延安地区成年男性ALDH2基因多态性与酒精性肝病关系探讨

李倩楠　戴光荣　刘发学　曹少华　马杈



·临床与基础研究·

延安地区成年男性ALDH2基因多态性与酒精性肝病关系探讨

李倩楠戴光荣刘发学曹少华马杈

目的探讨乙醛脱氢酶(ALDH)2基因多态性与延安地区成年男性酒精性肝病(ALD)的关系。方法应用基因芯片方法测定健康对照组(76例)、ALD组(36例)和非酒精性脂肪肝病组(NAFLD)(73例)ALDH2基因型及等位基因频率，进行比较。结果两种等位基因ALDH2 504Glu和ALDH2 504Lys在3组之间的分布差异均有统计学意义(P均<0.05)。ALDH2的3种基因型在健康对照组、ALD组和NAFLD组之间的分布均存在一定差异(P均<0.05)，具有统计学意义。结论ALDH2基因多态性和本地区ALD的发生密切相关，ALDH2 504Lys等位基因可能是ALD的保护因子。

酒精性肝病；乙醛脱氢酶；基因多态性；基因芯片

酒精性肝病(ALD)病因明确，但发病机制复杂，危险因素众多。虽然ALD发病与饮酒量、饮酒时间及酒精饮料的品种有相关性，但肝损害的程度与乙醇的消耗量并无显著相关。据报道，同卵双生子同患ALD的几率比异卵双生子高2倍，表明遗传差异可能是饮酒者对ALD易感性的基础[1]。本文就延安地区成年男性ALD与ALDH2的易感性做相关研究。

资料和方法

一、研究对象

所选对象均为延安地区汉族男性居民，且在本地居住5年以上，年龄在18～69岁，所有研究均征得研究对象同意。(1)健康对照组76例：选自本院体检中心，无肝病史，无饮酒史或偶饮少量低度酒。(2)NAFLD组73例：来自本院住院患者，均符合NAFLD诊断标准[2]。(3)ALD组36例：选自本院住院患者，依据ALD诊断标准[3]。

二、实验室检测

空腹抽取外周静脉血2 mL，EDTA抗凝，用DNA纯化试剂盒(上海百傲科技股份有限公司)提取全基因组DNA。DNA浓度为10～60 ng/μL，A260/A280比值在1.5～2.0。将已纯化的DNA作为扩增模板，加入ALDH2扩增液放入PCR仪中。PCR反应条件为：50℃ 5 min; 94℃ 5 min;94℃ 25 s,60℃ 25 s,72℃ 30 s,35循环;72℃ 5 min;产物2～8℃保存。取出基因芯片，放入Baio全自动杂交仪(Array Doctor 2.0)中，获得的芯片杂交结果图像，用Baio基因芯片图像分析软件，输出检测结果。

三、统计学方法

数据分析采用SPSS 19.0统计软件。不同组基因型频率比较采用卡方检验,α=0.05为检验水准。

结　　果

ALDH2基因型及等位基因频率分布情况见表1。

表1　ALDH2基因型及等位基因频率[n(%)]

注：G504G代表ALDH2 Glu504Glu基因型，G504L代表 ALDH2 Glu504Lys基因型，L504L代表ALDH2 Lys504Lys基因型

表1显示，ALDH2 504Glu等位基因频率在健康对照组、NAFLD组和ALD组分别为57.25%、53.4%和87.5%；ALDH2 504Lys等位基因频率在以上3组中分别是42.75%、46.6%、12.5%。2种基因在3组之间的分布差异均有统计学意义(P均<0.05)。ALDH2的3种基因型在3组之间的分布均存在一定差异(P<0.05)，具有统计学意义。

讨　　论

余静等[4]指出，遗传基因多态性在ALD的发生和发展中扮演着越来越重要的角色。ALDH2是乙醇代谢途径中关键酶之一，ALDH2 504Glu为野生型隐性等位基因，具有ALDH2酶的活性，ALDH2 504Lys为突变型显性等位基因，不具有酶的活性。在亚洲黄种人群中，ALDH2 504Lys突变型普遍存在。研究显示[5]，ALDH2 504Lys能在一定程度上抑制其携带者对酒精的依赖，并与过量饮酒相关的酒精性中毒、酒精性肝病、消化道癌等疾病之间存在密切联系。

文献报道[6,7]，ALDH2 504Lys在各族人群中的分布是不同的，在欧美人群中携带率极低，但在亚洲人种中发生频率较高。本研究资料中，纯合子ALDH2 504Lys在ALD患者中的检出率为0，ALDH2 504Lys等位基因的频率在ALD组(12.5%)明显低于健康对照组(42.75%)，ALDH2 504Lys基因型者酒精依赖和ALD发病率明显低于健康人群。与多数学者[8,9]的实验结果基本一致，ALDH2基因多态性存在种族和地域差异，携带ALDH2 504Lys者饮酒后，乙醇氧化后的产物乙醛由于未被及时清除，在体内蓄积，致使个体出现脸红、心悸、出汗、头痛、呕吐、荨麻疹等不适，在一定程度上促使该基因携带者停止继续饮酒，改变饮酒行为，表明ALDH2 504Lys等位基因可能是酒精中毒和ALD的负性相关因子，ALDH2 504Lys基因型者多不善饮，可防止ALD的发生，而杂合子ALDH2 Glu504Lys可能更易导致ALD的发生。ALDH2基因多态性与延安地区成年男性ALD的发生密切相关，ALDH2 504Lys等位基因可能是ALD的保护因子。

现已公认，ALD是世界范围内发病率和死亡率的主要原因，而当前系统、有效的治疗方法相对缺乏。遗传因素对ALD影响的作用机制繁杂，很难被完全揭露和证实。本研究仅仅探讨了ALDH2基因与ALD的关系，仅占遗传因素的一小部分，乙醇脱氢酶及细胞色素P450 2E1的基因多态性也与ALD息息相关。王洪岩等[10]指出，TNF-α基因启动子、CD14内毒素受体基因及DNA修复基因，及变异基因(PNPLA3)也是近年研究的热点。

总之，延安地区成年男性的ALDH2的基因多态性与ALD的发生发展显著相关，由于影响ALD的危险因素在不同种族、不同个体之间存在差异，因此，将不同基因多态性和遗传因素深入研究，联合作用，将为ALD基础研究和临床防治提供重要意义。

[1]Stickel F，Hampe J．Genetic determinants of alcoholic liver disease. Gut，2012，61:150-159.

[2]中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组.非酒精性脂肪性肝病诊疗指南(2010年修订版).胃肠病学和肝病学杂志，2010，19:483-488.

[3]中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组.酒精性肝病诊疗指南(2010年修订版).中华肝脏病杂志，2010，18:163-166.

[4]余静，易斌，冯佳，等.酒精性肝病危险因素研究进展.胃肠病学和肝病学杂志，2016，25:112-114.

[5]裘丽珍，钟文涛，龚兴国.人乙醛脱氢酶2基因*1/*2多态性与酒精性疾病.医学分子生物学杂志，2007，4:164-167.

[6]王瑢，何震宇，陈亮明.酒精代谢关键酶乙醛脱氢酶2基因分型方法研究进展.广东药学院学报，2013，29:682-685.

[7]杨春晓，张玉，师少军.SNP基因分型检测技术及应用进展.中国药师，2013，16，811-816.

[8]Tseng YM， Tsai SM， Chen SY， et al． Roles of the genetic polymorphisms of alcohol-metabolizing enzymes on the immunology in high risk drinkers．Toxicol Sci，2009，111:267-276.

[9]Liu Y， Zhou LY，Meng XW．Genetic polymorphism of two enzymes with alcoholic liver disease in Northeast China．Hepatogastroenterology， 2012，59:204-207.

[10]王洪岩，李鑫，徐有青.酒精性肝病发病机制研究进展.实用肝脏病杂志，2014，17:5-8.

(本文编辑：易玲)

陕西省延安市科学技术研究发展计划项目(项目编号：2015HM-13)

716000陕西延安大学附属医院消化内科(李倩楠，戴光荣，马杈)；体检科(刘发学)；药剂科(曹少华)

戴光荣，Email:daiguangrong6810@sina.cn

2016-03-24)