大豆及3种豆制品中大豆异黄酮组分的含量研究

潘妍 贾红亮 汪长钢 李凌燕

摘要[目的]建立高效液相色谱法测定大豆及3种豆制品中大豆异黄酮组分和含量的方法，研究其大豆异黄酮组分的差异。[方法]将供试样品用80%甲醇溶解提取，净化后用WondaSil C18 WR（4.6×250 mm，5 μm）色谱柱分离，以乙腈和磷酸水溶液（pH 3.0）作为流动相，流速1 mL/ min，柱温为40 ℃，用二极管阵列检测器在波长260 nm检测大豆异黄酮组分，用外标法进行定量。[结果]大豆及3种豆制品中大豆异黄酮的含量，大豆最高，其次是豆芽、豆腐、豆浆。供试样品的大豆异黄酮组分中大豆苷相关系数为0.997 2，黄豆黄苷相关系数为0.999 6，大豆苷元相关系数为0.994 7，黄豆黄素相关系数为0.999 1，染料木素相关系数为0.994 2，平行测定结果之差均低于算术平均值的10%。[结论]高效液相色谱法可用于豆制品中大豆异黄酮组分和含量检测。

关键词 高效液相色谱；大豆异黄酮；豆制品

中图分类号 S4133 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2016）09-119-03

Abstract[Objective]A HPLC method for determining the components and content of soybean isoflavone in four soybean products was established.[Method]Samples were extracted with 80% methanol.The HPLC separation was performed on a WondaSil C18 WR（4.6×250 mm， 5 μm） by isocratic elution with acetonitrile and phosphoric acid water solution （pH 3.0） as mobile phase， flow rate 1 mL/ min， column temperature 40 ℃， and 260 nm was detected by diode array detector.[Result]The order of soybean isoflavone content was soybean>bean sprouts>tofu and soy milk.The correlation coefficients of the Daidzin， Glycitin， Daidzein， Glycitin， Genistein were 0.997 2， 0.999 6， 0.994 7， 0.999 1， 0.994 2， respectively.The difference of the parallel test results was lower than that of the arithmetic mean as 10%.[Conclusion]The HPLC method can be used for the detection of soybean isoflavone components and contents in soybean products.

Key words HPLC； Soybean isoflavone； Soybean products

大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的次级代谢产物，是黄酮类化合物，因其结构与雌激素相似，又称植物雌激素。大豆中大豆异黄酮97%以上以糖苷形式存在，苷元仅占总量的2%～3%，其中组成成分有：染料木苷、大豆苷、大豆苷元、 黄豆黄素、染料木素、黄豆黄苷[1-3]。目前，国内检测大豆异黄酮的方法主要有紫外分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法、薄层色谱法等，其中高效液相色谱法具有样品处理简单、操作容易、分离度好、定量准确、可进行组分检测等优点[4-6]。笔者建立了高效液相色谱法测定大豆及3种豆制品中大豆异黄酮组分和含量的方法，并研究了其大豆异黄酮组分的差异。

1 材料与方法

1.1 材料 大豆，市购；豆腐，市购；豆芽，自制；豆浆（料液比120∶1 g/L），豆浆机打浆。主要试剂：大豆苷、黄豆黄苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素中药对照样品，成都曼思特生物科技有限公司；石油醚、甲醇、乙醇，均为分析纯；其他为常规试剂。

主要仪器：小熊DYJS6365豆芽机，广东小熊电器有限公司；DJ12BA10豆浆机， 九阳股份有限公司；高效液相色谱仪（LC20A）配二极管阵列检测器（SPDM20A），日本岛津。

1.2 方法

1.2.1 材料准备。

选取同批市购大豆，加入2倍豆重水量，25 ℃下浸泡8 h后，放入豆芽机，选取发芽3 d的豆芽作为研究对象。称取同批市购大豆100 g，加入1 L纯净水，用豆浆机打浆，豆浆作为研究对象。

1.2.2 大豆、豆芽样品预处理。

大豆用粉碎机粉碎，豆芽用打浆机打碎，用沸点为 30～60 ℃的石油醚，经索氏抽提装置抽提 24 h除油，將除油后的豆粕放在通风橱中过夜，将残留的石油醚挥发干后，进行再次粉碎，并过80目筛。准确称取豆粕0.5 g，加入80%甲醇 50 mL，超声波振荡仪振荡20 min，9 000 r/min离心5 min，取上清液，过0.45 μm膜待测。

1.2.3 豆浆样品预处理。

准确量取5 mL豆浆于50 mL容量瓶中，加入80%甲醇溶液至接近刻度。超声波振荡仪振荡20 min，9 000 r/min离心5 min，取上清液，过0.45 μm膜待测。

1.2.4 豆腐样品预处理。

准确称取0.5 g豆腐于研钵中，加入80%甲醇溶液研磨，并转移至50 mL容量瓶中，加入80%甲醇溶液至接近刻度。超声波振荡仪振荡20 min，9 000 r/min离心5 min，取上清液，过0.45 μm膜待测。

1.2.5 高效液相色谱法检测大豆异黄酮含量。

色谱柱：WondaSil C18 WR（5 μm）；检测器：二极管阵列检测器（SPDM20A）；检测波长：260 nm；柱温：40 ℃；流动相：乙腈-磷酸水溶液（pH 3.0）；流速：1 mL/min；进样量10 μL。

2 结果与分析

2.1 色谱条件选择

用紫外分光光度计对大豆异黄酮组分混标进行全波长扫描，结果发现，大豆异黄酮在260 nm处有最大吸收，因此选择260 nm作为检查波长。

研究了不同pH的磷酸水溶液和乙腈对大豆异黄酮各组分的分离和保留时间的影响，最终选择pH为3.0的磷酸水溶液作为流动相，洗脱梯度见表1。

2.2 大豆异黄酮组分线性关系

采用“1.2.5”色谱条件对单个标品进行分析，确定大豆异黄酮组分保留时间为：大豆苷16.014 min、黄豆黄苷17.228 min、大豆苷元34.308 min、黄豆黄素36.013 min、染料木素45.485 min。配制8.0、16.0、24.0、32.0、40.0 mg/L大豆异黄酮混合标准使用液，用50%二甲基亚砜定容，用高效液相色谱测定大豆异黄酮混合标准使用液，色谱图如图1所示。

2.3 大豆及3种豆制品中大豆异黄酮组分含量 用高效液相色谱法检测大豆、豆芽、豆浆和豆腐中大豆异黄酮组分含量，其色谱图如图2～5所示。计算4种豆制品中各组分占原料的比重，其结果如表3所示。

试验表明，大豆及3种豆制品中大豆异黄酮组分各不一样，其中大豆中大豆异黄酮含量最高；其次是豆芽、豆腐；豆浆中大豆异黄酮含量最少，推断是豆浆制作过程中对大豆中大豆异黄酮提取不充分。大豆中大豆异黄酮组分含量大小依次为：大豆苷、黄豆黃苷、黄豆黄素、染料木素、大豆苷元；豆芽中大豆异黄酮组分含量大小依次为：大豆苷、染料木素、大豆苷元、黄豆黄素、黄豆黄苷；豆浆中大豆异黄酮组分含量大小依次为：染料木素、黄豆黄素、大豆苷、黄豆黄苷、大豆苷元；豆腐中大豆异黄酮组分含量大小依次为：大豆苷、染料木素、大豆苷元、黄豆黄苷、黄豆黄素。

3 结论与讨论

该试验建立了高效液相色谱法测定大豆及3种豆制品中大豆异黄酮组分含量的方法，方法分离度好，准确度高，能够满足日常食品检测的需求。该试验对大豆异黄酮提取过程未进行方法比较，在今后会进一步完善试验。目前，大豆异黄酮及其在药品、保健品、食品上的应用非常普遍。我国是大豆生产大国，可为大豆异黄酮的扩大生产提供原料保证。研究大豆及3种豆制品中大豆异黄酮组分及含量对居民合理选择食用大豆及其制品有指导意义，同时也对我国大豆异黄酮及其深加工产品的开发有重要意义。

参考文献

[1]张永忠，孙艳梅.大豆异黄酮研究中的名词术语[J].中国粮油学报，2004，19（4）：50-52.

[2]刘志胜，李里特，辰巳英三.大豆异黄酮及其生理功能研究进展[J].食品工业科技，2000（1）：78-80.

[3]马丽娟.大豆异黄酮对心肌的保护作用及其机制研究[D].长春：吉林大学，2006.

[4]胡斌，邓放明，唐春江.大豆异黄酮的生理功能及检测方法研究进展[J].农产品加工（学刊），2008（5）：82-85.

[5]井乐刚，张永忠.高效液相色谱法测定大豆乳清提取物中大豆异黄酮的含量[J].植物研究，2006，26（5）：629-632.

[6]旷勇，卢成瑛，龚竹琼，等.固相萃取-高效液相色谱法同时测定发酵豆制品中4种大豆异黄酮[J].安徽农业科学，2014（4）：1178-1180.