胸苷酸合成酶基因多态性与培美曲塞治疗海南黎族肺腺癌患者效果的相关性

吴毓优　高炳玉　刘　玉　夏立平　苏洁之　陈峙霖

(海南医学院附属医院，海南　海口　570102)



胸苷酸合成酶基因多态性与培美曲塞治疗海南黎族肺腺癌患者效果的相关性

吴毓优高炳玉刘玉夏立平苏洁之陈峙霖

(海南医学院附属医院，海南海口570102)

目的探讨胸苷酸合成酶(TS)rs34743033(5'端非编码区28 bp重复序列)及rs34489327(3'非编码区的1 494 bp处6 bp核苷酸片段的缺失或插入)与培美曲塞治疗海南黎族肺腺癌患者疗效与预后的相关性。方法手术后经病理诊断确认海南晚期肺腺癌患者104例，采用PCR的方法检测5'端28 bp重复序列多态性；采用焦磷酸测序的方法检测3'端6 bp核苷酸片段的缺失或插入，随访记录患者的无进展生存时间和总生存期。结果TS 基因5'端非编码区rs34743033多态性位点3R/3R、2R/3R、2R/2R基因型在肺腺癌患者所占的比例分别为67.3%(70/104)、17.3%(18/104)、15.4%(16/104)。3'端非编码区rs34489327多态性位点+6 bp/+6 bp、+6 bp/-6 bp、-6 bp/-6 bp基因型在肺腺癌患者中所占比例分别为53.8%(56/104)、34.6%(36/104)、11.5%(12/104)。2R/2R和2R/3R基因型患者分别为12.00和18.50个月，3R/3R基因型患者中位无复发生存时间和总生存时间分别为11.63和18.17个月，二者之间无显著相关；-6 bp/-6 bp 和-6 bp/+6 bp基因型患者分别为12.00和18.70个月，+6 bp/+6 bp基因型患者中位无复发生存时间和总生存时间分别为11.50和19.17个月，二者之间无显著相关。结论TS基因rs34743033及rs34489327多态性可能与培美曲赛治疗海南黎族肺腺癌的疗效和预后无关。

肺腺癌；胸苷酸合成酶；培美曲塞；基因多态性

胸苷酸合成酶(TS)是催化dUMP转化为dTMP关键酶，通过限制dTTP的合成而影响DNA生物合成的速度〔1～3〕。该酶的活性是肿瘤细胞生长的重要因素，因而对化疗过程的敏感性及治疗效果可能存在影响〔4，5〕。酶的活性受到结构及表达量的影响，而基因多态性尤其是位于表达调控部位的多态性位点是形成个体酶活性差异的重要影响因素。rs34743033是位于TS基因5'转录调控区域的一个多态性位点，可以与诸多转录调节因子结合从而影响启动子的转录效率〔6〕。rs34489327是位于TS基因3'末端的插入缺失多态性位点，可影响转录产物mRNA的稳定性，进而影响蛋白质的翻译效率。以上两个位点多态性与胃癌、肠癌及食管癌药物临床疗效及预后存在相关性，可作为临床个体化治疗的参考指标之一。培美曲塞在海南肺腺癌的临床治疗中属于常规治疗药物〔7〕。本研究拟探讨海南黎族肺腺癌患者TS基因多态性与培美曲塞治疗肺腺癌疗效和预后的相关性。

1　材料和方法

1.1一般资料选择2011年1月至2013年8月在我院手术治疗的晚期肺腺癌患者104例(男84例，女20例)，年龄44～80〔平均(56.9+18.97)岁〕，均经病理学检查诊断确诊为肺腺癌。患者化疗前血常规、肝肾功能均正常，心电图无明显异常。化疗方案：注射用培美曲塞二钠500 mg/m2，静滴；同时口服地塞米松、叶酸和肌注维生素B12，每21 d为一个治疗周期，共进行4个周期。观察疗效及安全性，随访时间至2016年3月30日，每例患者的随访时间最长达40个月。

1.2方法①DNA提取。QIAamp®DNA Blood Kit提取全血DNA，采用NanoDrop2000微量紫外分光光度计(Thermo SCIENTIFIC)进行质量控制。② rs34743033多态性检测。采用PCR扩增检测TS基因5'端转录起点上游附近存在的28个碱基对(bp)的串联重复序列多态性。上游引物：5'AGCAGGAAGAGGCGGAGCG3'，下游引物：5'AGCTCCCCGTGCGGCGGAC3'，2R/2R基因型扩增片段为222 bp，3R/3R基因型为250 bp，2R/3R基因型出现222 bp和250 bp的两个条带。反应体系：2×QIAGEN Multiplex PCR Master Mix，10 μl，上、下游引物各0.2 μl，模板DNA 2 μl，灭菌蒸馏水补足至20 μl。反应条件：98℃预变性15 min；95℃，30 s，55℃，30 s，72℃，60 s，40个循环。③rs34489327多态性检测。采用焦磷酸测序技术检测3'端UTR多态性。上游引物5'AGCAGGAAGAGGCGGAGCG3'，下游引物：5'AGCTCCCCGTGCGGCGGAC3'(5'端生物素标记)，测序引物：5' TGATGTAGAGTGTGGTTATGAAC3'。④疗效评价指标：记录无进展生存时间(PFS)和总生存期(OS)。

1.3统计学处理应用SPSS19.0软件行单因素分析。

2　结　果

2.1rs34743033多态性检测结果TS基因5'端非编码区重复序列在肺腺癌患者中，3R/3R、2R/3R、2R/2R基因型所占的比例分别为67.3%(70/104)、17.3%(18/104)和15.4%(16/104)。

2.2TS基因rs34489327多态性检测结果三种基因型+6 bp/+6 bp、+6 bp/-6 bp、-6 bp/-6 bp在肺腺癌患者中所占比例分别为53.8%(56/104)、34.6%(36/104)、11.5%(12/104)。

2.3TS 基因多态性与肺腺癌预后的相关性104例肺腺癌患者中，2R/2R+2R/3R基因型患者中位PFS和OS分别为12.00和18.50个月，3R/3R基因型患者中位PFS和OS分别为11.63和18.17个月，二者之间无显著相关性。提示患者TS 基因5'端非编码区重复序列多态性与肺腺癌预后缺少相关性。-6 bp/-6 bp及-6 bp/+6 bp基因型患者中位PFS和OS分别为12.00 和18.70个月，+6 bp/+6 bp基因型患者则分别为11.5和19.27个月，组间差异亦无统计学意义。见图1。

图1　海南肺腺癌患者不同基因型与PFS、OS的相关性

3　讨　论

TS的表达与肿瘤的恶性生物学行为密切相关〔5〕。rs34743033与多种转录调节蛋白结合有可能刺激和增强启动子的活性，从而影响基因表达效率。Shintani等〔8〕研究发现，3R/3R基因型肺癌组织蛋白水平较2R/2R，2R/3R高，而且基因型与mRNA表达水平存在相关性。rs34489327是也可能通过影响TS mRNA的稳定性从而影响TS基因的表达。Mandola等〔9〕通过体外荧光标记检测发现-6 bp等位基因在体外降低TS mRNA的稳定性，在体内降低TS的表达。

培美曲塞在非鳞非小细胞肺癌(NSCLC)的亚组分析中体现了治疗优势〔10〕。研究发现腺癌与非腺癌组织中TS基因表达存在显著差异〔11〕。患者个体和种族的差异往往会影响个体

对肿瘤的易感性以及对化疗药物的敏感性甚至预后。本研究选择海南黎族肺腺癌患者作为研究对象，初步的研究结果表明，以上两个多态性位点可能与培美曲赛治疗海南黎族肺腺癌的疗效和预后无关。在现今倡导个体化医疗的时代，需要综合考虑组织类型、基因突变和更多的生物标志物的表达情况作为患者临床用药和预后的评估因素。本研究检测的TS多态性只是TS基因多态性中的两种，要得到更准确的结果，需要结合考虑更多的因素、进行更多大样本的前瞻性研究。

1张婷婷,崔莲花,于壮,等.胸苷酸合成酶基因多态性与肺癌易感性关系〔J〕.中国公共卫生,2011；27(11):1378-80.

2Balboa-Beltrán E,Cruz R,Carracedo A,etal.Delimiting allelic imbalance of TYMS by allele-specific analysis〔J〕.Medicine,2015;94(27):e1091.

3Goff LW,Thakkar N,Du L,etal.Thymidylate synthase genotype-directed chemotherapy for patients with gastric and gastroesophageal junction cancers〔J〕.PLoS ONE,2014;9(9):e107424.

4Avallone A,Gennaro ED,Silvestro L,etal.Targeting thymidylate synthase in colorectal cancer:critical re-evaluation and emerging therapeutic role of raltitrexed〔J〕.Expert Opin Drug Saf,2014;13(1):113-29.

5Jagielska EB,Ucienniczak AP,Browska MD,etal.Trichinella pseudospiralis vs.T. spiralis thymidylate synthase gene structure and T.pseudospiralis thymidylate synthase retrogene sequence〔J〕.Parasit Vectors,2014;7(1):64-8.

6Dunna NR,Naushad SM,Vuree S,etal.Association of thymidylate synthase 5'-UTR 28bp tandem repeat and serine hydroxymethyl transfarase C1420T polymorphisms with susceptibility to acute leukemia〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev,2014;15(4):1719-23.

7于飞,刘晓晴,李晓燕,等.培美曲塞单药或联合铂类三线及以上治疗晚期非鳞型非小细胞肺癌的临床观察〔J〕.中国肺癌杂志,2012;15(2):117-21.

8Shintani Y，Ohta M，Hirabaynshi H，etal.New prognostic indicator for non-small-cell lung cancer，quantitation of thymidylate synthase by real-time reverse transcription polymemse chain reaction〔J〕.Int J Cancer，2003;104(6)：790-5.

9Mandola MV,Stochlmaeher J,Zhang W，etal.A 6 bp polymorphism in the thymidylate synthase gene causes message instability and is associat-ed with decreased intratumoral TS mRNA levels〔J〕.Pharmacogenetics，2004;14(3)：319-27.

10Assinri D,Scarpi E,Saqrtori S,etal.Second-line treatments in non-small cell lung cancer：a systematic reviews of literature and metaanalysis of randomized clinical trials〔J〕.Chest， 2009;135(6):1596-609.

11Tanaka F，Wada H，Fukui Y，etal.Thymidylate synthase(TS)gene expression in primary lung cancer patients：a large-scale study in Japanese population〔J〕.Ann Oncol，2011;22(8)：1791-7.

〔2016-02-10修回〕

(编辑徐杰)

高炳玉(1976-)，男，主任医师，主要从事乳腺疾病的研究。

吴毓优(1976-)，男，副主任医师，主要从事心胸外科疾病研究。

R73

A

1005-9202(2016)17-4244-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.053