萄糖、女贞子苷,黄芪主要成分为黄芪甲苷、黄芪多糖等,在乙醇中溶解性好。因此,女贞子、黄芪采用乙醇为提取溶媒,以浸膏得率及黄芪甲苷含量为评价指标,采用正交试验法进行二者提取工艺的考察。
2.4正交试验设计[7-9]根据预实验和参考文献,提取工艺以乙醇为提取溶剂,以影响提取工艺的因素乙醇浓度(A)、加乙醇量(B)、提取次数(C)、提取时间(D)作为考察因素,每个因素取3个水平,按L9(34)表进行正交试验,以干膏得率、黄芪甲苷含量为评价指标,筛选宁宫止血胶囊的最佳提取工艺,因素水平设计表见表1。
2.4.1各评价指标的测定方法
2.4.1.1出膏率的测定:[6-7]按处方比例称取女贞子30 g,黄芪药材45 g,共9份。在平行条件下,按L9(34)正交表提取,滤液于45℃条件下减压浓缩至流浸膏,置已恒重的蒸发皿中,60℃水浴蒸发近干,减压干燥至恒重,计算浸膏得率。测定结果见表2,方差分析见表3。
表1 正交试验因素水平表
2.4.1.2黄芪甲苷含量测定[9]:分别精密称取各试验号的干浸膏细粉约1.20 g,置锥形瓶中,加20 mL甲醇超声处理30 min,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加20 mL水分次溶解,转移至分液漏斗中,用氯仿提取4次(20、20、20、10 mL),弃去氯仿层,再用水饱和的正丁醇提取4次,每次20 mL,合并正丁醇液,用氨试液提取4次(20、20、15、10 mL),弃水层,正丁醇层用水洗至中性,水浴挥干,残渣加甲醇5 mL溶解,作为供试品溶液。照高效液相法(中国药典2010年版一部附录V ID)测定。测定结果详见表2,方差分析详见表4。
色谱条件:色谱柱,Diamonsil(钻石)C184.6×250 mm 5 μL;流动相︰乙腈︰水=37︰63。
检测器漂移管温度:105℃;载气流速:2.7 L/min;撞击器:关。
表2 正交试验安排及结果表
表3 以干膏得率为指标的方差分析表
注:F0.05(2,2)=19.00
表4以黄芪甲苷提取量为指标的方差分析表
来源SSfFSPA4.565722.282816.30B0.776320.38822.77C15.001427.500753.58*D0.279920.14001.00误差0.279920.1472
注:F0.05(2,2)=19.00
3 结果
3.1以干膏得率为考察指标,极差R值大小显示,各因素作用的主次为A>C>B>D;由表3得知,A因素、C因素(提取次数)的影响差异具有显著性(P<0.05), B、D差异无显著性(P>0.05),A3B3C3D1为宁宫止血胶囊最佳提取工艺。
3.2以黄芪甲苷提取量为考察指标,极差R值大小显示,各因素作用的主次为C>A>D>B;由表4得知,C因素(提取次数)的影响差异具有显著性(P<0.05), B、A、D差异无显著性(P>0.05),A1B3C3D3为宁宫止血胶囊最佳提取工艺。
3.3考虑到醇提工艺的目的,黄芪甲苷提取量指标较为重要,A1B3C3D3为最佳工艺。而B、D因素对两个评价指标均无显著性意义,极差又小,考虑到生产实际情况,最终确定宁宫止血胶囊最佳提取工艺条件为A1B2C3D2,即:加8倍量90%乙醇,提取3次,每次1 h。据此筛选出的工艺提取条件,做3批验证实验。
3.4验证比较试验按处方比例称取女贞子30 g,黄芪药材45 g,共3份。按宁宫止血胶囊最佳组合试验条件A1B2C3D2进行3批验证试验。试验结果见表5。
表5 宁宫止血胶囊提取工艺验证对比试验结果表
由上表结果可知,选定的宁宫止血胶囊醇提部分提取工艺最佳组合条件与最高实验结果基本一致,可暂定为宁宫止血胶囊实际生产中醇提部分的生产提取条件。
4 讨论
女贞子为方中君药,文献报道女贞子水煎剂可提高肌体的免疫功能,有扶正固本的作用。而其所含标识性成分,齐墩果酸为广谱抗菌素,对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌等都有抗菌作用。且齐墩果酸在水中溶解度很小。黄芪为方中臣药,文献报道,黄芪的化学成分主要有皂苷、多糖、黄酮、氨基酸等。其水煎液有补气固表,扶正固本之功效。黄芪甲苷作为黄芪主要有效成分之一,具有抗炎、降压、镇痛、镇静的作用,对免疫器官也有影响。但黄芪甲苷在水中的溶解度小。齐墩果酸、黄芪甲苷等易溶于乙醇,为达到最大限度提出有效成分,方便服用(减少服用量)的目的,因此确定女贞子、黄芪二者用乙醇提取。
由正交试验结果及方差分析,结合3批验证试验结果,最终确定宁宫止血胶囊醇提部分最佳提取工艺条件为A1B2C3D2,即:加8倍量90%乙醇,提取3次,每次1 h。
[1]郑虎占.中药现代研究应用[M].第2卷.北京:学苑出版社,1998.1 807-1 848
[2]郑虎占.中药现代研究应用[M].第4卷. 北京:学苑出版社,1998.3 886-3 932
[3]郑虎占.中药现代研究应用[M]:第1卷.北京:学苑出版社,1998.195-254
[4]周莉玲,刘中秋,廖惠芳. 参芪补血胶囊的提取工艺研究[J]. 中成药,1997, 7(19):1-4
[5]阮佳,贺英菊.含女贞子中药的提取及干燥工艺研究[J]. 华西药学杂志, 2013, 5:278-280
[6]张培亮,顾腾飞. 正交试验优选舒胃舒乐颗粒的醇提工艺[J]. 中国药师, 2014,(1):165-167
[7]汤明辉,寇俊萍,朱丹妮,等. 正交设计—重复试验法优选当归芍药散的提取工艺 [J]. 中国中药杂志,2000, 11(25):668-671
[8]谢秀琼.中药新制剂开发与应用[M]. 3版.北京:人民卫生出版社, 2006.132
[9]李培. 高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定消渴丸中黄芪甲苷的含量[J]. 药学研究,2014(5):267-268
(2016-06-02收稿)
R284.2
A
1007-5615(2016)03-0049-03
*河北省石家庄市科技局资助项目:No.14163073
△河北省人民医院药学部(石家庄 050051)