赶黄草对雄性大鼠正常性功能的影响*

刘明华，黄群莲，刘中飞，税丕先

（1西南医科大学药学院生药教研室；四川泸州646000，2西南医科大学附属医院药剂科）

赶黄草对雄性大鼠正常性功能的影响*

刘明华1，黄群莲2，刘中飞1，税丕先1

（1西南医科大学药学院生药教研室；四川泸州646000，2西南医科大学附属医院药剂科）

目的：研究赶黄草（Penthorum Chinense Pursh）对雄性大鼠正常性功能的影响。方法：将大鼠随机分为空白对照组、阳性对照万艾可（枸橼酸西地那非片，15 mg/kg）组和赶黄草三个剂量组（0.5g生药/kg、1.0 g生药/kg、2.0 g生药/kg），连续灌胃28 d，测定赶黄草对大鼠交配能力、性器官重量、阴茎勃起功能、正常雄性大鼠精子的影响。结果：赶黄草各剂量组对大鼠交配能力、性器官指数、阴茎勃起功能、精子存活率等无明显影响，与空白对照组比较，差异无显著性（P＞0．05）。结论：赶黄草对雄性大鼠正常性功能无明显影响，作为新食品原料应用是安全的。

赶黄草；性功能；交配能力

赶黄草（Penthorum Chinense Pursh）学名扯根菜，又名水杨柳、水泽兰，为虎耳草科（saxifraganceae）扯根菜属扯根菜的地上部分，是四川泸州古蔺出产的一种苗家药材。始载于明代《救荒本草》，现载于《中药大辞典》、《全国中草药汇编》、《四川中药志》、《湖南药物志》、《内蒙古植物药志》等。民间以全草入药，性温，味甘，无毒，具有清热解毒、活血散瘀、利水消肿、退黄、平肝的功效，可治经闭、水肿、血崩、带下、跌打损伤[3-4]。现代研究表明[3，4]赶黄草内含多种有效成份均对肝损伤具保护作用，并对甲肝、乙肝、慢性活动性肝炎具有一定的治疗作用，但民间流传赶黄草有减弱男性性功能的副作用。本研究探讨赶黄草对雄性大鼠正常性功能的影响，为赶黄草在新食品原料的开发应用，以及民间流传的科学与否提供实验依据。

1 实验材料

1.1 受试品

赶黄草，采自四川泸州古蔺县，经西南医科大学生药教研室税丕先教授鉴定。按《中国药典》2010版有关最细粉的规范要求将赶黄草粉碎为125 μm＜粒径＜150 μm的中药最细粉。实验时称取1 kg赶黄草粉，加蒸馏水10 L，加热至80～90℃，浸泡提取30～60 min，过滤，收集浸泡提取液，残渣加蒸馏水10L，加热至80～90℃浸泡提取30～60 min，过滤，合并浸泡提取液，将浸泡提取液在60～70℃减压浓缩至0.5 L即可。水提浓缩液的浓度为2.0 g（赶黄草粉）/mL。

1.2 样品的配制

赶黄草在临床上用法用量为口服，一次2 g，每日三次，若按成人60 kg计算，其临床日用量为0.1 g生药/kg。本实验受试品赶黄草低、中、高剂量分别设置为临床日用量的5、10、20倍，即0.5g生药/kg、1.0 g生药/kg、2.0 g生药/kg。大鼠灌胃体积设为0.5 mL/ 100g体重，则配制方法如下：

低剂量组：取水提浓缩液[2.0 g（赶黄草粉）/ mL]100 mL，加入1 900 mL双蒸水，浓度为0.1g（赶黄草粉）/mL，按0.5 mL/100g体重灌胃，则灌胃剂量为0.5 g生药/kg，为临床日用量的5倍；

中剂量组：取水提浓缩液[2.0 g（赶黄草粉）/ mL]100 mL，加入900 mL双蒸水，浓度为0.2 g（赶黄草粉）/mL，按0.5 mL/100g体重灌胃，则灌胃剂量为1.0 g生药/kg，为临床日用量的10倍；

高剂量组：取水提浓缩液[2.0 g（赶黄草粉）/ mL]100 mL，加入400 mL双蒸水，浓度为0.4 g（赶黄草粉）/mL，按0.5 mL/100g体重灌胃，则灌胃剂量为2.0 g生药/kg，为临床日用量的20倍；

万艾可（枸橼酸西地那非片）为阳性对照，100 mg/片，美国辉瑞制药有限公司生产，批号20140708。临用时将其压成粉末并用生理盐水配成浓度为1.5 mg/mL的溶液。按1 mL/100g体重灌胃，则灌胃剂量为15 mg/kg。

1.3 实验动物

SD大鼠，体重（180±20）g，雌雄各半，购自西南医科大学实验动物中心，生产许可证号：SCXK（川）2013-17，使用许可证号：SCXK（川）2013-065。

1.4 实验环境

实验在西南医科大学SPF级实验中心进行，动物为笼养（笼具容积为20 cm×39 cm×54 cm），每笼饲养同性别动物5只。基础饲料为实验鼠全价颗粒饲料，各组动物常规喂饲，自由饮水。笼底垫料为刨花木屑，使用前经消毒烘干；笼具经消毒后使用。平均每隔2日更换一次垫料。温度：空调恒温，约22～25℃。

2 实验方法

2.1 对正常雄性大鼠交配能力的影响

SD大鼠30只，雄性，体重（180±20）g，按体质量序随机分为4组：空白对照组（生理盐水）、阳性对照组（万艾可15 mg/kg）及赶黄草低、中、高3个剂量组（0.5 g生药/kg、1.0 g生药/kg、2.0 g生药/kg）。每日灌胃1次，连续给药28 d。

2.1.1 雌性大鼠的准备

取30只雌性大鼠，体质量（180±20）g，腹腔注射3%戊巴比妥钠溶液，0.14 mL／100 g麻醉，行双侧卵巢摘除术，术后连续3 d肌肉注射青霉素2万U／kg，术后2周分组实验。实验前48 h皮下注射苯甲酸雌二醇20只，交配前4 h皮下注射黄体酮500 ug/只。

2.1.2 交配实验观察方法

将雄性大鼠单独放人笼中使其适应环境5 min，然后放人1只雌鼠，开始记录下列数据：①自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉雌鼠的时间（捕捉潜伏期）；②20 min内雄鼠捕捉雌鼠或爬背的动作次数（捕捉次数）；③雄鼠自爬背成功后出现舔阴茎的时间（射精潜伏期）；④20 min内雄鼠捕捉雌鼠或爬背成功后出现舔阴茎的次数（射精次数）。

2.1.3 对性器官重量的影响

实验结束后，用T-100型电子天平（感量0.1 g）称取小鼠体重（g），处死动物，剖腹取睾丸和附睾，去尽筋膜，滤纸吸干脏器表面血污，用赛多利斯BS200S-WE1型电子天平（感量0.001 g）称睾丸和附睾重量（mg），计睾丸（附睾）指数。

脾（胸腺）指数=脾（胸腺）重量（mg）／体重（g）

2.2 对大鼠阴茎勃起功能的影响

灌胃第28 d，末次灌胃后1 h，将4 mA电流强度刺激大鼠阴茎头部。记录刺激开始至阴茎勃起时间（勃起潜伏期）和阴茎勃起持续时间。

2.3 对正常雄性大鼠精子的影响

灌胃第28 d，取大鼠左侧附睾，在附睾尾纵向划一个小口，置于3 mL RPMI-1640培养基（含10%左右的动物血清）内孵育15 min，制备精子悬液。取少量精子悬液用培养基稀释50倍，加到血球计数板上，在27℃～30℃条件下用高倍镜随机观察200个精子的活动状态（活动的精子：活动良好、呈直线或曲线游动；不活动的精子：活动迟缓，原地打转或不活动），并统计精子存活率（活动的精子数×100%／200）。

2.4 统计方法

采用SPSS19.0统计软件，计量资料均采用（x± s）表示，多个样本均数比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD法，P＜0.05为有统计学意义。

3 实验结果

3.1 一般情况

试验周期内，空白对照组动物行为活动如常，一般情况良好。实验组动物灌胃赶黄草后，一般情况良好，除个别时间点某个动物体重、食量有所减少之外，在灌胃后大鼠活动无明显异常改变。与空白对照组比较，赶黄草低、中、高剂量组和阳性对照组雄性大鼠灌胃给药前后体重差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 大鼠体重的变化（x±s）

3.2 对正常雄性大鼠交配能力的影响

阳性对照组雄性大鼠捕捉潜伏期明显缩短，射精潜伏期明显延长，捕捉次数和射精次数明显增加，与空白对照比较，P＜0.05，提示万艾可能提高雄性大鼠的交配能力。实验组动物灌胃赶黄草后，交配能力正常，与空白对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 对大鼠交配能力的影响（x±s）

3.3 对雄性大鼠性器官的影响

阳性对照组和赶黄草低、中、高剂量组睾丸指数和附睾指数正常，与空白对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 对性器官重量的影响（x±s）

3.4 对大鼠阴茎勃起功能的影响

将4 mA电流强度刺激大鼠阴茎头部，阳性对照组阴茎勃起潜伏期缩短，勃起时间延长，与空白对照比较，P＜0.05，提示万艾可能增强大鼠的勃起功能。实验组动物灌胃赶黄草后，阴茎勃起功能正常，与空白对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表4。

3.5 对正常雄性大鼠精子的影响

阳性对照组和赶黄草低、中、高剂量组大鼠精子存活率正常，与空白对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表5。

表5 各组大鼠的精子存活率（x±s）

4 讨论

性功能指动物性活动的能力，是衡量雄性动物生殖机能强弱的主要指标[5-6]。雄性性活动包括求偶反射、阴茎勃起、爬跨、插入、射精等几个环节，其中阴茎勃起是产生正常性活动的基础。阴茎勃起过程表现为在性刺激引导下，海绵体内小动脉和海绵窦壁内的平滑肌松弛，流人海绵体的血流增加，海绵体内压升高，压迫白膜下静脉丛和穿支静脉后使海绵体流出静脉血减少，勃起发生。在此过程中，普遍认为非胆碱能、非肾上腺素能神经末梢的激活和释放NO增加促进小动脉和海绵体平滑肌舒张是导致阴茎勃起的主要机制[7]。

雄性性活动受多种因素的影响，如神经机制、体液因素、情绪、年龄、疾病等，机理又十分复杂。因此，要评判性能力，仅仅依靠某一个指标很难作出准确判断[8-9]。雄性大鼠性行为的发生依赖于雌性大鼠的性诱感，也即雌性大鼠的发情状态直接影响雄鼠的性行为，因而我们选择了交配能力这一主要指标来观察大鼠性能力的影响。但由于雌鼠对雌、孕激素的敏感性，雄鼠对新环境的适应性、对新的性伴侣的容纳性，是否也存在类似心理因素等问题，使得这一指标也难以准确地反映其性能力。因而我们同时选择了捕捉次数、射精次数、勃起潜伏期和射精潜伏期等观察指标[10]。勃起潜伏期和射精潜伏期可以反映雄鼠对阴茎刺激的性反应速度和性活动能力状况，也即性兴奋的程度和性兴奋持续的时间。将这三组指标结合起来观察，基本上可以较为准确地判断雄鼠的性能力状况。

本实验发现阳性对照万艾可明显缩短雄性大鼠捕捉潜伏期，延长射精潜伏期，增加捕捉次数和射精次数，与空白对照比较，P＜0.05，提示万艾可能提高雄性大鼠的交配能力，说明本研究方法可靠。但赶黄草连续灌胃28 d，三个剂量组分别相当于临床应用量（0.1 g生药/kg）的5倍、10倍和20倍，动物行为活动如常，一般情况良好。实验各组动物交配能力、性器官指数、阴茎勃起功能、精子存活率等无明显促进或抑制作用，与空白对照组比较未见明显差异（P＞0.05）。因此，赶黄草对雄性大鼠正常性功能无明显影响，作为新食品原料，应用是安全的。

1.郭艳，曾凡骏，刘敏，等．赶黄草有效成分及生物活性研究进展[J].职业卫生与病伤，2016，31（1）：41-43.

2.付明，魏麟、余娟，等．扯根菜的化学成分研究[J]．中国药学杂志，2013，48（22）:1911-1914.

3.石晓，卓菊．赶黄草总黄酮抗大鼠酒精性肝纤维化作用的实验研究[J]．中药材，2015，38（7）：1485-1487.

4.Ikura Y,Caldwell SH.Lipid droplet-associated proteins in alcoholic liver disease:a potential linkage with hepatocellular damage[J].International Journal of CLin-icaland Experimental Pathology,2015;8（8）:8699-8708.

5.杨建成，吴高峰，冯颖，等．牛磺酸对不同龄雄性大鼠性功能的影响[J].中国计划生育学杂志,2008，151（5）：285-287.

6.邵祥龙，罗琼，秦芹，等．山茱萸多糖对雄性大鼠性功能损伤的影响[J].中国中药杂志，2010，35（6）：772-77

7.王济，白明华，刘保兴，等．疏肝益阳胶囊对动脉性勃起功能障碍大鼠性功能及性腺质量的作用[J].安徽中医学院学报，2013，32（2）：54-56.

8.Goswami Sk,Gangadarappa Sk,Vishwanath M,et al. Antioxidant potential and abiLity of phloroglucinol to decrease formation of advanced glycation end products increase efficacy of siLdenafiL in diabetes-induced sexual dysfunction of rats.[J].Sex Med,2016 Jan 28.pii:S2050-1161（15）00003-3.[Epub ahead of print]

9.刘建荣，周安方．兴灵汤对正常雄性大鼠性能力的影响[J].中国实验方剂学杂志,2006，12（3）：54-55.

10.范源，刘竹焕，陈少红，等．生力胶囊对大鼠性功能的影响[J].中华男科学杂志,2007，13（7）：660-663.

（2016-05-24收稿）

Effect of Penthorum Chinense Pursh on sexual function of male rats

Liu Minghua1，Huang Qunliang2，Liu Zhongfei1，Shui Pixian1*1Department of Pharmacognosy School of Pharmacy,Departmenf of Pharmacy the Affiliated Hospital of Southwest Medical University,Luzhou,Sichuan Province,646000,China

Objective：To study the effect of pursh on sexual function of male rats.Methods：The rats were randomly divided into no treatment control group,Viagra（sildenafil citrate tablets,15 mg/Kg）positive control group,and three dosage groups of pursh of（0.5 g crude drug/Kg,1 g crude drug/Kg,and 2 g crude drug/Kg）. All treatment had lasted for a consecutive 28 days,and the mating ability,the weight of sexual organs,penile erectile function and the quality of sperms were compared among groups.Results：Each dosage group of pursh had no significant effect on the mating ability,organ index,penile erectile function,and sperm survival rate compared to the control group（P＞0.05）.Conclusion：Pursh has no obvious effect on the sexual function in male rats and therefore is safe for long-term use.

Penthorum Chinense Pursh;Sexual function;Mating ability

R285.5

A

10.3969/j.issn.1000-2669.2016.06.014

*四川省科技厅资助项目（2014ZC0052，2014JC0147），泸州市科技局（2013LZLY-K66）

刘明华（1972-），男，教授

通迅作者：税丕先（1967-），男，教授，硕导，E-mail:spx06702@163.com