红花超临界提取物的GC睲S成分分析及抗菌活性研究

马家麟 达洛嘉 高世宝等

摘要[目的]了解红花超临界CO2萃取物的化学成分并检测其抑菌活性。[方法]采用气相色谱-质谱联用（ GCMS） 技术对超临界 CO2提取的红花成分进行分析，并采用滤纸片法检测萃取物对6种常见病原菌的抑菌活性。[结果]从红花萃取物中鉴定了41个化合物，占总萃取物的52.11%。红花超临界萃取物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念球菌、枯草芽孢菌有抑制作用。[结论]该试验为红花的进一步研究及开发利用提供科学依据。

关键词红花；超临界CO2萃取；GCMS；抗菌活性

中图分类号S567.21+9文献标识码A文章编号0517-6611（2016）04-172-03

GCMS Component Analysis and Antibacterial Activities of the Supercritical Extracts from Carthamus tinctorius L.

MA Jialin， DA Luojia， GAO Shibao， LIN Pengcheng* et al（College of Pharmacy， Qinghai University for Nationalities， Key Laboratory of Plant Resources of QinghaiTibet plateau in Chemical Research， Key Laboratory of Pharmaceutical Analysis in Qinghai Province， Xining ，Qinghai 810007）

Abstract[Objective] To analyze the chemical components of supercritical CO2 extracts from Carthamus tinctorius L.， and to detect their antibacterial activities.[Method] Components of C.tinctorius were analyzed by GCMS.Antibacterial activities of six common pathogens were screened by fitter paper method.[Result] A total of 41 compounds were identified from C.tinctorius extracts， accounting for 52.11% of the total extracts.C.tinctorius extracts had inhibitory effects on Staphylococcus aureus， Pseudomonas aeruginosa， Tritirachium album and Bacillus subtilis.[Conclusion] This research provides scientific references for the further research and development of C.tinctorius.

Key wordsCarthamus tinctorius L.； Supercritical CO2 extraction； GCMS； Antibacterial activities

紅花是菊科一年生草本植物红花（Carthamus tinctorius L.）的花冠，别名草红花，在我国新疆吉木萨尔、河南新乡、四川简阳等地大量种植，资源量丰富[1]。红花为传统中藏药，主要用于治疗冠心病、心绞痛、跌打损伤、高血压及妇科疾病等[2]。现代药理学研究发现，红花具有降低冠脉阻力[3]、抑制血小板聚集[4]、改善心脑血液循环[5]、抗炎[6]及抗肿瘤[7-8]等功效，进一步研究发现其主要有效成分为红花黄色素、羟基红花黄色素、多糖类等水溶性成分[9]。但对于红花超临界萃取物的化学成分及抑菌活性的报道极少。笔者采用超临界CO2萃取了红花花冠的脂溶性成分，并对其化学成分和抗菌活性进行了初步的研究，为红花脂溶性成分的开发利用提供科学依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1仪器。HA2214012 超临界萃取装置（江苏南通华安超临界萃取有限公司）；7890A5975C 气相色谱质谱联用仪（美国安捷伦公司）；粉碎机（永康市红太阳机电有限公司）；HZQX100A型恒温振荡培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；AS1060L型高压灭菌锅（邝杏生物技术有限公司）；SWCJ2FD型超洁净工作台（苏州净化设备有限公司）。

1.1.2试材。红花采集于青海民族大学药学院多巴试验基地。

1.1.3试剂。营养琼脂、蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、甲醇、丙酮、供试菌株见表1，均购于中检所。

1.2方法

1.2.1红花超临界CO2萃取。收集红花花冠，阴干。称取干燥红花100 g装入萃取罐，升温萃取罐温度至50 ℃，通入CO2，萃取压力设定为25 MPa，静态萃取1.5 h。

1.2.2红花挥发油GCMS保留指数分析。

1.2.2.1样品制备。取2 mg红花超临界CO2萃取物溶于2 mL甲醇，充分溶解备用。

1.2.2.2色谱条件。进样口温度为250 ℃；色谱柱为HP5 弹性石英毛细管柱（30 m×250 μm，0.25 μm）；载气为He气，柱流量0.8 mL/min。进样量为5 L。手动进样的程序升温条件：初始温度60 ℃，保持1 min，再以3 ℃/min 升至150 ℃，保持5 min；以5 ℃/min升至260 ℃，保持10 min。

1.2.2.3质谱条件。标准质谱调谐；电离方式为EI，电子能量为70 eV；离子源温度230 ℃；四级杆温度150 ℃；辅助区温度295 ℃；溶剂延迟时间3 min；数据采集扫描模式为全扫描；质谱扫描质量范围（m/z）为50～550。

1.2.2.4相对保留指数（KI）的测定。手动进样针精密移取正构烷烃混合对照品5 μL，按照“1.2.2.3”条件直接进样，经程序升温后得到条件分析结果，用于组分的KI 值计算。记录该条件下C7～C30各正构烷烃的保留时间，采用线性升温公式KI=100n +100（tx-tn）/（tn+1-tn）计算各组分的KI 值，其中tx、tn和tn+1分别为被分析组分流出峰的保留时间和被分析组分保留时间相邻的碳原子数处于n 和n+1 之间的正烷烃（tn

1.2.3红花挥发油抗菌活性筛选。采用滤纸片琼脂平板扩散法对红花超临界萃取物抑菌圈的直径进行测定。用丙酮溶解萃取物至浓度分别为1.00、0.50、0.25 mg/mL，以丙酮溶液作为空白对照，细菌35～37 ℃培养18～24 h，白色念球菌20～25 ℃培养24～48 h后测量抑菌圈的直径。每个菌种做3个平行组。

2结果与分析

2.1超临界CO2提取红花挥发油在萃取压力25 MPa、萃取温度50 ℃、静态萃取1.5 h后得红花萃取物2.85 g。

2.2挥发油成分分析以峰面积归一化法计算萃取物各组分相对含量，对相对峰面积>0.01%的组分进行鉴定。对各峰质谱图进行NIST 标准谱库检索，选取质谱匹配度高的前10 个可能物质，计算其KI 值，并与NIST 库KI 值检索结果相比较，以质谱和KI 值匹配度最高的化学结构为最佳鉴定结果。结果发现（表2），从红花挥发油中鉴定出41种成分，占挥发油总量的52.11%；含量最高的是間十五烷基酚（10.70%），其次为棕榈酸（8.30%）、1，4环己二酮单乙二醇缩酮（7.14%）、（Z）7十二碳烯1醇乙酸酯（4.71%）、亚麻酸（3.33%）、硬脂酸（3.10%）、丁位辛内酯（2.55%）、二十烷（2.24%）、1十九烯（2.07%）。

2.3红花挥发油的抑菌活性测试由表3可见，红花超临界萃取物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌有较好的抑制作用，对白色念球菌抑制作用较差，随着萃取物浓度的降低，抑菌效果随之减弱；对藤黄微球菌和大肠杆菌没有抑制作用。

3结论

该试验采用超临界CO2萃取红花脂溶性部位，用GCMS结合相对保留指数分析了萃取物的化学成分，并采用滤纸片法检测萃取物对6种常见病原菌的抑菌活性。结果表明，从红花萃取物中鉴定出41种成分，占总萃取物的52.11%；酯类、酸类及烷类相对含量较高，其中以间十五烷基酚、棕榈酸、（Z）7十二碳烯1醇乙酸酯、亚麻酸、硬脂酸的相对含量较为丰富；生物活性测试表明红花超临界萃取物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌有较好的抑制作用，对白色念球菌抑制作用较差。

参考文献

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[5] 张学丽， 李进磊.浅谈红花黄色素的药理作用及临床应用[J].中外医学研究， 2011， 8（30）：168-169.

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[7] 马新博， 石学魁， 宫汝飞，等.红花多糖对人胃癌 SGC-7901 细胞线粒体膜电位及增殖的影响[J].广东医学，2013，34（7）：1002-1005.

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