穿心莲内酯微球中穿心莲内酯含量测定方法的建立

杨小云,段黎娟，窦运修,付丽娜,庞　榕

(黄河科技学院医学院，河南　郑州　450063)



穿心莲内酯微球中穿心莲内酯含量测定方法的建立

杨小云,段黎娟，窦运修,付丽娜,庞榕

(黄河科技学院医学院，河南郑州450063)

建立了穿心莲内酯微球中穿心莲内酯的含量测定方法。采用紫外分光光度法，精密称量穿心莲内酯适量，用95%乙醇溶液溶解稀释，在200～500 nm 波长扫描，测得最大吸收波长为225 nm。标准曲线为y=29.122x-0.2382，R2=0.9992，表明在5.0～22.5 μg/mL线性关系良好。该方法重现性、回收率和稳定性均符合实验要求，辅料对检测无干扰。

穿心莲内酯微球；紫外分光光度法；含量测定

穿心莲内酯(andrographolide)为爵床科植物穿心莲[Andrographis paniculata Nees]中提取得到的二萜内酯类化合物, 分子式为 C20H30O5, 是中药穿心莲的主要活性成分之一[1]。现代药理研究表明, 穿心莲内酯具有抗炎抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、治疗心脑血管疾病、保肝利胆、抗肿瘤等作用, 具有毒性小, 价格低的特点。明胶微球是明胶的一种衍生物，作为药物载体[ 2]，能够明显降低药物崩解速度，延长体内的存留时间，增加药物疗效[3]。制备微球的方法很多，有乳化 - 化学交联法，挥散有机溶剂法，照射聚合法，加热固化法等，本文采用明胶做基质，采取乳化-化学交联法制备穿心莲内酯明胶微球[4]。

1　主要材料和仪器

穿心莲内酯(含量≥98%)，西安开来生物工程有限公司；明胶，天津市兴复精细化工研究所；异丙醇，天津市德恩化学试剂有限公司；Span-80，天津市四友精细化学有限公司；液体石蜡，郑州派尼化学试剂厂；37%甲醛，洛阳市化学试剂厂；95%乙醇，郑州派尼化学试剂厂。以上试剂均为分析纯。

TU-1810紫外可见分光光度计，北京谱析通用仪器有限责任公司；CJJ79-1磁力搅拌器，江苏晓阳电子仪器厂-金坛；HH-2双孔电子恒温水浴锅，上海科析试验仪器厂；TL80-1型医用离心机，苏药管械生产；KQ-300V型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；FA1004型电子天平，上海良平仪器仪表有限公司。

2　方法和结果

2.1穿心莲内酯微球的制备

称取适量明胶置于烧杯中，加水静置30 min，使其充分膨胀，于恒温水浴锅中加热搅拌使其溶解，保温备用。精密称取20 mg穿心莲内酯置烧杯中，加入液体石蜡约4 mL，搅匀，再加入司盘-80 0.6 mL，继续搅拌至形成O/W型初乳；将其冷却至0～4 ℃，缓慢加入化学交联剂约1 mL(37%甲醛0.375 mL与异丙醇0.625 mL混合)，用20%NaOH溶液调节pH至8～9，搅拌3 h，高速离心(2600-3000 r/min)破乳析出微球，弃去上层液，保留微球沉淀，微球用适量异丙醇离心5 min，依次洗涤数次，室温干燥得淡黄色的粉末[5]。

2.2检测波长的选择

称取适量穿心莲内酯标准品，用95%乙醇溶液在微热条件下溶解并稀释适当倍数备用；按处方比例称取适量的辅料，置100 mL容量瓶中，用95%乙醇溶液定容，过滤后备用。分别取上述两溶液于紫外分光光度计上在200～400 nm波长范围内扫描，通过紫外扫描得知穿心莲内酯最大吸收波长为225 nm，且辅料在225 nm处有没有干扰。见图1、图2。

图1　空白辅料紫外扫描图谱

图2　穿心莲内酯紫外扫描图谱

2.3标准曲线的建立

精密称取的穿心莲内酯10 mg，置于100 mL容量瓶中，加适量95%乙醇溶解并定容，配制成浓度为0.1 mg/mL的储备液。分别精密移取储备液适量置10 mL容量瓶中，用95%乙醇稀释至刻度，配成穿心莲内酯浓度分别为5,10,12.5,20,22.5 μg/mL的标准品溶液，用紫外-可见分光光度计在225 nm处分别测定，以吸光度(A)对浓度(C)作图，得到线性回归方程y=29.122x-0.2382,R2=0.9992。表明穿心莲内酯在浓度5.0～22.5 μg/mL范围内线性关系良好。

2.4重现性试验

精密称取穿心莲内酯2.0 mg，用95%乙醇溶液定容至10 mL容量瓶中，浓度为0.2 mg/mL。然后分别稀释至浓度为10 μg/mL，15 μg/mL ，20 μg/mL的标准溶液。以95%乙醇溶液为空白，在225 nm 测定吸光度，重复测定5次，试验结果见表1。

表1　穿心莲内酯重现性测定结果

2.5精密度试验

表2　穿心莲内酯日内精密度测定结果

表3　穿心莲内酯日间精密度测定结果

精确配制穿心莲内酯3种浓度的标准溶液，于1 d内分别测定5次，计算日内误差；同法每日测定1次连续测定5 d，计算日间误差，结果见表2、表3。

2.6稳定性试验

取0.2 mg/mL的穿心莲内酯溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h 测定吸光度，结果分别为0.577、 0.567、0.603、0.587、0.585、0.595，RSD为2.18%。结果表明，该方法测定结果稳定性良好。

2.7回收率试验

分别准确称取126.6 mg的空白微球3份，和穿心莲内酯3份混合后置于烧杯中，加入40 mL 95%乙醇，将烧杯置于40～50 ℃的水溶液中先超声1 h，冷却到室温，搅拌震荡3 h 使微球完全水解。微孔滤膜过滤，取续滤液定容至10 mL容量瓶中。在225 nm 处测定吸光度，根据标准曲线方程计算，结果见表4。

表4　穿心莲内酯回收率测定结果

2.8穿心莲内酯微球样品的测定

制得的微球精密称定，然后置于研钵中加入95%乙醇4 mL充分研磨后倒入试管，进行封口处理。将试管置于40～50 ℃的水溶液中超声1 h，冷却至室温，微孔滤膜过滤，取适量续滤液定容至10 mL容量瓶中，以95%乙醇作为空白溶剂，采用此法(紫外分光光度法)测定吸收度，代入标准曲线，可计算微球的载药量和包封率(载药量=微球中所含药物重量/微球总重量×100%；包封率=系统中包封的含药量/系统中包封和未包封的总药量×100%)。三种不同制备工艺条件下制得含药微球的载药率与包封率的结果，结果见表5。

表5　紫外分光光度法测定含药微球的载药量与包封率

3　结　论

近年来，穿心莲内酯应用研究广泛[ 6]，本研究建立了紫外分光光度法，该方法精密度良好，重现性良好，样品在12 h 内性质稳定。标准曲线为y=29.122x-0.2382，R2=0.9992，表明在5.0～22.5 μg/mL线性关系良好。回收率结果良好，说明辅料对于穿心莲内酯的含量测定没有产生干扰。与其它光谱分析方法相比，紫外分光光度法具有灵敏度高，准确度高，重现性好的优点。其仪器设备和操作都比较简单，成本低，分析速度快。本研究各项结果均合格，表明紫外分光光度法可以用于穿心莲内酯微球中穿心莲内酯的含量测定。

[1]叶再元,李曙光.穿心莲内酯的药理活性作用[J].中华中医药学刊,2008,26(5):984-986.

[2]Maria Angela Vandelli ,Marcello Romagnoli ,A less-andra Monti ,Manuela Gozzi,Paolo G uerra,Francesco Rivasi,Flavio Forni.[J].Controlled Release ,2004,96(1):67-84.

[3]余丽丽,范涛,杨黎燕,等.明胶微球载药及其体外释放性能研究[J].化工科技,2012,20( 6):11-14.

[4]陆彬.药剂学[M].北京:中国医药科技出版社,2003:437.

[5]张兴德,郁红礼,周玲玲,等.正交法筛选莪术油微球制备工艺[J].南京中医药大学学报(自然科学版),2007,23(5):304-306.

[6]毋福海,李光喜,梁汉明,等. HPLC测定复方穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量[J].华西药学,2004,19(2):133-135.

Establishment on Content Determination Method of Andrographolide in Andrographolide Microsphere

YANG Xiao-yun, DUAN Li-juan, DOU Yun-xiu, FU Li-na, PANG Rong

(Medical College, Huanghe Science &Technology College, Henan Zhengzhou 450063, China)

A method for the content determination of andrographolide in andrographolide microspheres was established. Using UV spectrophotometry, weighing the appropriate amount of andrographolide, dissolved in 95% ethanol solution diluted in 200～500 nm wavelength scanning, respectively, the maximum absorption wavelength was detected as 225 nm. Results showed that the calculated standard curve was y=29.122x-0.2382, R2=0.9992, with a good linear relationship in 5.0～22.5 μg/mL. The method showed that reproducibility, recovery and stability met the requirement of experiment, and there was no interference from accessories.

andrographolide microspheres; UV spectrophotometry; content determination

杨小云(1985-),女,讲师,研究方向为现代给药系统和制剂新技术。

R969

A

1001-9677(2016)016-0142-03