西藏林芝地区川贝母（瓦布贝母）总生物碱含量研究※

林丽君钟燕珠雷旭区炳雄林华（广东省深圳市罗湖区中医院药剂科，深圳5800；广州中医药大学第二附属医院药学部，广州500）

西藏林芝地区川贝母（瓦布贝母）总生物碱含量研究※

林丽君1钟燕珠2*雷旭2区炳雄2林华2
（1广东省深圳市罗湖区中医院药剂科，深圳518001；2广州中医药大学第二附属医院药学部，广州510120）

目的以总生物碱含量为指标，考察西藏林芝地区不同产地野生川贝母（瓦布贝母）的品质情况，为今后林芝地区川贝母人工种植种质选育奠定实验基础。方法以西贝母碱为对照品，紫外分光光度法测定川贝母（瓦布贝母）总生物碱的含量。结果所测林芝地区川贝母（瓦布贝母）中总生物碱的含量均高于《中国药典》要求，是其规定含量的1.26～3.44倍。结论林芝地区的野生川贝母（瓦布贝母）可作为人工种植育种的种质来源。

林芝地区；川贝母；瓦布贝母；总生物碱

川贝母为止咳化痰的良药，市场需求量巨大。但川贝母药材主要来源于野生资源，且多分布在采挖困难的边远地区，产量不多，供需矛盾日益突出。为缓解供需矛盾，医药工作者在人工种植川贝母方面做了较多有益的探索［1］。西藏林芝地区有一定量的野生川贝母（瓦布贝母）分布，具备种植川贝母的地理环境和气候。瓦布贝母是《中国药典》收载的川贝母来源之一。笔者以川贝母的主要有效成分总生物碱为指标［2］，考察林芝市不同县区瓦布贝母的品质，为川贝母人工种植寻找优质种质资源。

1仪器与试药

1.1仪器UV BLustar A紫外分光光度计（北京莱伯泰科仪器有限公司），Sartorius BSA224S型分析天平，SII-NI4B电热恒温水浴锅（北京精科华瑞仪器有限公司），具塞试管，分液漏斗，滤纸，具塞锥形瓶。

1.2试药西贝母碱对照品（批号X-021150320、纯度＞98％、成都瑞芬思生物科技有限公司），甲醇（天津市致远化学试剂有限公司），三氯甲烷（天津市富宇精细化工有限公司），溴甲酚绿（天津市天新精细化工开发中心），氢氧化钠（天津市百世化工有限公司），磷酸二氢钾（天津市百世化工有限公司），氨水（天津市富宇精细化工有限公司）。

实验所用1～6号川贝母样品采自西藏林芝市不同县区，亲自或委托他人向当地药农收购，经广州中医药大学谭树辉副教授鉴定为瓦布贝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia var.wabuensis（S.Y. Tang et S.C.Yue）Z.D.Liu，S.Wang et S.C.Chen的干燥鳞茎。样品信息见表1。

表1　样品信息

2方法与结果

2.1对照品溶液的制备取西贝母碱对照品适量，精密称定9.99 mg，置50 mL容量瓶中，加三氯甲烷至刻度，制成浓度为0.1998 mg·mL的对照品溶液。

2.2供试品溶液的制备取川贝母（瓦布贝母）样品粉末（过三号筛）约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液3 mL，浸润1 h，加三氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶液40 mL，置80℃水浴加热回流2 h，放冷，滤过，滤液置50 mL量瓶中，用适量三氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶液洗涤药渣3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶液至刻度，摇匀。精密量取5 mL，置25 mL具塞试管中，水浴上蒸干，精密加入三氯甲烷10 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.3线性关系考察精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、1.0、2.0 mL，置25 mL具塞试管中，分别补加三氯甲烷至10.0 mL，精密加水5 mL、再精密加0.05％溴甲酚绿缓冲液2 mL，密塞，剧烈震摇1 min，转移至分液漏斗中，放置30 min。取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在415nm的波长处测定吸光度［3，4］，以吸光度（Y）为纵坐标，浓度（X，μg/mL）为横坐标进行线性回归，得到回归方程为：

结果表明，西贝母碱在1.998～39.960μg·mL范围内与吸光度呈良好线性关系。

2.4精密度试验精密量取同一对照品溶液，按“2.3”项下的方法测定吸光度，连续依法测定6次，RSD值为0.92％（n=6），表明仪器精密度良好。

2.5稳定性试验精密量取同一供试品溶液，按“2.3”项下的方法，于0、1、2、4、8 h分别依法测定吸光度，RSD值为1.52％（n=5），表明溶液在8h内稳定性良好。

2.6重复性试验取同一川贝母样品6份，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，并按“2.3”项下的方法，自“精密加水5 mL”起，依法测定吸光度，计算含量。结果样品中总生物碱含量的平均值为0.1087％，RSD值为1.10％（n=6），表明方法重复性良好。

2.7加样回收率试验取已知总生物碱含量的样品（0.1087％）6份，每份1 g，精密称定，分别精密加入西贝母碱适量，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，并按“2.3”项下的方法，自“精密加水5 mL”起，依法测定吸光度，计算总生物碱含量，计算回收率。结果见表2。

表2　加样回收率试验结果（n=6）

2.8样品测定取“2.2”项下供试品溶液，照“2.3”项下的方法，自“精密加水5 mL”起，依法测定吸光度，含总生物碱以西贝母碱计，计算样品中总生物碱的含量。结果见表3。

表3　总生物碱含量测定结果（n=3）

3讨论

伴随着川贝母野生资源的极度短缺，药材价格近年迅速攀升，且普遍存在掺伪现象，市场上难有合格川贝母药材销售。寻找优质川贝母种质资源，并开展人工种植条件研究已到了刻不容缓的时刻。

西藏林芝地区川贝母（瓦布贝母）6个样品中总生物碱含量与《中国药典》规定含量（0.05％）相比较，均高于其要求，采自察隅县的5号样品含量最低，也达到规定含量的1.26倍；采自巴宜区的1号、4号样品中总生物碱达规定含量的3倍以上，分别为3.06倍和3.44倍，采自米林县的2号、6号样品也分别是规定含量的2.19倍和2.68倍。表明林芝地区野生川贝母（瓦布贝母）品质均较好，可从中筛选优质高产的品种，作为人工种植育种的种质来源。

［1］向丽，韩建萍，陈士林.人工栽培川贝母种苗质量标准研究［J］.环球中医药，2011，4（2）：91-94.

［2］颜晓燕，彭成.川贝母药理作用研究进展［J］.中国药房，2014，22（31）：2963-2965.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2015：36-38.

［4］王纯玉，何祖新，吴玉良.不同商品规格川贝母总生物碱含量测定的方法研究［J］.中国药业，2013，22（15）：31-33.

Research on the Total Alkaloid Content of Bulbus Fritillariae Wabuensis in Nyingchi Prefecture of Tibet

LIN Lijun1，ZHONG Yanzhu2，LEI Xu2，OU Bingxiong2，LIN Hua2
（1.Department of Pharmacy，Shenzhen Luohu District Hospital of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Province，Shenzhen 518001，China；2.Department of Pharmacy，The Second Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou，518001，China）

Objective To investigate the general quality of wild Bulbi fritillariae wabuensis from different places of origin in Nyingchi Prefecture，Tibet Autonomous Region，with the total alkaloids content as the indicator，in order to lay the experimental basis for germplasm selection and breeding of future artificial cultivation of F.wabuensis in Nyingchi prefecture.Methods UV-Vis spectrophotometric determination of the total alkaloids of F.wabuensis was conducted，with Sipeimine as the reference substance.Results The measured total alkaloid contents of F wabuensis bulbi from Nyingchi Prefecture were all above the standards stipulated in the Pharmacopoeia of the People's Republic of China（PPRC），being 1.26 to 3.44 times its statutory content in PPRC.Conclusion Wild F.wabuensis bulbi from Nyingchi prefecture of Tibet can be used as a source of germplasm for breeding in artificial cultivation.

Nyingchi prefecture；F.wabuensis bulbus；Bulbus fritillariae wabuensis；total alkaloids

doi：10.3969/j.issn.1672-2779.2016.14.0661672-2779（2016）-14-0146-02

※广东省省级科技计划项目（No：2013B060400021）
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duduzyz@sohu.com

（本文编辑：张文娟本文校对：张文娟2016-04-27）