香椿废弃组织中总黄酮提取工艺优化及抗氧化活性研究

王晓敏,杨　慧,张　乐,史冠莹,梁万平,王赵改,*

(1.河南省农科院农副产品加工研究所,河南郑州 450008;2.驻马店市农业科学院资源环境研究所,河南驻马店 463000)



香椿废弃组织中总黄酮提取工艺优化及抗氧化活性研究

王晓敏1,杨慧1,张乐1,史冠莹1,梁万平2,王赵改1,*

(1.河南省农科院农副产品加工研究所,河南郑州 450008;2.驻马店市农业科学院资源环境研究所,河南驻马店 463000)

以红油香椿废弃组织为原料,采用超声波辅助溶剂浸提的方法提取黄酮类物质,并利用铁氰化钾还原法、水杨酸比色法和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)法测定提取物的抗氧化活性。在单因素实验基础上,选择温度、液料比和超声功率为影响因子,以总黄酮得率为响应值,采用响应面法优化提取工艺。结果表明:香椿废弃组织中总黄酮最佳提取工艺为:温度59 ℃、液料比51 mL/g、超声功率174 W,此条件下总黄酮得率为7.94%。抗氧化活性实验结果表明:香椿废弃组织中总黄酮具有较强的清除·OH和DPPH自由基能力,IC50值分别为0.205、0.018 mg/mL,均低于相同质量浓度VC的IC50值(1.022、0.069 mg/mL)。采用超声波辅助提取技术,黄酮得率高,时间短,为香椿废弃组织中总黄酮的开发利用提供理论参考。

香椿,黄酮,响应面法,超声波辅助提取,抗氧化活性

香椿[Toonasinensis(A.Juss.)Roem]又名春芽树、椿树,属楝科(Meliaceae)香椿属落叶乔木,是我国传统的优质木本蔬菜,已有2300多年的栽培历史[1],是我国的特产资源,尤以河南、山东、安徽种植居多[2]。香椿的嫩芽、叶不仅色香味俱佳,而且含有人体所必需的氨基酸、维生素、微量元素等多种营养成分,具有较高的食用价值,且因富含黄酮、萜类、生物碱等多种生物活性成分而具有一定的药用价值[3-8],深受人们的喜爱,并远销日本、东南亚等国家[9]。随着近年来香椿种植面积的不断递增,香椿种植及加工逐渐发展成当地的特产农业和农民致富的支柱产业。然而,香椿目前消费多以嫩芽为主,而大量的老叶、半木质化及木质化的枝条等老化组织常被废弃,造成大量的资源浪费及严重的环境污染。因此如何进一步深入研究和开发利用香椿老化废弃组织,对于资源综合利用、产业的可持续发展及环境保护都具有十分重要的现实意义。

由于化学合成黄酮的安全性受到消费者质疑,植物来源的天然抗氧化物质正日益引起人们的普遍关注,并掀起“回归自然”和“开发利用天然产物”的热潮。目前,关于黄酮类物质提取分离的研究报道较多,但针对香椿废弃组织中总黄酮的研究尚不多见。因此本文以红油香椿废弃组织为研究对象,采用响应面法优化超声波辅助提取黄酮类物质的工艺,确定最佳提取条件,并研究其抗氧化活性,为产业化开发香椿废弃组织奠定一定的理论基础,同时减少了香椿资源的浪费,大大提高了香椿的附加值,对香椿产业的可持续性发展有着重要的社会意义。

1　材料与方法

1.1材料与仪器

香椿废弃组织由河南省郑州市中牟县田庄村河南省农业科学院香椿示范基地提供;芦丁标准品北京索莱宝生物科技有限公司;DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)东京化成工业株式会社;硝酸铝、氢氧化钠、亚硝酸钠、30%过氧化氢、无水乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、石油醚等烟台市双双化工有限公司均为国产分析纯;铁氰化钾、硫酸亚铁天津市德恩化学试剂有限公司;三氯乙酸天津市光复精细化工研究所;三氯化铁、水杨酸、VC标准品天津市风船化学试剂科技有限公司。

SB-5200DTD型超声波清洗机宁波新芝生物科技股份有限公司;SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵郑州长城科工贸有限公司;ME204E型电子天平梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;NUⅡ-10T型实验室(超)纯水机南京优普环保设备有限公司;BL-250A型高速多功能粉碎机浙江省永康市松青五金厂;H1850R型高速冷冻离心机湖南湘仪公司;HHS型电热恒温水浴锅上海博迅实业有限公司医疗设备厂;玻璃仪器气流烘干器郑州杜甫仪器厂;QL-901型漩涡混合器海门市其林贝尔仪器制造有限公司;GENESYS 10S UV-VIS紫外-可见分光光度计美国Thermo公司。

1.2实验方法

1.2.1香椿废弃组织总黄酮提取工艺流程香椿→40 ℃烘干→粉碎→过40目筛→称取香椿样品→按一定液料比加入提取溶剂→超声→抽滤,除渣→定容→得率测定

1.2.2总黄酮得率测定采用硝酸铝显色法测定总黄酮得率[10],略有改动。准确称取芦丁标准品0.0100 g,用70%的乙醇在超声波下使其溶解,转移至100 mL容量瓶中定容,摇匀即得质量浓度为0.1 mg/mL的芦丁标准溶液,用移液管精密移取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于10 mL比色管中,用70%乙醇补充各管体积至5 mL,各加入质量分数为10%的Al(NO3)3溶液0.3 mL,静止5 min,然后加入质量分数为5%的NaNO2溶液0.3 mL,静止5 min,再加入质量分数为4%的NaOH溶液3 mL,最后用70%乙醇定容至10 mL,摇匀,静止15 min,以空白溶液作为对照,于510 nm处测吸光度,以吸光值为纵坐标Y,芦丁质量浓度为横坐标X,绘制标准曲线,得线性回归方程:Y=9.63X+0.0133,R2=0.9990。利用标准曲线计算样品总黄酮含量,得香椿废弃组织总黄酮得率。

式中:C为提取液总黄酮的浓度,mg/mL;a为稀释倍数,10;V为提取液体积,500 mL;w为样品粉末质量,5 g。

1.2.3最佳提取溶剂的选择为了选择香椿废弃组织总黄酮的最佳提取溶剂,分别加入200 mL 80%甲醇、70%乙醇、80%丙酮、乙酸乙酯、氯仿、石油醚,在50 ℃下超声提取40 min(液料比40 mL/g,超声功率150 W),抽滤除渣,得黄酮提取液,旋蒸浓缩至浸膏,然后用70%乙醇定容至200 mL,并按上述方法分别测定吸光度值,计算黄酮得率。

1.2.4单因素实验采用70%乙醇作为提取溶剂,选择提取温度、液料比和超声功率进行单因素实验。处理设置如下:液料比40 mL/g,超声功率150 W,超声时间40 min,温度分别为50、60、65、70、80 ℃;温度60 ℃、超声功率150 W,超声时间40 min,液料比分别为20、30、40、50、60 mL/g;温度60 ℃,液料比50 mL/g,超声时间40 min,超声功率分别为120、150、180、210、240 W。不同条件下提取黄酮后,按照1.2.2的方法测定溶液吸光度值,计算其得率,研究不同因素对香椿废弃组织总黄酮得率的影响。

1.2.5响应曲面优化实验设计根据单因素实验结果设计因素水平,以温度、液料比、超声功率3个因素为自变量,以总黄酮得率为响应值,根据Box-Behnken中心组合设计原理进行三因素三水平实验设计。实验因素和水平见表1。

表1　Box-Behnken实验设计因素水平及编码

1.2.6抗氧化活性的测定

1.2.6.1还原力的测定取10 mL比色管,依次加入70%乙醇提取的质量浓度分别为0.016、0.024、0.032、0.040、0.048、0.056 mg/mL的黄酮粗液5 mL、0.2 mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.6)0.2 mL和0.3%铁氰化钾1.5 mL,混匀,在50 ℃水浴条件下反应20 min。水浴完成后迅速冷却并加入10%三氯乙酸1 mL,摇匀后以3000 r/min离心10 min,然后取2 mL上清液加入试管中,再加入0.3%三氯化铁0.5 mL,蒸馏水3 mL,摇匀后,以蒸馏水调零,测定A700。并以相同浓度的VC溶液为阳性对照,平行测定3次[11]。

1.2.6.2羟自由基清除能力的测定取10 mL比色管,依次加入70%乙醇提取的质量浓度分别为0.16、0.20、0.24、0.28、0.32 mg/mL的黄酮粗液1 mL,8.0 mmol/L硫酸亚铁0.3 mL,20 mmol/L过氧化氢0.25 mL,3.0 mmol/L水杨酸1.0 mL。在37 ℃水浴中反应 30 min,流水冷却,再分别补加 0.45 mL蒸馏水,使体系终体积为 3.0 mL,测定510 nm处吸光值,同时以相同浓度的VC溶液为对照,平行测定3次[12]。清除率计算公式如下:

清除率(%)=[A0-(Ai-Aj)]/A0×100

式中A0:用蒸馏水代替样品溶液的吸光值;Ai:样品溶液的吸光值;Aj:用蒸馏水代替水杨酸的吸光值。

1.2.6.3DPPH自由基清除能力的测定取10 mL比色管,各加入70%乙醇提取的质量浓度分别为0.004、0.02、0.04、0.4、0.8 mg/mL的黄酮粗液2.0 mL,然后分别加入浓度为2×10-4mol/L的DPPH溶液2.0 mL,混合摇匀,反应30 min后在517 nm处测定其吸光度A1。以2.0 mL无水乙醇代替DPPH的吸光度为A2,以2.0 mL的蒸馏水代替样品溶液的吸光度为A0,以无水乙醇作空白调零,以VC作为阳性对照,平行测定3次[13]。清除率计算公式如下:

清除率(%)=[A0-(A1-A2)]/A0×100

式中A0:对照组吸光值;A1:样液组吸光值;A2:空白组吸光值。

1.2.7数据统计与分析利用OriginPro 8对数据进行处理和分析,并采用Design Expert 8.05b软件进行Box-Behnken实验设计和分析。

2　结果与分析

2.1最佳提取溶剂的选择

由图1可以看出,香椿废弃组织中总黄酮在80%丙酮中提取效果最好,其次是80%甲醇、70%乙醇,这可能因为香椿中的黄酮类物质多以中强极性的糖苷形式存在,根据相似相溶原理,所以80%甲醇、70%乙醇、80%丙酮的提取效果较好。但由于丙酮、甲醇具有一定的毒性,出于安全考虑,故确定70%乙醇为最佳提取溶剂。

图1　不同溶剂对香椿废弃组织总黄酮得率的影响Fig.1　Effects of different extraction solvents on total flavonoids from abandoned branches of Toona Sinensis

2.2单因素实验结果

2.2.1温度对总黄酮得率的影响由图2可知,当提取温度小于60 ℃时,随着温度的升高,得率迅速增加;当提取温度大于60 ℃时,随着温度的升高,得率有所下降。这可能是由于温度太高,黄酮类物质不稳定、结构遭到破坏,导致黄酮得率降低。因此选择提取温度在60 ℃左右进行后续优化实验。

图2　提取温度对总黄酮得率的影响Fig. 2　Effect of extraction temperature on the yield of total flavonoids

2.2.2液料比对总黄酮得率的影响由图3可知,随着液料比的增大,黄酮类物质的得率也呈上升趋势。但当液料比达50 mL/g以后,总黄酮得率增加非常缓慢,并且无显著差异(p>0.05)。这是由于样品粉末与萃取溶剂的接触面增大,有助于黄酮类物质的浸出。但随着液料比持续增加,黄酮得率趋于稳定,黄酮类物质的浸出基本达到完全[14]。通过对黄酮得率、溶剂用量和能量耗损的综合考虑,选择液料比在50 mL/g左右进行后续优化实验。

图3　液料比对总黄酮得率的影响Fig.3　Effect of liquid-to-solid ratio on the yield of total flavonoids

2.2.3超声功率对总黄酮得率的影响由图4可知,当超声功率小于180 W时,黄酮得率随超声功率的增大而增大,当超声功率大于180 W时,黄酮得率随超声功率的增大而减小。这可能是由于过高的超声功率导致香椿废弃组织中黄酮类物质遭到破坏,同时,较高功率条件下的超声波可能导致一部分极性较强的黄酮类物质发生高频运动而降解[15],因此选择180 W为最佳超声功率。

表3　回归模型方差分析

图4　超声功率对总黄酮得率的影响Fig.4　Effect of ultrasonic power on the yield of total flavonoids

注:“**”表示极显著水平(p<0.01);“*”表示显著水平(p<0.05)。

2.3响应曲面结果与分析

2.3.1二次响应面回归模型的建立与分析单因素实验结果表明,最佳单因素条件:提取温度60 ℃、液料比50 mL/g、超声功率180 W,故选取这3个因素设计响应面实验,研究不同组合对黄酮得率的影响。响应面法实验设计及结果见表2。应用DesignExpert8.5b软件对表2数据进行多元回归拟合分析,得到黄酮得率(Y)对温度(A)、液料比(B)和超声功率(C)的二次多项回归方程:

Y=8.08-0.11A+0.029B-0.14C-0.025AB-0.15AC-2.278E-003BC-0.37A2-0.14B2-0.36C2

表2　响应面实验设计与结果

2.3.2响应面分析由图5可见,温度与液料比的交互作用对总黄酮得率的影响不显著;从温度曲面斜率大于液料比曲面的斜率可知,温度对总黄酮得率的影响比液料比大。

图5　温度和液料比对总黄酮得率的交互影响Fig.5　Correlative effects of temperatureand liquid-to-solid ratio on the yield of total flavonoids

由图6可见,温度与超声功率对总黄酮得率的交互作用显著,总黄酮得率变化的大小,受到温度与超声功率的共同影响,两者在总黄酮得率的提高中起到了关键性的作用。在一定实验范围内,香椿废弃组织总黄酮得率随着温度与超声功率的增加而提高。

图6　温度和超声功率对总黄酮得率的的交互影响Fig.6　Correlative effects of temperatureand ultrasonic power on the yield of total flavonoids

由图7可见,液料比与超声功率对总黄酮得率的交互作用不显著。从超声功率曲面斜率大于液料比曲面的斜率可知,超声功率对总黄酮得率的影响比液料比大。

图7　 液料比和超声功率对总黄酮得率的交互影响Fig. 7　Correlative effects of liquid-to-solid ratioand ultrasonic power on the yield of total flavonoids

从图5～图7的响应面图可以直观地看出,两因素之间的影响趋势均表现为先增大后减小,当三者分别达到一定浓度时,响应曲面均有一个极大值点。通过对回归模型求解方程,得到超声辅助乙醇提取香椿废弃组织总黄酮的最佳条件为:温度58.77 ℃、液料比51.20 mL/g、超声功率175.10 W。

2.3.3验证实验为检验该法的可靠性,考虑实际操作过程的方便性,将最佳提取工艺参数修正为温度59 ℃、液料比51 mL/g。同时由于SB-5200DTD型超声波清洗机的超声功率为300 W,可调为40%～99%。根据实验优化后超声功率为175.10 W,而SB-5200DTD型超声波清洗机并不能设置175 W,因此将超声功率选择为174 W,在此条件下,进行3次平行实验,黄酮类物质得率平均值为7.94%,与理论值8.03%比较接近。说明该回归方程与实际情况拟合较好,充分证明了该回归方程的可靠性。

2.4抗氧化活性的测定

2.4.1还原力抗氧化剂的抗氧化能力与其还原力有关,还原力越大,抗氧化能力越强。由图8可知,香椿废弃组织中总黄酮具有良好的还原能力,在一定质量浓度范围内(0.016～0.056 mg/mL),随着总黄酮质量浓度的增大,还原能力也逐渐增强。与同质量浓度的VC标准品相比,香椿废弃组织中总黄酮的总还原能力相对较弱。

图8　香椿废弃组织总黄酮的还原力Fig. 8　Reducing power of total flavonoidsfrom abandoned branches of Toona sinensis

2.4.2羟自由基清除能力由图9可知,香椿废弃组织中总黄酮对羟自由基有明显的清除作用。当质量浓度在0.16～0.32 mg/mL范围内,随着质量浓度增加,香椿废弃组织中总黄酮对羟自由基清除能力随之加强,且明显高于相同质量浓度条件下VC对羟自由基的清除能力。黄酮提取液、VC清除羟基的IC50值分别为0.205、1.022 mg/mL。可见,香椿废弃组织中总黄酮清除羟自由基能力要明显高于阳性对照VC。

图9　香椿废弃组织总黄酮对羟自由基的清除能力Fig. 9　·OH radical-scavenging activity of total flavonoids from abandoned branches of Toona sinensis

2.4.3DPPH自由基清除能力由图10可知,香椿废弃组织中总黄酮对DPPH自由基的清除率随质量浓度升高而增大,且在0～0.04 mg/mL质量浓度范围内,高于同质量浓度的VC对DPPH自由基清除率。当质量浓度在0.4～0.8 mg/mL时,香椿废弃组织中总黄酮对DPPH自由基的清除率低于同质量浓度的VC对DPPH自由基清除率。黄酮类物质的抗氧化活性与分子内是否含有氢键、三碳链氧化程度等相关,因此香椿黄酮类物质的种类及其结构特点、含量等导致其在0～0.04 mg/mL质量浓度范围内,高于同质量浓度的VC对DPPH自由基清除率。这与杨华等[17]报道的“野葛愈伤组织总异黄酮提取物对DPPH自由基的清除能力与茶多酚的清除能力相当,且显著优于葛根素和VC”及赵丽等[18]报道的“采用DPPH自由基清除和乙酞胆碱醋酶抑制高通量筛选模型进行研究二氢杨梅素,结果发现其抗氧化活性强于芦丁与VC”相吻合。黄酮提取液、VC的IC50值分别为0.018、0.069 mg/mL,因此,香椿废弃组织中总黄酮对 DPPH自由基的清除能力强于VC。

图10　香椿废弃组织总黄酮对DPPH自由基的清除能力Fig. 10　DPPH radical-scavenging activity of total flavonoids from abandoned branches of Toona sinensis

3　结论

超声波辅助提取技术可以缩短提取时间,加快提取速率,并有效避免高温对有效成分的破坏,在天然植物有效成分提取中得到广泛应用,并逐渐受到人们的重视。本研究采用响应面法优化超声辅助提取香椿废弃组织中总黄酮的工艺,在单因素实验的基础上,选择温度、液料比、超声功率为自变量,以总黄酮得率为响应值,采用Box-Behnken法设计三因素三水平的响应面实验优化提取工艺。结果表明,香椿废弃组织中总黄酮提取的最优工艺为:温度58.77 ℃、液料比51.20 mL/g、超声功率175.10 W。考虑实际操作过程的方便性,将提取工艺参数修正为温度59 ℃、液料比51 mL/g、超声功率174 W。在此条件下,进行3次平行实验,总黄酮得率平均值为7.94%,与模型预测结果相近,进一步验证了该模型的可靠性。体外抗氧化实验表明:香椿废弃组织中总黄酮具有较强的羟自由基清除能力,IC50值为0.205 mg/mL,明显低于阳性对照VC的IC50值

(1.022 mg/mL);较强的DPPH自由基清除能力,IC50值为0.018 mg/mL,也低于VC的IC50值(0.069 mg/mL)。因此,香椿废弃组织具有较好的开发天然植物抗氧化剂的潜力,这不仅可以减少香椿资源的浪费,增加农民收入,对香椿产业的可持续发展及环境保护也具有十分重要的现实意义。

[1]周翔宇. 中国香椿属的研究[D]. 南京:南京林业大学,2005.

[2]陆长旬,张德纯,王德槟. 香椿起源和分类地位的研究[J].植物研究,2001,21(2):195-199.

[3]陈刚,杨玉珍,马晓. 香椿化学成分与保健功能研究进展[J]. 北方园艺,2013,20:189-192.

[4]郎杰,崔娜,李娜. 香椿的抗氧化保健成分研究[J]. 食品研究与开发,2008,29(10):151-153.

[5]Cheng Kawing,Yang Rayyu,Tsou S C S,et al. Analysis of antioxidant activity and antioxidant constituents of Chinese toon[J]. Journal of functional foods,2009(1):253-259.

[6]Wang Kaijin,Yang Chongren,Zhang Yingjun. Phenolic antioxidants from Chinese toon(fresh young leaves and shoots ofToonasinensis)[J]. Food Chemistry,2007(101):365-371.

[7]Wang Chengyuan,Lin Kaihuang,Yang Chihjen,et al.ToonaSinensisextracts induced cell cycle arrest and apoptosis in the human lung large cell carcinoma[J]. Kaohsiung J Med Sci,2010,26:68-75.

[8]Yang Hsinling,Chang Wenhuei,Chia Yichen,et al.Toonasinensisextracts induces apoptosis via reactive oxygen species in human premyelocytic leukemia cells[J]. Food and Chemical Toxicology,2006(44):1978-1988.

[9]胡薇,刘艳如,缪妙青,等. 多用途树种香椿的研究综述[J]. 福建林业科技,2008,35(1):244-250.

[10]孟庆焕. 牡丹种皮黄酮提取分离与抗氧化及抗疲劳作用研究[D]. 哈尔滨:东北林业大学,2013.

[11]Dorman D,Kosar M,Kahlos K,et al. Antioxidant properties and composition of aqueous extracts from Mentha species,hybrids,varieties,and cultivars[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,2003,51(8):4563-4569.

[12]张黎明,李瑞超,郝利民. 响应面优化玛咖叶总黄酮提取工艺及其 抗氧化活性研究[J]. 现代食品科技,2014,30(4):233-239.

[13]SUN T,HO C. Antioxidant activities of buckwheat extracts[J]. Food Chemistry,2005,90(4):743-749.

[14]陈源,杨道富,范丽华,等. 响应面法优化微波提取茂谷橘橙皮总黄酮工艺[J]. 中国食品学报,2013,13(4):80-86.

[15]吕娜,刘阳,崔艳艳,等. 响应面法优化超声波提取山荆子总黄酮工艺[J]. 中国酿造,2014,33(2):71-74.

[16]杨 华,石冠华,方从兵,等.野葛愈伤组织提取物体外清除自由基活性的研究[J].热带作物学报,2011,32(3):398-402.

[17]赵丽,徐淑萍,张蕾,等. 杨梅素及类似物乙酰胆碱酯酶抑制和抗氧化活性研究[J]. 食品工业科技，2012(1):56-58.

Optimization of extraction process of total flavonoids from the abandoned branches ofToonaSinensisand antioxidant activities evaluation

WANG Xiao-min1,YANG Hui1,ZHANG Le1,SHI Guan-ying1,LIANG Wan-ping2,WANG Zhao-gai1,*

(1.Institute of Agricultural Products Processing,Henan Academy of Agricultural Sciences,Zhengzhou 450008,China;2.Institute of Resources and Environment,Zhumadian City of Agricultural Sciences,Zhumadian 463000,China)

In this study,total flavonoids were extracted from the abandoned branches ofToonaSinensisby ultrasound-assisted extraction method and their antioxidant activities were assessed by potassium ferricyanide reduction,salicylic acid colorimetric method and 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)radical scavenging assays. Temperature,liquid-to-solid ratio and ultrasonic power were identified by single factor method as main variables that affect the extraction yield of total flavonoids. The levels of the three variables were optimized by response surface methodology. The results showed that the optimal conditions for ultrasound-assisted extraction of total flavonoids were found to be 59 ℃,a liquid-to-solid ratio of 51 mL/g and ultrasonic power of 174 W. Under the optimized conditions,the extraction yield of total flavonoids was 7.94%. The antioxidant assays showed that the extracted flavonoids presented a strong antioxidant activity to scavenge ·OH and DPPH radicals with IC50values of 0.205 mg/mL and 0.018 mg/mL,respectively. These values were both lower than the IC50values of ascorbic acid of 1.022 mg/mL and 0.069 mg/mL,respectively. Ultrasound-assisted extraction not only produced high yield of flavonoids,but also greatly shortened processing time,which provided a reference for developing new processes of total flavonoids from the abandoned branches ofToonaSinensis.

ToonaSinensis;flavonoids;response surface methodology;ultrasound-assisted extraction;antioxidant activities

2015-11-23

王晓敏(1990-)，女，硕士，研究方向：食品营养与化学，E-mail：wxm707824@163.com。

王赵改(1980-)，女，博士，副研究员，研究方向：农产品保鲜与加工研究，E-mail：zgwang1999@126.com。

河南省财政预算项目(20148010)；河南省农业科学院示范与推广项目(豫农科推(2014)2号); 河南省农业科学院自主创新专项基金(2015ZZ49)。

TS201.1

B

1002-0306(2016)11-0232-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.11.039