HPLC法快速测定竹凉席中的罗丹明B

2016-09-28卢桂英程水连何建国宋艳春

中国新技术新产品 2016年16期

关键词：凉席罗丹明标准偏差

卢桂英程水连何建国宋艳春

（湖南省益阳市产商品质量监督检验所，湖南益阳 413000）

HPLC法快速测定竹凉席中的罗丹明B

卢桂英程水连何建国宋艳春

（湖南省益阳市产商品质量监督检验所，湖南益阳 413000）

建立了快速测定竹凉席中染色剂罗丹明B的含量的方法。以甲醇水溶液超声提取，用高效液相色谱法（荧光检测器）测定，峰面积外标法定量，在优化条件下，罗丹明B的质量浓度在0.5～100.0ng/mL范围内与色谱峰面积呈现良好的线性关系，线性相关系数r=0.9999，检出限为3.0ng/L，加标回收率为87.0%～100.2%，得到罗丹明B的质量浓度和保留时间的相对标准偏差分别为1.24%和0.05%。该方法样品处理简单、快速，适用于竹凉席中罗丹明B的日常检测。

罗丹明B；高效液相色谱法；荧光检测器；竹凉席

罗丹明B，又称玫瑰红B，或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成染料。罗丹明B在溶液中有强烈的荧光，用作实验室中细胞荧光染色剂及有色玻璃、特色烟花爆竹等行业。本研究建立了一种准确、灵敏的检测竹凉席中的罗丹明B含量的方法，该方法样品前处理简单、罗丹明B的色谱峰形好、定量结果具有很好的重现性、精密度，该方法有着重要的实际应用价值。

1.试验部分

1.1仪器和试剂

WH-400超声清洗器（济宁万和超声电子设备有限公司）；LC-MS2020液相色谱仪，带荧光检测器，（日本岛津公司）；LP502A型分析天平，感量0.0001g，（常熟市百灵天平仪器有限公司）；中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；标准筛100目；0.45μm有机微孔滤膜；超纯水器（艾柯公司）。

1.2方法

1.2.1标准曲线各浓度溶液的配制

标准溶液的配置：精密称取罗丹明B0.0500g置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并准确定容至刻度，摇匀，配成质量浓度为0.5mg/mL的罗丹明B标准储备液。标准工作液的配制：用流动相将上述标准液稀释为0.5ng/mL，1.0ng/mL，5.0ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，的工作液。此工作液现配现用。

1.2.2样品的制备

取烘干至恒重的竹凉席块切小，放入中草药粉碎机中粉碎，过60目的分子筛，取混合均匀的样品2g，放入100mL的容量瓶中，加色谱纯甲醇至刻度，超声提取30min，静置5min后，取上清液过0.45μm有机微孔滤膜后，用液相色谱仪测定。

1.2.3色谱分析条件

色谱柱：C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒度5μm；柱温：35℃。

进样量：10μL；流速：1.0mL/min；流动相：甲醇和水（比例为60：40）。

荧光条件：激发波长（Ex）550nm，发射波长（Em）580nm。

2.结果与讨论

2.1检测器及检测波长的选择

因罗丹明B的甲醇溶液有强烈的荧光，相比紫外检测器，荧光检测器的灵敏度更高，而荧光检测器相比于质谱检测器，价格更优惠，实验室使用更普及些，因此选用荧光检测器作为高效液相的检测器测定罗丹明B；通过对罗丹明B的标准溶液进行光谱扫描可知，罗丹明B在550nm处吸收峰最大，因此将选定为550nm为激发波长（Ex），580nm为发射波长（Em）。

2.2样品提取条件的选择

罗丹明B是酸碱两性化合物，易溶于水、甲醇、乙腈等。其中甲醇溶液呈现玫瑰红色，有强烈的荧光，故选用纯的甲醇提出。因罗丹明B是易溶的物质，而且超声提取是最简单快捷的提取方法，所需要时间短，溶剂量少而且提取完全，因此采用超声提取法。超声提取后，样品溶液直接进液相色谱分析，待测组分的损失少，回收率也很高。

表1　精密度试验结果

表2　回收试验结果（n=6）

2.3色谱条件的选择

根据罗丹明B的性质采用反相液相色谱法，C18，（150mm×4.6mm，5μm）色谱柱进行分离，该色谱柱由于粒径小，比表面积大，柱效显著提高，色谱分析比较理想。流动相选择：分别尝试了不同比例的甲醇-水溶液进行洗脱，并尝试了梯度洗脱方式，发现当甲醇与水的比例为60∶40，进行等度洗脱时，峰形很好，如图1和图2所示，图1为罗丹明B标准色谱图，出峰时间为13.157min。图2为样品的色谱图，出峰时间为13.170min。因此选择了甲醇-水为60∶40的体系作为流动相，等度洗脱方式。

2.4线性方程及检出限

用罗丹明B标准储备溶进行稀释，配置以下浓度的罗丹明B工作液：0.5ng/mL，1.0ng/mL，5.0ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，6个水平的工作液。对每个工作浓度液分别平行测定3次，以罗丹明B标准溶液的质量浓度为横坐标（X），以各个浓度水平的色谱峰峰面积为纵坐标（Y）进行线性拟合。结果表明，罗丹明B标准溶液的质量浓度在0.5～100ng/mL范围内与相应色谱峰峰面积呈现良好的线性关系，线性方程为Y=47540X+6123（r=0.9999）。

同等色谱条件下进行空白试验，对空白样平行测定10次，计算相应的标准偏差，以空白的标准偏差的3倍值除以线性方程的斜率，得方法的检出限为3.0ng/g.

2.5精密度试验

对20.0ng/mL的罗丹明B标准溶液进行8次平行测定，测定结果列于表1.并计算8次结果的相对标准偏差，得到罗丹明B的质量浓度和保留时间的相对标准偏差分别为1.24%和0.05%，表明该方法精密度良好。

2.6回收试验

采用没有用罗丹明B染色的竹凉席中添加罗丹明B标准溶液的方法进行回收试验。准确称取相同的空白凉席试样5份，分别加入5.0ng/mL，10.0ng/mL，20.0ng/mL， 30.0ng/mL，50.0ng/mL5个不同水平的罗丹明B标准溶液，进行与样品相同的提取处理和测定，回收试验结果见表2。由表2可知，在添加质量浓度为5.0～50.0ng/mL时罗丹明B的回收率为87.0%～100.2%，相对标准偏差在0.81%～1.21%之间。