不同产地白花蛇舌草中东莨菪亭和耳草酮B的含量分析比较

刘 红（青岛第八人民医院药品采购办，山东 青岛 266000）



不同产地白花蛇舌草中东莨菪亭和耳草酮B的含量分析比较

刘 红
（青岛第八人民医院药品采购办，山东 青岛 266000）

目的 建立HPLC法对不同产地白花蛇舌草药材中东莨菪亭和耳草酮B含量进行了考察研究，为药材的开发利用奠定了基础。方法 应用高效液相色谱法进行含量测定，色谱柱：Agilent Eelipse XDB-C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流动相：甲醇-0.1%冰醋酸水溶液，梯度洗脱；检测波长：385 nm；柱温：30 ℃；流速：10 mL/min；进样量：10 μL。结果 江西产白花蛇舌草药材中东莨菪亭和耳草酮B含量均高于其他产地，其次为湖北、安徽，广西产含量最低。结论 不同产地的白花蛇舌草中东莨菪亭和耳草酮B的含量有较大的差异，通过方法学考察验证，该方法精密度高、稳定性良好，方法可行。

白花蛇舌草；东莨菪亭；耳草酮B；含量测定

白花蛇舌草具清热解毒，活血利尿之功效。临床用于治疗扁桃体炎、咽喉炎、尿路感染、盆腔炎、肝炎、菌痢、阑尾炎、毒蛇咬伤等病症疗效显著。现代药理学研究证明，白花蛇草可增强机体免疫力，抑制肿瘤细胞生长，对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌等多钟致病菌均有不同程度的抑制作用［1］。本研究在前人研究工作基础上，采用高效液相色谱方法对不同产地白花蛇舌草东莨菪亭和耳草酮B含量进行了测定，通方法学考察验证，该方法精密度、稳定性、重复性、回收率试验良好，方法可行，为今白花蛇舌草东莨菪亭和耳草酮B的研究提供了依据，同时也为药材的开发利用奠定了基础。

1　实验材料

1.1药材：白花蛇舌草药材购于同仁堂，医药大厦等，经鉴定所购药材均为茜草科植物白花蛇舌草 Hedyotis diffusa Willd. 的干燥全草。白花蛇舌草产地见表1。

表1　白花蛇舌草药材来源

1.2试剂：东莨菪亭标准品购于中国药品生物制品检定所，批号为110753-201314，耳草酮B标准品为实验室分离纯化所得，甲醇为色谱纯，水为超纯水，冰醋酸、乙醇等其他试剂均为分析纯。

1.3仪器：Agilent高效液相色谱仪（美国惠普安捷伦公司）；TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；AB-135型万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。

2　方法与结果

2.1色谱条件：以十八烷基键合硅胶为填充剂；色谱柱： Agilent Eelipse XDB-C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流动相：甲醇-0.1%冰醋酸水溶液，梯度洗脱；检测波长：385 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

甲醇为流动相A，0.1%冰醋酸水溶液为流动相B，梯度洗脱方法见表2。

2.2标准品溶液制备：精密称取东莨菪亭和耳草酮B对照品，加适量甲醇配制成每1 mL含东莨菪亭80 μg、耳草酮B60 μg的混合对照品溶液。

表2　梯度洗脱方法

2.3供试品溶液制备：取白花蛇舌草药材，粉碎过120目筛。精密称取白花蛇舌草样品粉末1.0 g，加入带有塞得锥形瓶中，量取甲醇溶液100 mL，加入至锥形瓶中，称定重量，超声30 min，取出，放至室温，再称定重量，加入甲醇不足减少的重量，混匀，过滤，量取滤液10 mL，加入50 mL棕色容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，混匀，即得供试品溶液［2］。

2.4方法学考察

2.4.1标准曲线：分别精密量取上述东莨菪亭和耳草酮B标准品溶液4 µL、8 µL、10 µL、14 µL、16 µL注入高效液相色谱仪，记录峰面积数值，以进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线得到线性回归方程为东莨菪亭：Y=383555X+508227，r=0.9998；耳草酮B：Y=271976X+916648，r=0.9996。结果表明，东莨菪亭在0.047～0.544 μg范围内具良好的线性关系。耳草酮B在0.058～0.924 μg范围内具良好的线性关系。线性关系见图1。

图1　线性关系图

2.4.2精密度试验：精密量取标准品溶液连续重复测定6次，结果显示，东莨菪亭和耳草酮B标准品和样品RSD值分别为0.32%、2.08%，表明仪器精密度良好。

2.4.3稳定性试验：精密量取供试品溶液，每隔2 h测定一次峰面积，测定12 h，根据测得东莨菪亭和耳草酮B峰面积，计算东莨菪亭和耳草酮B含量的平均值及RSD值。稳定性试验结果显示，在12 h内RSD值分别为1.02%、1.58%，表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.4.4重复性试验：精密称取白花蛇舌草供试品溶液6份，分别测定峰面积值。计算总东莨菪亭和耳草酮B的含量及RSD值，重复性试验结果显示，东莨菪亭和耳草酮B含量的RSD值分别为1.83%、1.65%，表明该方法重复性较好。

2.4.5回收率试验：精密称取同一批次白花蛇舌草供试品溶液，精密加入东莨菪亭和耳草酮B标准品，依次测定，计算回收率、RSD值。结果显示，所有供试品回收率均介于95%～105%，样品的平均回收率为99.98%，RSD值为0.092%，＜3%，说明本法准确性较好，方法可行。

2.4.6含量测定：取不同产地的白花蛇舌草供试品，测定相应样品的峰面积，根据对照品与样品的峰面积计算东莨菪亭和耳草酮B含量，结果见表3。

表3　不同产地白花蛇舌草东莨菪亭和耳草酮B含量（μg/g）

3　讨 论

以往研究中较常用紫外可见分光光度法测定白花蛇舌草中所含成分含量，本研究应用高效液相色谱仪，建立HPLC法对江西、湖北、安徽等不同产地的白花蛇舌草药材进行了东莨菪亭和耳草酮B含量测定研究，为今白花蛇舌草东莨菪亭和耳草酮B的研究提供了依据，测量前取东莨菪亭和耳草酮B对照品、供试品及空白溶液，在200～400 nm波长范围进行光谱扫描。供试品和对照品在385 nm处有最大吸收，而空白溶液无吸收，测得数据与查询相关报道文献接近。白花蛇舌草药材提取液东莨菪亭和耳草酮B最大吸收波长与对照品最大吸收波长一样，所以将385 nm作为测定波长。测定结果表明，不同产地白花蛇舌草药材中东莨菪亭和耳草酮B的含量有较大的差异，江西白花蛇舌草东莨菪亭和耳草酮B含量最高，分别达到9.7 μg/g、15.3 μg/g；其次是湖北、安徽；含量最低的是广西的药材，东莨菪亭和耳草酮B含量为3.2 μg/g、0.7 μg/g。分析存在这种差异的原因，可能是由于不同地区的气候差异、人为环境等因素引起的［3］。相信随着对白花蛇舌草研究的跟进一步的研究，白花蛇舌草一定会在医药领域、化妆品领域、食品等相关领域发挥越来越大的作用。

［1］ 杨娴,刘汝青,杜德荣,等.白花蛇舌草总黄酮对黑色素瘤A375和B16细胞增殖抑制作用的研究［J］.世界中西医结合杂志,2011,6 （10）：844-846.

［2］ 温丽荣,姚志红,陈妍,等.高效液相色谱法同时测定白花蛇舌草中6个成分的含量［J］.中国药学杂志,2014,49（5）：406-411.

［3］ 冯颖,何俊,刘虹,等.不同产地桑叶中6种化学成分含量的液相色谱-质谱联用同时测定［J］.时珍国医国药,2013,24（3）：572-574.

R282.710.3

B

1671-8194（2016）20-0040-02