两种猪伪狂犬病gB抗体检测方法对比试验

郭慧娟　王成龙

[中图分类号]S858.28 [文献标识码]B [文章编号]1003—1650 Q016）03—0248—01

猪伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由猪伪狂犬病病毒（Pseudotabies virus，PRV）引起的一种高度接触性传染病。猪是本病的主要宿主和传染源，健康猪与病猪、带毒猪直接接触可感染本病。通常引起妊娠母猪流产、木乃伊胎、死胎和产弱仔；初生仔猪出现神经症状，感染率和死亡率可达100%，成年猪感染后多耐过，不发病呈隐性感染，造成长期带毒排毒，成为最危险的传染源，严重影响种猪场生产。本病广泛分布于世界各地，已有50多个国家和地区报道该病的流行，给养猪业构成很大威胁。我国自1947年首次报道该病以来，随着养猪业集约化规模化的发展，已有20多个省市报道发生了该病，并在许多种猪场呈暴发流行趋势，给我国养猪业造成了巨大的经济损失。伪狂犬病病毒属于疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科猪疤疹病毒Ⅰ型（Suid Herpesvirus Ⅰ，SHV-Ⅰ），病毒粒子呈圆形或椭圆形外观，核衣壳含病毒基因组DNA和核衣壳蛋白，核衣壳外被一层非晶体状蛋白样结构（tegument）所包裹，病毒粒子最外层是病毒囊膜（envobpe），它是由宿主细胞膜结构衍生而来的脂质双层结构，囊膜上镶嵌有病毒编码的囊膜蛋白，大多是糖蛋白。α-疱疹病毒中至今已鉴定的糖蛋白有gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM和gN，除gG外其余都是病毒粒子结构成分。目前已对PRV的多种糖蛋白进行了结构和功能的研究，糖蛋白gB是猪伪狂犬病病毒的一种主要糖蛋白，能诱导机体产生中和抗体，是PR V免疫抗体评价的首先蛋白。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1仪器酶标仪M 550型，购自Bio-R ad公司：洗板机ELx50型，购自B io-Tek公司。

1.1.2试剂盒PRV gB-I-E L ISA试剂由河南省农业科学院动物免疫学重点实验室提供，主要成分包括抗原包被E LISA板2块，抗体稀释液1瓶，辣根过氧化物酶标记的养抗猪IgG 1支，底物A液和B液各1瓶，终止液1瓶；爱德士PRV-gB ELISA试剂盒为美国美国ID EXX公司產品。

1.2方法

1.2.1 PRV gB-I-ELISA 操作程序按常规间接E LISA方法进行。结果判定：按方法说明书中，阴、阳性血清效价的临界值为0.3，根据标准阳性和阴性对照血清和检测样品的0 D450nm吸光值计算被检样品的效价，血清样本抗体效价=（样品的0 D450nm值-阴性对照的0 D450nm值）/（阳性对照的0 D450nm值-阴性对照的0 D450nm值）计算每一份血清效价。当效价≥3.0时判为阳性，效价<0.3时判为阴性。

2结果与分析

2.1 PRV感染血清检测结果

PRV感染猪血清检测结果见表1。检测350份PRV感染猪血清，ID EXX PRV-gB EL ISA和PRV gB-I-ELISA检测均为阳性的血清319头份，均为阴性的有12头份，二者检测结果不一致的有19头份，符合率为94.6%（331/350）。

2.2 PR V免疫血清检测结果

PRV免疫猪血清检测结果见表2。共检测420头份，其中，ID EXX PRV-gB E LISA和PRV gB-I-ELISA检测均为阳性的血清362头份，均为阴性的有23头份，二者检测结果不一致的有35头份，符合率为91.6%（385/420）。

根据两种不同背景的猪血清，用两种ELISA方法检测，总符合率为92.6%（792/855），说明两种方法检测结果基本一致，所建立的PRV gB-I-ELISA方法具有较好的特异性和敏感性，可以用于评价猪PRV gB抗体。

3讨论

疫苗免疫我国控制PRV的主要措施，因此检测血清抗体效价，评估免疫抗体水平至关重要。常用的PRV免疫抗体检测方法主要有中和实验（SNT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、乳胶凝集试验（LAT）等，其中，ELISA被列为国际贸易种PRV抗体检测的指定方法。本研究团队利用PRV gB蛋白抗原富集区为诊断抗原，成功建立了PRV gB抗体间接ELISA方法（gB-I-ELISA），为进一步评价该ELISA方法的性能，本研究通过检测PRV感染血清、免疫血清和临床血清样品，通过与商品化的爱德士PRV gB抗体ELISA试剂盒对比，所研制EL ISA方法的特异性和敏感性，二者的符合率为92.6%，可以用于评价猪PRY gB抗体，为PRY免疫抗体监测、母源抗体评估以及免疫程序制定提供参考依据。