槐花中槲皮素快速测定方法的比较

2016-08-29董宏博赖红伟曹宏梅吉林医药学院化学教研室董宏博1973副教授硕士研究方向电化学分析吉林医药学院化学教研室

中国科技信息 2016年12期

董宏博赖红伟肖箫曹宏梅吉林医药学院化学教研室董宏博：（1973-）女（汉），副教授，硕士，研究方向：电化学分析，吉林医药学院，化学教研室。

槐花中槲皮素快速测定方法的比较

董宏博赖红伟肖箫曹宏梅
吉林医药学院化学教研室
董宏博：（1973-）女（汉），副教授，硕士，研究方向：电化学分析，吉林医药学院，化学教研室。

本文针对中药主要成分的测定方法进行比较讨论，氯化铝比色法，催化动力学光度法，以及差非常常用的测定方法，通过对精密度、回收率等一系列的比较论证，提出更为简单、快速、准确的测定方法的观点。在行业中起到为中药的检测与发展提供一定的参考和借鉴作用。

点评人：赵文秀，男，满族，教授，硕士，吉林医药学院分析教研室。

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据报道，槲皮素具有祛痰、止咳、抗炎、降血压、扩张冠脉、降血脂、抗心律失常、抗血小板聚集、抗氧化、抗肿瘤等广泛的药理作用。对槲皮素含量测定的方法诸多，本实验采取氯化铝比色法、催化动力学、差分脉冲伏安法测定槲皮素含量，筛选快速测定槲皮素的最佳方案。

仪器与试剂

紫外分光光度仪（北京瑞利分析仪器公司）；电化学工作站（南京兰力科仪器有限公司）。

槲皮素（国药集团）；氯化铝、溴酸钾、甲基红、乙酸钠、乙酸、硫酸、石油醚、乙醇均为分析纯。槐花购于药房。

实验方法

槲皮素样品溶液制备

精密称取85 ℃干燥2 h 的槐花粉末2.0130g，置索氏提取器中，加石油醚100ml，加热回流3h，弃去石油醚，加入70 %乙醇80 ml，2%的盐酸20ml，回流提取3 h。将提取液趁热减压过滤，滤液转移至100ml容量瓶中，用70%乙醇定容，作为供试样品溶液。

槲皮素对照品溶液制备

精确称取槲皮素标准品0.0210g，加入70 %乙醇定容到100mL，即得0.210 mg/mL 的标准溶液。

三氯化铝比色法

精密量取对照品溶液0.6ml和样品溶液0.3ml，分别置于25ml比色管中，加入30 %乙醇使体积到10 ml；加入1%氯化铝溶液5 mL、pH=6的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml，用30 %乙醇定容，于40℃恒温水浴加热10min，冷却至室温后测定。以不加槲皮素为空白，在300nm～600nm 范围扫描，得紫外吸收光谱，结果见图1和图2。标准溶液在428nm处有最大吸收，而样品溶液在417nm处有最大吸收，二者基本一致，说明此方法可行。

催化动力学

准确称取槲皮素对照品0.0200g，配制成200 ug/ml的储备液。准确移取0.5ml储备液，定容至100ml，得到1ug/ml的槲皮素标准溶液备用。

在25ml比色管中，加入0.02%甲基红1ml，1.0mol/ L硫酸0.5ml，用水稀释至15ml处，加入0.5ml的槲皮素溶液（非催化体系不加槲皮素溶液），再加入0.025mol/L溴酸钾溶液0.4ml，用水定容。于80℃的恒温水浴加热 8 min后，流水冷却5 min以终止反应。以蒸馏水作参比，在400～600nm范围扫描，绘制吸收曲线如图3所示。

1.甲基红+H2SO4

2.甲基红+H2SO4+KBrO3

3.甲基红+H2SO4+KBrO3+标准溶液

4.甲基红+H2SO4+KBrO3+样品溶液

曲线2说明在硫酸溶液中，溴酸钾能氧化甲基红褪色；曲线3说明槲皮素起催化剂的作用，促进了溴酸钾氧化甲基红褪色；曲线4说明供试品溶液中槲皮素促进了溴酸钾氧化甲基红褪色。从四条曲线可以看出，各体系几乎均在518.00nm波长处有最大吸收，说明此方法可行。

差分脉冲伏安法

精确称取槲皮素对照品0.0310g，用70%乙醇溶解定容至100ml。分别取槲皮素标准溶液0.5ml和样品溶液1ml，加入10ml的pH=4.6的NaAc-HAc缓冲液和1ml 的1mol/L NaCl于50ml容量瓶中，用30%乙醇定容。以扫速0.1V/s进行差分脉冲伏安法测定，见图4和图5。标准溶液的峰电位为0.34V，而样品溶液的峰电位为0.48V，有些偏离，这是可能由于样品成分复杂所致。

图1 三氯化铝比色法测定槲皮素标准液的扫描图

图2 三氯化铝比色法测定槐花样品液的扫描图

图3 吸收光谱曲线

图4 标准品差分脉冲图

图5 提取液差分脉冲图

结果与分析

标准工作曲线绘制

三氯化铝比色法：移取对照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，按2.3方法，在428nm处分别测其吸光度，分别为：0.250、0.371、0.480、0.605、0.704。以对照品浓度为横坐标，以吸收度为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程：y=0.0687x+0.0196，相关系数R2=0.9992，线性范围（3.36～10.08µg/ml）。

催化动力学：移取槲皮素标准液0、1.0ml、1.5ml、2.0ml、3.0ml、3.5ml，按2.4方法配制标准系列，在最大吸收波长518nm处测其吸光度：0.978、0.799、0.699、0.621、0.481、0.401，得到非催化体系A○和催化体系的吸光度A，计算吸光度差值△A（△A=A○-A）。以对照品浓度为横坐标，吸收度差值△A为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程：y=3.7337x+0.0532，相关系数R2=0.9994，线性范围（0.04～0.14µg/ml）。

差分脉冲伏安法：移取槲皮素标准溶液0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml，测定峰电流分别为：0.6323、0.8491、2.1000、2.8982、3.8725微安。以浓度为横坐标，峰电流为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程：y=0.1536x+0.0702，相关系数R2=0.9928，线性范围（3.1～24.8µg/ml）。

样品含量测定

三氯化铝比色法：移取样品溶液0.3ml3份，测得吸光度为0.701、0.698、0.699，计算槲皮素的平均含量为4.10%，RSD为0.22%。

催化动力学：依照“2.1”项方法制备的样品溶液100ml，再吸取0.5ml定容于100ml容量瓶中，制得供试品溶液。移取样品溶液0.3ml3份，测得吸光度为0.692、0.695、0.697，计算槲皮素的平均含量为3.06%，RSD为1.09%。

差分脉冲伏安法：移取样品溶液1.0ml3份，测得峰电流为1.6323、1.6822、1.6691微安，计算槲皮素的平均含量为2.61%，RSD为3.65%。

回收率

三氯化铝比色法：移取样品溶液0.1ml3份，分别加入0.2、0.4、0.6ml槲皮素标准品溶液，计算平均回收率为99.68%，见表1。

催化动力学：移取样品溶液0.2ml3份，分别加入1.0、2.0、3.0ml槲皮素标准品溶液，计算平均回收率为95.67%，见表2。