黄连素抗胶质瘤的作用机制

2016-10-25朱天信刘玉翠于洪泉

中国老年学杂志 2016年16期

关键词：黄连素胶质瘤吉林

刘　冰　臧　琳　金　嵩　朱天信　刘玉翠　杨　阳　姜　畅　齐　玲　于洪泉

(吉林医药学院附属465医院，吉林　吉林　132013)

黄连素抗胶质瘤的作用机制

刘冰臧琳1金嵩1朱天信1刘玉翠1杨阳1姜畅1齐玲1于洪泉2

(吉林医药学院附属465医院，吉林吉林132013)

目的探讨黄连素对大鼠恶性脑胶质瘤C6细胞生长的作用。方法培养恶性脑胶质瘤C6细胞，MTT法检测黄连素对C6细胞生长增殖的抑制作用，并且观察药物对细胞生长的影响。结果12.5、25、50、100 μmol/L黄连素均可以明显抑制C6细胞的生长，倒置显微镜下观察到药物作用后细胞密度明显降低。结论黄连素能明显抑制脑胶质瘤细胞的生长增殖。

黄连素；恶性胶质瘤

黄连素(也称为盐酸小檗碱)是一种常见的异喹啉类生物碱，对多种革兰阳性菌和阴性菌的生长均有抑制作用，临床上主要用于清热解毒和治疗肠道感染。此外，临床观察还发现：黄连素还具有抗心律失常、改善心力衰竭、降血压、降血脂、降血糖和治疗消化性溃疡等作用。近年发现，其在肿瘤治疗中也发挥一定的作用。本实验拟研究黄连素对脑胶质瘤细胞生长的影响及作用。

1　材料与方法

1.1细胞株与试剂C6细胞由吉林医院学院科研实验室提供；新生小牛血清RPMI-1640培养基购自于美国Hyclone公司，0.25%胰酶和青链霉素购于美国Gibco公司，二甲基亚枫(DMSO)购于美国Thermo公司，四甲基偶氮唑盐(MTT)购于美国Sigma公司。50 mmol/L黄连素原液用DMSO配制后保存备用。

1.2方法

1.2.1细胞培养复苏C6细胞，用10% 1640培养基重悬细胞，混匀后将细胞置于培养板中，置入孵箱培养，隔日换液，1∶3传代。

1.2.2MTT分析将生长状态良好的C6细胞用0.25%胰蛋白酶消化后，用10%1640培养基重悬制成8×104个/ml密度的细胞悬液，每孔100 μl接种于96孔细胞培养板中，将细胞培养板置于培养箱中培养过夜。次日加入12.5、25、50和100 μmol/L黄连素继续培养，0浓度作为对照组，每组5个复孔。黄连素作用48和72 h，实验终止前4 h每孔加入20 μl MTT孵育，甩板后每孔加入150 μl DMSO均匀振荡10 min，全自动酶标仪波长490 nm处测定每组各孔的吸光度值。

1.2.3倒置显微镜观察取6孔培养板，以每孔1×105个细胞密度将细胞均匀接种于6孔板中，加入12.5 μmol/L黄连素培养，作用72 h，设0浓度为空白对照组，实验结束后将培养板置于显微镜下观察并拍照。

1.3统计学方法应用SPSS17.0软件行t检验。

2　结　果

2.1黄连素对胶质瘤细胞生长的影响12.5、25、50和100 μmol/L的黄连素在作用C6细胞48和72 h均可以抑制C6细胞的生长，与对照组比较，48 h时25、50 μmol/L黄连素组有统计学差异(P<0.01)；72 h时，12.5、25、50和100 μmol/L黄连素组均有统计学差异(P<0.01)；且随着时间的延长，对C6细胞增殖的抑制作用越明显。见表1。

表1　不同浓度黄连素对C6细胞增殖的影响±s，n=5，A值)

与对照组比较：1)P<0.01

2.2黄连素对C6细胞生长形态的影响空白对照组(0 μmol/L)：在培养瓶内大量细胞贴壁生长，呈长梭形，分布有大量的呈圆球状生长活跃的肿瘤细胞；黄连素组(12.5 μmol/L)：贴壁生长细胞的密度明显降低，有的细胞明显皱缩，还可见到部分细胞碎片。见图1。

图1　黄连素对C6细胞生长形态的影响

3　讨　论

脑胶质瘤是发病率、病死率最高的一种中枢神经系统原发性肿瘤〔1〕，约占颅内肿瘤的44.60%〔2〕。按照病理恶性程度分为四级，其中Ⅲ～Ⅳ级为恶性胶质瘤，肿瘤的生长速度快、患者的病程短，并且生长时肿瘤与正常脑组织无明显的界限，这就造成恶性胶质瘤的治疗较其他肿瘤的治疗更困难。目前，脑胶质瘤的治疗主要采用手术及术后放、化疗的方式，术后生存率低。调查显示，脑胶质瘤患者放、化疗结合的平均时间是51～73 w，而单独使用放射治疗的中位时间是35 w〔3〕。美国的两项大型研究表明，单纯放疗患者18个月生存率为38.4%，而放化疗结合者18个月的生存率为44.9%〔4〕。

黄连素具有清热解毒、抗炎杀菌的作用，一直以来广泛应用于胃肠道感染的治疗。本实验研究了不同浓度的黄连素对脑胶质瘤生长的抑制作用。12.5、25、50和100 μmol/L黄连素在作用48 h和72 h，均可以明显地抑制胶质瘤细胞的生长，作用呈明显的时间效应。黄连素作用后细胞的生长明显受影响，镜下可以观察到C6胶质瘤细胞密度明显地降低，细胞出现明显地皱缩，有的细胞出现破裂死亡〔5～8〕。

综上所述，黄连素可以促使胶质瘤细胞死亡而抑制肿瘤细胞的体外生长，但其机制还有待在今后的实验中深入研究。

1师蔚，郭振宇.脑胶质瘤发病机制、诊断与治疗的研究进展〔J〕.中华神经医学杂志，2007；6(9)：869-71.

2张纪.深入开展胶质瘤综合治疗及其基础研究〔J〕.中华神经外科杂志，2003；19(1)：1-2.

3Wakimoto H，Kesari S，Farrell CJ，etal.Human gliblastoma-derived cancer stem cells：establishment of invasive glioma models and treatment with encolytic herpes simplex virus vectors〔J〕.Cancer Res，2009；69(8)：39-43.

4Deangelis LM.Anaplastic glioma：how to prognosticate outcome and choose a treatment strategy〔J〕.J Clin Oncol，2009；27(35)：5861-2.

5张茜，肖新华，王彤，等.黄连素降糖调脂机制的研究〔J〕.中国实验动物学报，2011；19(1)：29-33.

6杨萍.黄连素临床应用及研究的新进展〔J〕.天津药学，2011；23(3)：69-72.

7郑凌云，周祖玉，陶大昌，等.黄连素对缺血再灌注心肌细胞损伤的保护作用〔J〕.四川大学学报(医学版)，2003；34(3)：452-4.

8台卫平，田耕，黄业斌，等.盐酸小檗碱抑制结肠癌细胞环氧化酶-2/钙离子途径〔J〕.中国药理学通报，2005；21(8)：950-3.

〔2015-12-11修回〕

(编辑袁左鸣)

吉林省科技厅国际合作项目(No.20140414049GH)；吉林省卫生厅项目(No.2014Z104)；吉林省大学生创新创业项目(No.2014)

齐玲(1974-)，女，副教授，主要从事脑肿瘤研究。

于洪泉(1974-)，男，副主任医师，主要从事脑肿瘤研究。

刘冰(1980-)，女，主治医师，主要从事中药研究工作。

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