鱼藤素对食管癌EC-109细胞增殖的抑制作用及部分机制

白美玲,刘星亮,张林西,李海军

(河北北方学院 1.基础医学院、2.附属第一医院神经内科、3.生命科学研究中心，河北 张家口　075000)



鱼藤素对食管癌EC-109细胞增殖的抑制作用及部分机制

白美玲1,刘星亮2,张林西3,李海军1

(河北北方学院 1.基础医学院、2.附属第一医院神经内科、3.生命科学研究中心，河北 张家口075000)

Inhibitory effect of deguelin on esophageal cancer EC109 cells and its mechanism

BAI Mei-ling1，LIU Xing-liang2, ZHANG Lin-xi3, LI Hai-jun1

(1.BasicMedicalCollege, 2.DeptofNeurologyoftheFirstAffiliatedHospital, 3.LifeSciencesResearchCenter,HebeiNorthUniversity,ZhangjiakouHebei075000,China)

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.08.029

氧化应激；鱼藤素； Keap1-Nrf2通路; HO-1；食管癌；流式细胞术

氧化和抗氧化失衡在肿瘤发生发展过程中的作用被越来越多的学者所关注[1-2]。本实验拟通过安全有效的体外实验来观察鱼藤素在食管癌细胞中的作用效果，同时观察慢性氧化应激相关通路在其中的作用机制。

1　材料与方法

1.1药物与试剂鱼藤素(deguelin)购自Sigma公司，p-Akt兔抗人单克隆抗体、Nrf2兔抗人单克隆抗体、HO-1鼠抗人单克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司。

1.2细胞培养人食管癌细胞株EC-109由河北北方学院生命科学研究中心惠赠。将复苏后的EC-109细胞分为对照组和鱼藤素组(浓度为20、40、80、160 nmol·L-1)进行实验。

1.3细胞增殖抑制的检测采用CCK-8法，各组分别设4个复孔，每组选取1×106个细胞作用24、48 h 后，波长为490 nm酶标仪测光密度值(OD)。

1.4检测细胞周期收集药物作用24h的各组细胞1×106个，离心，并按照说明书步骤通过流式细胞仪检测细胞周期。

1.5琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡用对照组和不同浓度鱼藤素药物组提取的DNA样品观察凋亡情况。

1.6蛋白质印迹法检测p-Akt、Nrf2和HO-1的表达各组加入蛋白裂解液提取总蛋白，分别加入一抗和二抗，DAB显色观察。

2　结果

各组作用24 h后，各药物组均可明显抑制EC-109细胞的增殖，且两者有协同作用。由Tab 1可见，对照组细胞的生长主要阻滞在S期，而鱼藤素组主要阻滞在G0/G1期，差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度的鱼藤素作用24 h后可见凋亡率随着药物浓度的升高而增加。Western印迹法分析显示，p-Akt 、Nrf2和 HO-1蛋白条带的光密度均低于对照组(P<0.05)。

Tab 1　Cell cycle of different groups in 24 h

*P<0.05,**P<0.01vscontrol

3　讨论

本实验结果表明，随着鱼藤素的浓度增高，能明显地抑制EC-109癌细胞的增殖，并在诱导细胞凋亡的过程中也发挥重要作用，具有浓度-时间效应(P<0.05)。已有研究表明[3-4]，通过细胞生长周期的调控来减缓细胞增殖速度、加快细胞凋亡。本实验结果表明鱼藤素阻滞了细胞周期，抑制了EC-109细胞的增殖过程。

在本实验中，通过Western blot检测发现，鱼藤素组较对照组的p-Akt蛋白量略减少，Nrf2和HO-1蛋白的表达量亦下降。推测鱼藤素发挥抗氧化作用是通过抑制磷酸化Akt(p-Akt)的激活，即PI3K/Akt通路的失活，从而降低了p-Akt磷酸化Nrf2，抑制了内源性抗氧化物质生成通路的激活，失活后的Nrf2引发其下游靶基因人血红素加氧酶1(HO-1)的表达量下降，整个过程为一个连续的级联反应。而在此过程中，PI3K/Akt通路和Keap1-Nrf2通路呈正向调节作用，也为鱼藤素在临床上的应用推广奠定了理论基础。

(致谢：本文实验在河北北方学院生命科学研究中心完成。)

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oxidative stress; deguelin; Keap1-Nrf2 pathway; HO-1; esophageal cancer; flow cytometry

2016-04-15,

2016-05-15

河北省高等学校科学技术研究青年基金项目(No QN2014217)；河北省医学科学研究重点课题(No ZD20140202)；河北北方学院青年基金项目(No Q2014033)

白美玲(1979-)，女，硕士，讲师，研究方向:消化系统肿瘤，通讯作者，E-mail：blxiaobai2013@163.com

A

1001-1978(2016)08-1181-02

R329.24；R349.1；R735.102.2；R979.1

网络出版时间：2016-7-19 10:43网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160719.1043.058.html

◇研究简报◇