腹泻患儿粪便轮状病毒抗原检测及VP7基因分型分析

杨会娟

（北京市普仁医院，北京　100062）

腹泻患儿粪便轮状病毒抗原检测及VP7基因分型分析

杨会娟

（北京市普仁医院，北京100062）

轮状病毒（rotavirus）是导致婴幼儿腹泻的常见病原体［1］，在人体内增殖可阻碍细胞对葡萄糖和钠的正常吸收，引起蛋花汤样大便或稀水样大便腹泻，可造成患儿脱水死亡。资料显示，全球每年大约发生1.25亿例轮状病毒感染引起的婴幼儿腹泻，死亡患儿达50万～52.7万例［2］。为了解本地区腹泻患儿轮状病毒感染情况，并探讨轮状病毒抗原检测的临床应用价值，我们对我院收治的1 892例腹泻患儿进行轮状病毒抗原检测及基因分析，报告如下。

1　病历与方法

1.1一般资料选择本院门诊2014年1—12月收治的1 892例腹泻患儿作为研究对象。纳入标准：具有腹泻的典型症状，临床表现为急性起病、呕吐、腹泻，部分患儿可有上呼吸道感染、发热及轻中度脱水表现；大便多表现为黏液状、糊状、蛋花状，镜检可见脂肪球，白细胞少见。排除标准：已在院外应用抗生素类药物进行治疗的患儿；食物中毒及细菌性腹泻患儿。1 892例患儿中男996例，女896例；年龄0～6岁，平均（1.8±1.1）岁； 根据年龄段划分：0～1岁764例，＞1～2岁702例，＞2～6岁426例； 根据发病季节划分：春夏季925例，秋冬季967例。采集患儿的粪便作为标本进行检测。

1.2检测方法

1.2.1轮状病毒抗原检测采用免疫层析夹心法，试剂由北京万泰生物药业公司生产。检测线由羊抗轮状病毒多克隆抗体包被于硝酸纤维素膜，对照线由羊抗鼠IgG包被，用标记胶体金的轮状病毒单克隆抗体进行样本轮状病毒检测。操作步骤：将约100 mg粪便样品混合稀释液搅拌后静置2 min，缓慢在加样处滴入粪便上清液3～4滴，常温下等待5～10 min后判断结果。

1.2.2轮状病毒基因分型轮状病毒基因分析采用逆转录-聚合酶链式反应（reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR）。核酸提取试剂盒采用Viral Nucleic Acid Extrac-tion kit Ⅱ试剂盒（Geneaid公司生产，台湾），RT-PCR扩增采用QIAGEN one step RT-PCR Kit试剂盒（Qiagen公司生产，德国），按照产品说明书进行操作，扩增产物在2%琼脂糖凝胶上100 V电压电泳1 h，按照特异性核酸条带的面积进行轮状病毒基因型判断。

1.3统计学方法数据采用SAS9.0软件包处理，计数资料组间比较采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2　结　果

2.1不同性别腹泻患儿的轮状病毒抗原阳性率比较1 892例腹泻患儿的轮状病毒抗原阳性率为26.85%，男性腹泻患儿的阳性率（27.51%）高于女性患儿（26.12%），但差异不具有统计学意义（χ2=0.467，P=0.495），见表1。

表1　不同性别腹泻患儿的轮状病毒抗原检测阳性率比较[例（%）]

2.2不同年龄段腹泻患儿轮状病毒抗原阳性率比较0～1岁年龄段腹泻患儿的轮状病毒抗原阳性率显著高于＞1～2岁年龄段（χ2=173.293，P=0.000）和＞2～6岁年龄段患儿（χ2=69.988，P=0.000），＞1～2岁年龄段患儿轮状病毒抗原阳性率显著高于＞2～6岁年龄组（χ2=49.663，P=0.000），差异均具有统计学意义。见表2。

表2　不同年龄段腹泻患儿的轮状病毒抗原检出阳性率比较

2.3不同季节腹泻患儿的轮状病毒抗原检出阳性率比较春夏季腹泻患儿的轮状病毒抗原阳性率（21.41%）显著低于秋冬季患儿（32.06%），差异具有统计学意义（χ2=27.314，P＜0.001）。见表3。

表3　不同季节腹泻患儿的轮状病毒抗原检出阳性率比较

2.4VP7型别鉴定结果508例轮状病毒抗原阳性患儿中，对250例阳性患儿进行了轮状病毒VP7基因型的鉴定，其中G3型221例（88.4%）、G2型7例（2.8%）、G4型4例（1.6%）、G1+G3混合型18例（7.2%）。

3　讨　论

轮状病毒是导致婴幼儿病毒性腹泻的重要病因，主要通过粪-口途径感染，常见临床症状为发热、呕吐、腹泻。本研究中1 892例腹泻患儿的轮状病毒抗原阳性率为26.85%，与国内其他研究报道［3］基本一致。不同性别患儿轮状病毒抗原阳性率差异无统计学意义，表明轮状病毒感染与患儿性别无关。年龄分布趋势分析结果显示，腹泻患儿年龄越小，轮状病毒抗原阳性率越高，原因可能是因为婴幼儿抗轮状病毒抗体的水平较低，而且胃肠功能较弱，因此2岁以下为轮状病毒感染的高发年龄段［4］。有研究指出，母乳喂养的婴儿能够从母乳中获得对轮状病毒具有拮抗作用的IgA抗体，因此，在0～1岁患儿中，非母乳喂养婴儿的轮状病毒感染阳性率高于母乳喂养婴儿［5］。2～6岁婴幼儿轮状病毒感染率逐渐降低，与其免疫系统逐渐完善、抵抗力不断增强有关；同时感染过轮状病毒的患儿会形成轮状病毒抗体，也是防止重新感染的重要原因。

轮状病毒感染导致的腹泻全年均可发病，但其感染率存在明显的季节差异，以气温较低的秋冬季节为流行高峰期。本研究结果显示，春夏季腹泻患儿的轮状病毒抗原阳性率（21.41%）显著低于秋冬季（32.06%）。包增兰等［6］报道，南宁地区轮状病毒感染率以1、2、11、12月较高，平均检出率为41.19%，6～8月检出率较低，平均为5.84%。这是由于轮状病毒在低温环境中存活时间较长，而且能够形成气溶胶而增强传播能力，因此在秋冬季节尤其应加强环境卫生管理，做好预防工作。

轮状病毒感染没有特效药，主要依靠疫苗进行感染控制［7］。了解轮状病毒的基因分型对疫苗的研制与治疗具有重要意义。我国自1982年有轮状病毒分型资料以来，轮状病毒流行株在不同地区、不同时间存在一定差异，但主要以G1、G3型为主，2001年以前以G1型最多，2001年以后则主要为G3型［8］。本研究结果显示，轮状病毒基因型以G3型为主，占88.4%，其次为G2型，占2.8%，G4型占1.6%。毋跃文等［9］对乌鲁木齐地区腹泻患儿连续多年进行轮状病毒基因型监测，结果显示， 2007年轮状病毒流行株为G1型，2010年G 3型取代G 1型成为流行株，2012年监测发现，G9型已成为新的流行优势毒株，而且，G2型成为该地区的第二大优势毒株，表明轮状病毒基因分型流行株在不同地区具有不同特点，提示在全国各地持续监测轮状病毒流行特点对于采取适当的对症干预措施具有重要意义。

综上所述，轮状病毒感染性腹泻好发于0～1岁年龄段婴幼儿，秋冬季高发。婴幼儿出现腹泻时除进行大便常规检查外，还应进行轮状病毒抗原检测，以针对病因采取适当的治疗方法。轮状病毒基因型具有多样性，不同地区不同年度流行株存在一定变异，从已有研究来看，G2、G3、G4型临床特点为病程短，脱水程度轻，腹泻次数少，电解质紊乱及酸中毒少见，而G1型感染患儿的临床症状较其他型重，高热多见，脱水主要为中度以上脱水，便次增多明显，常合并电解质紊乱，临床应加强补液降温、纠正酸碱和电解质平衡等治疗措施［10］。各地应长期监测轮状病毒的最新流行特征，为临床治疗提供依据。

［1］Tate JE， Burton AH， Boschi-Pinto C， Steele AD，Duque J，Parashar UD.2008 estimate of worldwide rotavirus-associated mortality in children younger than 5 years before the introduction of universal rotavirus vaccination programmes:a systematic review and metaanalysis［J］. Lancet Infect Dis，2012，12（2）:136-141

［2］朱铭.烟台地区2013年腹泻患儿轮状病毒、肠道腺病毒病原学检测结果分析［J］.临床军医杂志，2014，42（10）:1054-1058.

［3］张斗星，胡安群，袁舟亮.安徽省安庆地区婴幼儿腹泻轮状病毒的检测及流行病学特征［J］.国际检验医学杂志，2012，33（9）:1080-1081.

［4］费燕楠，刘行超，曾桂芬，莫姗.腹泻婴幼儿轮状病毒结果分析［J］.国际检验医学杂志，2012，11（22）:2788.

［5］陈飞，汤成玉.2635例腹泻患儿粪便中A群轮状病毒抗原检测结果分析［J］.国际检验医学杂志，2013，34（12）:1547-1548.

［6］包增兰，黄明春，梁冰，谭峰云，庞智东，汤华波，宋春芳.南宁地区2008～2011年婴幼儿轮状病毒腹泻与流行病学［J］.中国妇幼保健，2013，28（22）:3641-3643.

［7］Tate JE，Cortese MM. Uptake，impact，and effectiveness of rotavirus vaccination in the United States:review of the first 3 years of postlic ensure data［J］. Pediatr fect Dis J，2011，30 （1）:56.

［8］龚智翔，曾玫，朱启镕，倪武，缪晓辉.上海地区儿童A组轮状病毒腹泻的分子流行病学［J］.中华传染病杂志，2012，30（5）:288-292.

［9］毋跃文，李方，邓红，李新兰.乌鲁木齐市腹泻患儿轮状病毒分子分型［J］.中国公共卫生，2013，29（9）:1353-1354.

［10］刘佩娟.婴幼儿腹泻感染轮状病毒情况分析［J］.国际检验医学杂志，2014，35（23）:3279.

10. 3969/j. issn. 1672-8521. 2016. 02. 014

2016-01-29）