HPLC法测定复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂中姜黄素含量

黄春青，曹桂红，苌　玲

(贵州省食品药品检验所，贵州 贵阳　550004)



HPLC法测定复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂中姜黄素含量

黄春青，曹桂红，苌玲

(贵州省食品药品检验所，贵州 贵阳550004)

建立复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂中姜黄素的含量测定方法。采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈-0.4%磷酸溶液(45∶55)为流动相，流速1.0mL/min，检测波长为430nm，柱温25℃。姜黄素在3.7～74.6ng范围内线性关系良好(r=0.999 9)，方法回收率为98.23%(RSD=1.39%)。建立的方法简便、快速、准确及可靠，并可用于制剂中姜黄素的定量测定。

姜黄素；复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂；HPLC法；含量测定

0　引言

复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂是由复方珊瑚姜溶液和尿素咪康唑软膏组成的外用复方制剂，主要用于治疗手足癣、甲癣等。其中复方珊瑚姜溶液处方是由复方珊瑚姜汀、冰片、水杨酸及辅料组成，现行质量标准只对水杨酸进行了含量测定，我们曾对处方中冰片及复方珊瑚姜汀的质量控制进行了研究，并对原标准中水杨酸的含量测定方法进行了改进，该试验着重对复方珊瑚姜汀含量控制进行研究。

复方珊瑚姜汀是由珊瑚姜和姜黄两味药材提取制得，珊瑚姜和姜黄两味药材均为姜科姜属植物，其主要有效成分均为姜黄素[1-7]，姜黄素(curcumin)最早是在1870年从姜黄中首次分离出来的一种低相对分子质量多酚类化合物[8，9]，其分子式为C21H20O6，有烯醇式和酮式2种形式，分子量368.37，熔点183℃[9]。姜黄素具有抗炎、抗氧化、调脂、抗病毒、抗感染、抗肿瘤、抗凝、抗肝纤维化、抗动脉粥样硬化等广泛的药理活性，且毒性低、不良反应小[8-15]。为确保产品质量，保证临床用药安全有效，通过实验建立了HPLC法测定复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂中姜黄素的含量，结果表明本法操作简便，快速，重现性好，结果准确。

1　仪器与试剂

仪器：Ultimate3000和Agilent1260高效液相色谱仪；XP205DK电子天平；UV-2550紫外可见分光光度计；Agilent zorbax.sb-C18(4.6×150mm)；依利特Hypersil ods(4.6×200mm)；Thermo C18(4.6×250mm)。

试剂与药品：姜黄素对照品(110823-201004，中国食品药品检定研究院，98.8%)；所有样品均由贵州金桥药业股份有限公司提供，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件的选择

采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈-0.4%磷酸溶液(45∶55)为流动相，流速1.0mL/min，检测波长为430nm，柱温25℃，测定效果良好。根据紫外吸收光谱和查阅相关文献，选定430nm为检测波长。

2.2专属性试验

采用厂家提供的阴性样品，按上述色谱条件进行检测，阴性样品未见吸收峰；测定样品中姜黄素峰的保留时间，与对照溶液中姜黄素的保留时间一致。

2.3系统适用性试验

按上述色谱条件分别测定制剂中姜黄素的含量，姜黄素峰与其它相邻峰的分离度达到要求，理论板数按姜黄素峰计不低于3 000。

图1　复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂中姜黄素的液相色谱图Fig.1　compound coral miconazole ginger solution urea ointment compound preparation of curcumin in HPLC

2.4线性

对照品溶液的制备：精密称取姜黄素对照品11.79mg，置25mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL置50mL容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取该溶液10mL置25mL容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，作为对照品溶液。

分别吸取上述对照品溶液1μL、4μL、7μL、10μL、13μL和20μL注入高效液相色谱仪中，按姜黄素含量测定的色谱条件测定峰面积，记录色谱图。并以对照品的量(g)为横坐标，峰面积的值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程如下：A=105.02C-0.035 3，r=0.999 9。试验结果表明，姜黄素在3.7～74.6ng范围内呈良好的线性关系。

2.5精密度试验

精密吸取线性对照品溶液10μL注入高效液相色谱仪，重复进样6次，记录色谱图，结果RSD为0.55%，表明精密度良好。

2.6稳定性试验

样品溶液的制备：精密量取本品2mL，置50mL量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

在室温下每0、1、2、4、6、8、10和12h各精密吸取样品溶液10μL注入高效液相色谱仪中，按姜黄素含量测定的色谱条件试验方法测定峰面积，计算含量，结果RSD为0.99%，表明本品在12h之内稳定性良好。

2.7重复性试验

按稳定性样品制备方法同法平行制备6份样品。各精密吸取样品溶液10μL注入高效液相色谱仪中，按姜黄素含量测定的色谱条件试验方法测定峰面积，结果RSD为0.52%，表明该方法重复性良好，满足含量测定的要求。

2.8回收率试验

对照品储备液：精密称取姜黄素对照品11.79mg，置25mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL置200mL容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

样品溶液的制备：精密量取本品1mL(含量为0.118 3mg/mL)，置50mL量瓶中，高浓度精密加入对照品储备溶液12mL、中浓度精密加入对照品贮备溶液10mL、低浓度精密加入对照品贮备溶液8mL，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。高、中、低3个浓度样品，各平行制备3份，共9份。

表1　回收率试验结果(n=3)Tab.1　Recovery test results (n=3)

2.9耐用性试验

用重复性样品1和2同时使用安捷伦与戴安两台仪器，并使用戴安色谱柱、安捷伦色谱柱和依利特色谱柱进行耐用性试验，比较了不同柱温，不同流速，不同的流动相比列对测定结果的影响，结果表明：该方法耐用性试验结果良好。具体数据如下：

表2　耐用性试验结果Tab.2　Durability test results

2.10样品含量测定

按样品处理方法和色谱条件进行13个批次的样品含量测定，其中120301、120303和120304三个批号的第二次数据为样品超过有效期5个月后的测定数据，作为限度制定的一个参考，结果如下：

表3　样品含量测定结果Tab.3　The sample content determination results

2.11检出限的测定

精密称取姜黄素对照品适量，配成不同浓度样品按上述色谱条件进行测定，以3倍信噪比(S/N)计算，得到姜黄素的检出限为1.026ng。

2.12定量限的测定

精密称取姜黄素对照品适量，配成不同浓度样品按上述色谱条件进行测定，以10倍信噪比(S/N)计算，得到姜黄素的检出限为3.078ng。

3　讨论

1)根据各批样品姜黄素含量测定的结果，通过与生产企业进行沟通，为确保本品质量及考虑生产企业的成品合格率，还结合企业的长期稳定性试验数据及本制剂特点，拟定限度为本品含复方珊瑚姜酊以姜黄素(C21H20O6)计每1mL不得少于0.07mg。

2)复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂为2010年国家提高标准行动品种，上述姜黄素含量测定的方法是按照国家药典委员会，国药典化发[2010]84号文有关要求增加，经宁夏回族自治区食品药品检验所复核，并于2015年2月收到该复核所关于“复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂”标准复核的复核意见，现已报送国家药典委员会。

[1] 周瑶瑶,韦小未,郭玲玉,等.姜黄素对不同亚型THP-1来源巨噬细胞表达炎症因子的抑制作用[J].心脏杂志,2016,28(3):258-262.

[2] 董赫,殷钟意,郑旭煦.珊瑚姜中姜黄素回流提取工艺条件的优化[J].贵州农业科学，2012，40(9)：213-215.

[3] 段雪芹.姜黄属药用植物姜黄素的提取、含量测定及抗氧化活性研究[D/OL].雅安：四川农业大学，2013[2016-03-25].http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10626-1014102464.htm.

[4] 李明，周欣，赵超，等.HPLC同时测定姜黄中3种姜黄素的含量[J].药物分析杂志，2008，28(11)：1810-1814.

[5] 刘莹，霍昕，杨迺嘉，等.珊瑚姜中姜黄素的鉴别及含量测定研究[J].时珍国医国药，2008，19(7)：1675-1676.

[6] 陈文慧，曹煜，杨占南.珊瑚姜中挥发油的化学成分分析[J].华西药学杂志，2008，23(6)：718-719.

[7] 余德顺，叶菲菲，杨秀群.珊瑚姜油的抗氧化性[J].食品科学，2011，32(17)：164-167.

[8] JAYAPRAKASHA G K,JAGAN M R L,SAKARIAH K K,et al.Improved HPLC method for the determination of curcumin,demethoxycurcumin,and bisdemethoxycurcumin[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2002,50(13):3668-3672.

[9] 刘素标.姜黄素的作用研究进展[J].中医临床研究，2013，5(4)：117-118.

[10]苏旬，贺秀丽，刘秀菊，等.姜黄素的临床研究进展[J].食品与药品，2012，14(5)：193-198.

[11]王彬辉，章文红，张晓芬，等.姜黄素的药理及剂型研究进展[J].中华中医药学刊，2013，31(5)：1102-1105.

[12]李琦，金剑，许颖.姜黄素的药理作用及其临床应用进展[J].现代中西医结合杂志，2012，21(12)：1366-1368.

[13]狄建彬，顾振纶，赵笑东，等.姜黄素的抗氧化和抗炎作用研究进展[J].中草药，2010，41(5)：28-31.

[14]LI J,JIANG Y,WEN J,et al.A rapid and simple HPLC method for the determination of curcumin in rat plasma: assay development,validation and application to a pharmacokinetic study of curcumin liposome[J].Biomedical chromatography,2009,23(11):1201-1207.

[15]MA Z,SHAYEGANPOUR A,BROCKS D R,et al.High-performance liquid chromatography analysis of curcumin in rat plasma:application to pharmacokinetics of polymeric micellar formulation of curcumin[J].Biomedical Chromatography,2007,21(5):546-552.

HPLC method for determination of compound coral miconazole ginger solution urea ointment of curcumin content in compound preparation

HUANG Chunqing, CAO Guihong, CHANG Ling

(Guizhou Institute for Food and Drug Control, Guiyang, Guizhou 550004, China)

To establish a compound coral miconazole ginger solution urea ointment of curcumin content in compound preparation method, we used octadecyl silane bonded silica as filler of chromatographic column, 0.4% acetonitrile-phosphate solution (45∶55) as mobile phase, flow rate of 1.0 mL/min, detection wavelength of 430nm, column temperature 25 ℃. The range of curcumin concentration was from 3.7 ng to 74.6ng inside had good (r=0.999 9), method recovery rate was 98.23% (RSD=1.39%). The method was simple, rapid, accurate, and could be used for the preparation of the determination of curcumin.

curcumin; compound coral miconazole ginger solution urea ointment compound preparation; HPLC method; quantitative analysis

1004—5570(2016)04-0082-04

2016-04-07

2010～2015年度国家药品标准提高项目：573

黄春青(1981-)，女，硕士研究生，主管药师，研究方向：中药、化学药质量控制，E-mail:gyhcq@163.com.

TQ460.7+2；O657.7+2

A