饲料添加剂的蓄积对幼犬睾丸功能相关酶活性的影响

王卫杰，李　惠，王　乐，徐　丹

（开封市医学科学研究所，河南 开封　475000）

试验研究Experimental Study

饲料添加剂的蓄积对幼犬睾丸功能相关酶活性的影响

王卫杰，李惠，王乐，徐丹

（开封市医学科学研究所，河南 开封475000）

探讨饲料添加剂的蓄积对雄性幼犬的生长、生殖发育的影响。选用1月龄土犬12只，随机分为试验组和对照组，试验组幼犬饲喂正常剂量日粮和高剂量组大鼠鼠肉，对照组幼犬饲喂正常剂量日粮和大鼠鼠肉，喂至幼犬成熟，检测雄性幼犬食用饲料添加剂高剂量组大鼠鼠肉后对其生长、生殖发育产生影响。幼犬睾丸标志酶活性结果表明，试验组幼犬睾丸组织中酸性磷酸酶（ACP）和乳酸脱氢酶（LDH）的酶活性下降，碱性磷酸酶（AKP）活性未发生变化；试验组的ACP和LDH活性下降，差异极显著（P＜0.01）。

饲料添加剂；犬；睾丸标志酶；蓄积

随着人民生活水平的不断提高，人们对于食品的安全问题愈加关注，尤其是动物性食品安全问题。动物饲料是食品有毒有害物质残留的一个重要来源，饲料添加剂通过畜禽产品带给人类的隐患将是难以估量的［1］。

因此本试验研究了食用饲料添加剂的大鼠鼠肉是否对雄性幼犬的生殖系统及发育产生影响，通过模拟人类食物链试验，进一步为动物饲料添加剂的蓄积对人类生殖系统的影响提供初步试验依据，从而推测动物饲料添加剂对生殖发育的影响。

1　材料与方法

1.1试验动物

SD雄性大鼠：河南省试验动物中心购买的26日龄SD雄性大鼠，体重为85.00±4.50 g。实验室温度控制在22～24℃，空气相对湿度50%～65%，自然采光，自由饮水，环境安静。试验用犬的选择是3只公犬，10只母犬，均通过农村收购，体重为3.5～4.5 kg。3只公犬和10只母犬交配，对照组和试验组均为6只，从交配所生的10窝中选取6窝，每窝选取2只体重相近、发育良好的幼犬。

1.2试验饲粮

4%仔猪用复合预混料配方见表1。

表1　4%仔猪用复合预混料配方

1.3试验设计

试验动物均为体重相近，年龄相近的幼犬12只。随机分为试验组及对照组，每组6只，试验组从2月龄开始喂养大鼠鼠肉。

幼犬每日肉类：0.262×57.3%=0.150 kg，试验大鼠平均重量300.00 g，约需0.5只；以后每月增加0.5只；对照组饲喂正常犬日粮和正常大鼠鼠肉，试验组饲喂高剂量组大鼠鼠肉和正常犬日粮，饲喂期为10个月。

1.4饲养管理

所有试验犬全部饲养于同一动物舍，单笼饲养，定期冲洗及消毒。预试期对试验犬进行驱虫、注射疫苗。采用群饲方式，每天8:00和16:00各饲喂1次。观察犬的生长发育、排便、采食等健康情况，并记录各组投料量与剩料量，做好数据统计工作。

1.4测定指标

1.4.1生长性能指标

体重的称量：在试验2月龄开始每月第1周周一上午测量1次，连续测11个月。

1.4.2睾丸组织标志酶指标

试验结束后取双侧睾丸，用冰冷的生理盐水漂洗，制成1%的组织匀浆，酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）和乳酸脱氢酶（LDH）的活性测定操作按照试剂盒说明进行。

1.5统计学处理

试验结果用SPSS 21.0软件，采用One Way ANOVA进行统计，并进行Duncan's多重比较，结果以“平均值±标准误”表示。

2　结果与分析

2.1犬体重测定结果

试验组犬体重变化结果见表2。

表2　试验组犬体重变化结果　kg

由表2可知，试验组幼犬4月龄开始其体重明显增加，差异极显著（P＜0.01）；饲喂不同天数后，试验组犬体重与对照组相比明显升高，差异极显著（P＜0.01）。

2.2犬的睾丸组织标志酶指标结果

各组犬的睾丸组织标志酶指标结果见表3。

由表3可知，增加食用实验大鼠鼠肉的剂量，试验组睾丸组织标志酶的变化如下：试验组ACP、LDH活性下降，试验组AKP活性未发生明显变化。与对照组相比，试验组的ACP、LDH活力明显降低，差异极显著（P＜0.01）。

表3　各组犬的睾丸组织标志酶指标结果　U·L-1

3　讨论

3.1雄性幼犬食用试验大鼠对其体重的影响

饲料添加剂引起机体和器官组织的改变，往往在动物体重和脏器重量上反映出来。因此动物体重和脏器重量是机体改变的重要而敏感的指标之一。本试验结果表明，试验初始幼犬体重没有出现显著差异，但试验组雄性幼犬食用大鼠鼠肉后，试验组幼犬体重从4月龄开始逐渐增加，试验组体重增加速度相比对照组较快。试验结果表明，饲料添加剂的二次蓄积能够促进雄性幼犬的生长。

3.2雄性幼犬食用试验大鼠对其睾丸标志酶指标的影响

雄性生殖细胞在睾丸组织中的发育依赖于其生存的稳定内环境、激素以及相关酶类的调节［2］。有研究表明，睾丸组织标志酶在精子发生与成熟过程中起重要作用，比如琥珀酸脱氢酶（SDH）、LDH、ACP等。主要分布于生精细胞的线粒体内，是能量代谢的主要参与酶，精子的发生和成熟与SDH和LDH的活力大小密切相关［3-5］。睾丸AKP、ACP和LDH是睾丸中的几种标志酶，其活性是睾丸机能正常与否的标志，也是维持精子发生不可缺少的重要条件［6］。试验发现，10月龄幼犬睾丸组织中LDH活性下降，说明睾丸组织细胞能量代谢作用受到影响，进而影响到精子质量；ACP由前列腺分泌，主要分布于睾丸支持细胞的溶酶体内，是支持细胞标志酶，与精液参数密切相关。ACP参与精子代谢并有助于精子活力，其活性受雄激素调控，ACP在精液中的含量变化能反应前列腺的分泌功能并有助于前列腺疾病的诊断。ACP在性激素诱导下参与蛋白质的合成，其活性改变与上皮细胞的变性有关，可作为是否有生精障碍的指标；试验结果同样显示，试验组酸性磷酸酶活性随精子密度及活动率减低而下降［7］。

本试验结果表明，雄性犬增加食用实验大鼠鼠肉的剂量，实验组睾丸组织中LDH、ACP活性随之下降。睾丸LDH参与能量代谢，该酶受到抑制，将阻碍能量的供给，造成精子活动度降低，良好精子比例下降［8-10］。

4　结论

雄性幼犬食用实验大鼠瘦肉11月龄睾丸组织中乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶活性下降，碱性磷酸酶活性未见明显变化。说明雄性幼犬食用实验大鼠后可干扰其部分睾丸标志酶的正常反应，引起生殖系统的损伤。

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The Influence of Accumulation of Feed Additive on Puppies Testicular Function Marker Enzyme Activity

WANG Weijie，LI Hui，WANG Le，XU Dan
（Institute of Medical Sciences in Kaifeng，Kaifeng 475000，Henan China）

This experiment aimed to study and analysis the feed additives widely used on the effect of feed additives accumulation on growth and reproductive development of the second-feed male pups.Tweleve onemonth-old male pups were selected and randomly divided into experimental and control groups.The control group were fed with the normal diet and rat meat，the experimental group were fed with the normal diet and high-dose rat meat.After the dogs mature，and tested high-dose rat meat effect on male pups growth and reproductive development. Detected testicular function marker enzyme activity and the results showed that the experimental group testicular tissue lactate dehydrogenase，acid phosphatase activities were having a downward trend，the experimental group of alkaline phosphatase viability did not change.Compared with the control group，LDH viability experimental group was significantly lower，the difference was statistically significant；ACP vitality experimental group was significantly lower，the difference was statistically significant（P＜0.05）.

feed additives；puppies；testicular function marker enzyme；accumulation

S816.7；S829.2

A

1001-0084（2016）07-0001-03

2016-05-27

开封市科技攻关计划项目（110309）

王卫杰（1987-），女，河南开封人，硕士研究生，研究方向为生物学。