艾纳香提取前不同处理方法对左旋龙脑含量的影响△

王中洋，杨全，庞玉新，张影波，孙懂华

(1.广东药学院 中药学院，广东 广州 510006；2.中国热带农业科学院 热带作物品种资源研究所/农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室，海南 儋州 571737；3.海南省艾纳香工程技术研究中心，海南 儋州 571737)

艾纳香提取前不同处理方法对左旋龙脑含量的影响△

王中洋1，2，3，杨全1*，庞玉新2，3*，张影波2，3，孙懂华1，2，3

(1.广东药学院 中药学院，广东 广州 510006；2.中国热带农业科学院 热带作物品种资源研究所/农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室，海南 儋州 571737；3.海南省艾纳香工程技术研究中心，海南 儋州 571737)

目的：研究艾纳香提取前不同处理方法对艾纳香中左旋龙脑含量的影响，确定合理有效的提取前处理方法。方法：以左旋龙脑为对照品，以水杨酸甲酯为内标物，采用气相色谱法检测不同荫干时间、不同烘干温度及优化润湿处理方法的艾纳香中左旋龙脑含量的变化。结果：常温情况下左旋龙脑含量随着干燥时间的增加而减少，新鲜样品左旋龙脑含量以干重计为9.151 9 mg·g-1，常温情况下左旋龙脑含量随着干燥时间的增加而减少，24 h内减少最快；烘培温度越高左旋龙脑损失越多，烘焙温度超过50 ℃后损失加快，当烘焙温度为30 ℃时含量以干重计为6.097 8 mg·g-1；料液比为1∶2、润湿时间为20 min时样品左旋龙脑含量最高，以干重计为4.798 3 mg·g-1。结论：艾纳香鲜品左旋龙脑含量高；干燥温度越低时间越短左旋龙脑损失越少；料液比为1∶2、润湿时间为20 min时左旋龙脑含量最高。

艾纳香；前处理；左旋龙脑；气相色谱

艾纳香为菊科艾纳香属植物艾纳香Blumeabalsamifera(L.)DC.的新鲜或干燥地上部分，又名大风艾、冰片艾、大风叶、牛耳艾、娜龙(黎药名)，主产于贵州、广西、海南、广东、云南和台湾等省[1]。其中以贵州分布最为广泛，是该地区的道地药材之一。艾纳香是获取艾片(主要有效成分为左旋龙脑)的重要原料植物[2]。艾片为艾纳香经水蒸气蒸馏升华纯化所得结晶。艾纳香的提取加工主要是农户式小生产，即便较大的生产厂家对艾纳香提取前处理也没有明确的研究[3]。实际生产中艾纳香加工前处理方法主要包括新鲜样品直接加工、荫干后直接提取和荫干样品润湿后再提取，但这几种处理方法的优劣及每种方法的最佳条件没有明确的研究。因此本研究对每种处理方法进行优化后，比较各种处理方法对艾纳香中左旋龙脑含量影响的差异，以期对艾纳香提取加工前处理方法提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

7890A型GC仪(氢火焰离子化检测器、G4513A型16位自动进样器，美国Agilent公司)；KQ-500DB型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；CPA225D型十万分之一电子分析天平(德国Sartorius公司)。

1.2 试剂

左旋龙脑对照品(阿法埃莎化学有限公司，批号：10147015，纯度≥98%)；水杨酸甲酯(天津光复精细化工研究所，纯度≥99.5%)；乙酸乙酯(色谱纯，美国Fisher Scientific公司)；其余试剂均为分析纯。

1.3 样品

艾纳香药材于2015年5月采摘自农业部儋州热带药用植物资源种质圃，经中国热带农业科学院庞玉新副研究员鉴定为菊科植物艾纳香B.balsamifera(L.)DC.。

2 方法

2.1 材料处理

对于新采集的艾纳香叶采取荫干、烘箱烘干、荫干后润湿样品等不同处理方法处理备用。

2.2 GC法检测左旋龙脑

2.2.1 色谱条件 参考文献[4-5]的方法检测左旋龙脑色谱条件，HP-5石英毛细管色谱柱(30 mm×0.32 mm，0.25 μm)；以80 ℃为起始温度，保持2 min，然后以5 ℃·min-1升温至100 ℃，再以20 ℃·min-1升温至200 ℃；进样口温度为220 ℃；氢火焰离子检测器(FID)检测器温度为240 ℃；进样量0.6 μL；分流比为9∶1。左旋龙脑对照品和艾纳香供试品色谱图见图1。

注：1.左旋龙脑；2.水杨酸甲酯；A.水杨酸甲酯+对照品；B.供试品。图1 左旋龙脑对照品和艾纳香供试品色谱图

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取左旋龙脑对照品适量，加乙酸乙酯溶解，置100 mL量瓶中，定容，摇匀，即得质量分数约为1.000 mg·g-1的对照品溶液。

2.2.3 内标溶液的制备 精密称取水杨酸甲酯适量，加乙酸乙酯溶解，置100 mL量瓶中，定容，摇匀，即得质量分数约为1.000 mg·g-1的内标溶液。

2.2.4 供试品溶液的制备 参考文献[6]的方法，分别称取新鲜叶片约3 g，将其剪切为直径1 mm的小段，置50 mL具塞锥形瓶中，精密移取乙酸乙酯25 mL，用封口膜封口，称质量，超声处理(功率：500 W，频率：40 kHz)40 min，静置。再次精密称定，用相应溶剂补足减失的质量，过滤，摇匀后精密吸取2.0 mL，置10 mL量瓶中，加入内标溶液1.0 mL，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.5 线性关系考察 分别精密移取对照品溶液0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mL，置10 mL量瓶中，精密加入内标溶液1 mL，再加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。精密吸取混合对照品溶液0.6 μL，按2.2.1色谱条件进样测定。以对照品中左旋龙脑的质量浓度(X，mg·mL-1)为横坐标，对照品与内标物的峰面积积分比值(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程。考察线性关系是否符合要求。

3 结果与分析

3.1 左旋龙脑检测标准曲线

根据2.2项下检测方法，对左旋龙脑对照品及提取液进行检测，色谱图见图1。按2.2.1色谱条件测定峰面积积分值，以左旋龙脑质量浓度为横坐标(X)，对照品左旋龙脑与内标物水杨酸甲酯的峰面积比为纵坐标(Y)绘制标准曲线，得到线性回归方程：Y=15.407X-0.033 3，r=0.999 5，线性范围为0.012 82～0.205 10 mg·mL-1。

3.2 不同处理方法对左旋龙脑含量的影响

3.2.1 荫干时间对左旋龙脑含量的影响 样品采集后荫干处理，分别在第0、3、6、12、24、48、72、144、192 h按照2.2方法检测艾纳香叶片中左旋龙脑含量。结果见图2。艾纳香叶中左旋龙脑含量随荫干时间的增加而减少，且24 h内减少最快，144～192 h差异无统计学意义。

图2 干燥时间对左旋龙脑含量影响

3.2.2 烘干温度对艾纳香中左旋龙脑含量的影响 将新鲜的样品，分别在30、50、60、70、80、100 ℃下烘干，分别烘3 h，每个处理重复3次，采用2.2项下方法检测艾纳香叶中左旋龙脑含量。结果见图3。艾纳香叶中左旋龙脑含量随干燥温度的升高而减少，当温度高于50 ℃时含量减少加快。因此在样品干燥时应控制干燥温度在50 ℃以下。

图3 烘干温度对左旋龙脑含量影响

3.2.3 荫干后润湿样品对左旋龙脑含量的影响 润湿加水量对左旋龙脑含量的影响：取荫干7 d的样品3.00 g，分别按照料液比1∶1、1∶3、1∶5、1∶7、1∶10加入蒸馏水，润湿20 min，每个处理重复3次，按2.2项下方法检测左旋龙脑含量。结果见图4。结果显示，加水量在1∶5时含量最高，但总体相差不大。

图4 润湿加水量对左旋龙脑含量的影响

润湿时间对左旋龙脑含量的影响：取荫干7 d的样品3.00 g，按照1∶5的料液比加入蒸馏水，分别在第10、20、30、60、120 min取样，每个处理重复3次，按2.2项下方法检测左旋龙脑含量。结果见图5，20 min后艾纳香叶中左旋龙脑含量变化不大。

图5 润湿时间对左旋龙脑含量的影响

润湿方法对左旋龙脑含量的影响：取荫干7 d的样品3.00 g，考察加水比例1∶3、1∶5、1∶7和润湿时间10、20、30 min 交互优化，每个处理重复3次，按2.2项下方法检测左旋龙脑含量。结果见表1，润湿加水量为1∶5，润湿时间为20 min时含量最高，比含量最低的处理组高出13.2%。

润湿方法验证：根据上述结果，取荫干7 d的样品3.00 g，取5份样品按照1∶5料液比加水润湿20 min，按2.2项下方法检测左旋龙脑含量。结果见表2，样品平均质量分数为4.798 3 mg·g-1，RSD值为1.9<2.0。因此，此法润湿样品与交互优化结果一致。

表1 润湿方法交互实验对左旋龙脑含量的影响

注：表中不同小写字母代表组间差异有统计学意义。

表2 优化方法验证结果分析

4 讨论

庞玉新等[6]研究表明，艾纳香荫干前后左旋龙脑含量差异有统计学意义，荫干后艾纳香叶片中左旋龙脑含量较新鲜叶片下降33.64%。本实验对艾纳香的干燥温度和时间及提取前润湿处理方法进行考察及优化。结果显示，艾纳香叶中左旋龙脑含量随荫干时间的增加而减少，24 h内下降最快，144 h后基本稳定，艾纳香样品采收加工以鲜品最好，因此如不能及时加工则尽量在24 h内加工；艾纳香叶片中左旋龙脑含量随干燥温度的升高而降低，且当温度超过50 ℃后左旋龙脑损失加快，故烘干温度越低越好。烘干效果虽较荫干效果略好，但成本较高，因此如需干燥则可以考虑常温荫干。

在生产中会出现采集样品不能及时提取加工的现象，由荫干后润湿加工方法进行优化的结果可知，样品加水量1∶5，润湿时间20 min时左旋龙脑含量最高，比最低含量高15%，但较干燥7 d的样品左旋龙脑含量差异无统计学意义。而不同提取前处理方法对艾粉得率的影响仍需进一步研究。

[1] 官玲亮，庞玉新，王丹，等.中国民族特色药材艾纳香研究进展[J].植物遗传资源学报，2012，13(4)：695-698.

[2] 黄卫东，吕武清.冰片的研究进展[J].中国药业，2008，17(4)：64-66.

[3] 江兴龙，潘俊锋，等.贵州艾纳香产地采收提取艾粉技术研究[J].生物质化学工程，2006，40(1)：17-20.

[4] 庞玉新，黄梅，等.黔琼产艾纳香中主要化学成分含量差异分析[J].广东药学院学报，2014，30(4)：448-452.

[5] 于福来，黄梅，等.栽培艾纳香单株左旋龙脑和总黄酮含量变异分析[J].中国现代中药，2014，16(8)：640-644.

[6] 庞玉新，胡雄飞，等.艾纳香叶片干燥前后的左旋龙脑含量比较[J].中国药房，2014，25(39)：3673-3675.

EffectofDifferentPretreatmentofBlumeabalsamiferaonContentofl-borneol

WANG Zhongyang1，2，3，YANGQuan1*，PANGYuxin2，3*，ZHANGYingbo2，3，SUNDonghua2，3

(1.SchoolofTraditionalChinese，GuangDongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou510006，China；2.TropicalcropsGeneticResourcesInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofCropGeneResourcesandGermplasmEnhancementinSouthernChina，Danzhou，Hainan571737，China；3.HainanProvincialEngineeringResearchCenterforBlumeabalsamifera，Danzhou，Hainan571737，China)

Objective：Study on the influence of different processing methods on the content of(l-borneol)inBlumeabalsamifera(L.)DC，to determine reasonable and effective extraction pretreatment methods.Methods：Thel-borneol as the standard，to Methylis salicylas as internal standard，using GC to detect the shadow of different time，different temperature drying of wet processing method and optimization einar centre-left spin borneol content changes.Results:L-borneol content in normal temperature decreases with the increase of drying time，Fresh samplesl-borneol content on a dry weight for 9.151 9 mg·g-1，normal temperaturel-borneol content with the increase of drying time and reduce，24 h in the fastest decline; Baking temperature higherl-borneol loss more，baking temperature more than 50 ℃ loss accelerated，when the baking temperature is 30 ℃content on a dry weight for 6.097 8 mg·g-1; Solid-liquid ratio of 1∶2，wetting time of 20 minl-borneol content in the highest dry weight 4.798 3 mg·g-1.Conclusion:Blumeabalsamiferafresh goodsl-borneol content high;Drying temperature，the lower the shorter the timel-borneol loss less; The ratio of material to liquid 1∶2，the wetting time of 20 min with the highest content ofl-borneol.

Blumeabalsamifera；pretreatment；l-borneol；GC

2015-09-16)

科技部科研院所技术开发研究专项(2013EG1343239)；贵州重大课题专项计划(黔科合重大专项字[2013]6011号)

*

杨全，教授，研究方向：中药资源；Email：yangquan7208@vip.163.com 庞玉新，副研究员，研究方向：南药资源研究与开发；Tel：(0898)23300268，Email：blumeachina@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.3.022