孕早期母胎界面血管新生在稽留流产患者发病中作用

徐萍 周赤燕 钟少平★

孕早期母胎界面血管新生在稽留流产患者发病中作用

徐萍 周赤燕 钟少平★

目的 通过检测微血管密度在正常早孕及稽留流产患者绒毛、蜕膜的表达情况及血管内皮生长因子（VEGF）在正常早孕及稽留流产患者体内浓度，探讨血管新生障碍在稽留流产发病中的可能机制。方法 在2014年4月至2015年4月期间采用免疫组织化学染色法检测18例正常早期妊娠及21例稽留流产患者绒毛及蜕膜中微血管表达情况。同时利用ELISA方法检测比较VEGF在两组孕妇体内的浓度水平。结果 高倍镜视野下正常早孕绒毛、蜕膜微血管密度依次为（22.37±2.16）个/（×400）及（26.94±3.08）个/（×400），稽留流产患者绒毛、蜕膜微血管密度微血管密度（3.24±0.12）个/（×400）及（2.78±0.21）个/（×400），上述两组孕妇中VEGF浓度依次为（100.75±9.13）pg/ml及（10.36±0.49）pg/ml。与正常早孕患者比较，稽留流产孕妇体内VEGF下降明显（P＜0.05），并且伴母胎界面血管新生程度降低明显（P＜0.05）。结论 孕期血管新生参与了胎盘形成，并在孕早期稽留流产发病中起到重要作用。

血管新生 稽留流产 胎盘 滋养细胞

稽留流产也称过期流产，为一种特殊类型的自然流产，是指胚胎或胎儿已死亡滞留宫腔内未能及时自然排出［1］。妊娠后孕妇体内孕酮在8～10周主要由卵巢的妊娠黄体分泌，随着妊娠孕周增加，胎盘逐渐形成，孕10周后主要由胎盘合体滋养细胞分泌，若两者衔接不良，则容易导致孕酮水平相对低下，引发稽留流产的发生［2，3］。涉及胎盘滋养细胞功能，尤其是母胎界面血管新生导致滋养细胞功能异常，导致稽留流产的发生亦有报道［4］。CD34能对血管内皮细胞进行特异性染色，从而进行微血管数目的计数，常用于有关血管新生的研究。作者进行了稽留流产患者母胎界面血管新生的改变情况研究，现报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 （1）绒毛、胎盘组织：绒毛组织的选择经医院伦理委员会讨论通过，并征得本人同意，随机选择2014年4月至2015年4月在本院妇科病房就诊的正常早孕及稽留流产孕妇（5～10周），人流术后取得相应蜕膜及绒毛组织28例。其中正常早孕组孕妇及稽留流产组患者各14例。正常早孕组平均年龄（25±7）岁，平均体重（52±6）kg，平均妊娠时间（56±6）d。稽留流产组平均年龄（24±8）岁，平均体重（53±6）kg，平均妊娠时间（58±5）d。两组孕妇的年龄、体重、妊娠时间等一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。均排除家族遗传病史、既往高血压、糖尿病等病史。同时采集对应孕妇的空腹肘静脉血5ml，并行1500r/min离心10min，取出上清液放置-80℃冰柜中备用。绒毛及蜕膜取出后立即取坏死组织较少的部位取材，大小约0.5cm×0.5cm×0.5cm，行PBS缓冲液反复冲洗后，常规石蜡包埋切片后供免疫组化测定。（2）主要试剂：人VEGF ELISA Kit及鼠抗人CD34单克隆抗体（武汉博士德公司），SABC免疫组化试剂盒（北京中山生物技术有限公司）。

1.2 方法 （1）ELISA检测孕妇血清中VEGF的浓度水平：按照人VEGF ELISA 试剂盒的具体操作步骤检测孕妇血中VEGF的浓度水平。VEGF检测灵敏度：15pg/ml。（2）常规SABC法进行免疫组织化学染色：细胞膜内有棕黄色沉淀表明染色阳性，染色程度明显高于背景。在高倍镜（×400）下，每张切片随机取4个视野，行微血管数分析。将CD34染色阳性并有管腔样结构，同时管腔内血细胞＜8个计入微血管范围的标准并计数，分别由4位熟悉统计规则的不同工作者在同一视野下计数血管密度，将取得的平均值作为该张切片最后血管密度。

1.3 统计学方法 采用SPSS12.0统计软件。计量资料以（±s）表示，各组之间差异采用单因素方差分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 正常早孕及稽留流产母胎界面微血管表达 常规SABC法进行免疫组织化学染色，并取正常早孕及稽留流产绒毛、蜕膜行HE染色对照。血管内皮细胞内的棕色颗粒及管腔，可考虑为新生血管的形成。正常早孕绒毛、蜕膜微血管密度依次为（22.37±2.16）个/（×400）及（26.94±3.08）个/（×400），稽留流产患者绒毛、蜕膜微血管密度依次为（3.24±0.12）个/ （×400）及（2.78±0.21）个/（×400），行统计分析发现：稽留流产孕妇蜕膜、绒毛微血管密度较早孕蜕膜及绒毛每高倍镜下微血管密度均下降明显（P＜0.05）。见图1～6。

图1 正常早孕蜕膜HE染色（×100）

图2 正常早孕绒毛HE染色（×100）

图3 正常早孕蜕膜微血管计数（×400）

图4 稽留流产早孕蜕膜微血管计数（×400）

图5 正常早孕绒毛微血管计数（×400）

图6 稽留流产绒毛微血管计数（×400）

2.2 孕妇血清中VEGF的浓度水平 行ELISA检测分析表明，正常早孕及稽留流产两组中血管内皮生长因子（VEGF）浓度依次为（100.75±9.13）及（10.36±0.49）pg/ml。与正常早孕孕妇比较，稽留流产患者体内VEGF浓度下降明显（P＜0.05）。

3 讨论

随着孕周的增加，子宫动脉的血流量持续增加，血流阻力下降；期间主要是妊娠期子宫动脉血流阻力进一步减少，良好子宫胎盘循环进一步构建所致，期间母体血管新生相关因子可能起到重要作用。VEGF是一种特异的内皮细胞有丝分裂原，其能增加血管通透性，具有促进内皮细胞生长及分化的能力。VEGF作为一种与血管新生密切相关的新生因子，被认为是最强大的血管生成启动因子，但其浓度下降时，可导致血管新生程度严重下降，影响机体创伤愈合、肿瘤发生及器官形成。有研究发现早孕胎盘绒毛中VEGF在血管生成中起作用［5］及妊娠早期胎盘血管形成在VEGF的指导下进行［6］，亦有研究表明稽留流产中VEGF表达下降明显［7］。

本资料中，与正常早孕孕妇比较，稽留流产患者体内VEGF浓度下降明显，并且伴母胎界面血管新生程度降低明显。妊娠早期的VEGF主要来源于血管内皮细胞及滋养细胞，胎盘局部的VEGF对内皮细胞产生作用，促进其增殖、迁移并影响其内分泌功能，同时亦影响滋养细胞发挥侵袭功能。有研究发现，VEGF水平在妊娠早期上升明显，与妊娠时间基本呈正相关，一般在16周达到高峰，于妊娠晚期下降［7］。当孕早期血管新生欠活跃，且孕妇体内VEGF水平较低时，滋养细胞功能下降，导致滋养细胞分泌功能下降。母体内孕酮等激素水平受到滋养细胞功能影响较大，当滋养细胞分泌功能下降到一定程度时，母体孕酮水平不能有效抑制母体对胚胎的免疫耐受作用，母体排斥反应加强，导致流产，而在胚胎组织为排出之前，因为前期胚胎未受到有效母体血供而死亡，因此临床上常表现为稽留流产。

1 谢幸，苟文丽.妇产科学.第八版.北京：人民卫生出版社，2013.49.

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4 Takeda A，Koyama K，Imoto S，et a1.Conservative management of p1acenta increta after first trimester abortion by transcatheter arteria1 chemoembo1ization： a case report and review of the 1iterature.Arch Gyneco1 Obstet，2010，281（3）：381～386.

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浙江省卫生厅基金（2015KYB390）；浙江省嘉兴市科技局基金（2012AY1073-1，2012AY1073-5）

314051 浙江省嘉兴市妇幼保健医院妇产科