正交试验优选清热润肺合剂提取工艺

徐　勇



正交试验优选清热润肺合剂提取工艺

徐勇

目的优选我院制剂清热润肺合剂的提取工艺。方法以加水量、煎煮时间和提取次数为考察因素，黄芩苷含量及出膏率为试验指标，采用正交试验优选清热润肺合剂提取工艺。结果清热润肺合剂最佳工艺为水煎2次，每次煎煮时间为1.5h。结论该研究为清热润肺合剂剂型改革和制剂工艺研究提供实验依据。

正交试验；清热润肺合剂；提取工艺；黄芩苷

清热润肺合剂[辽药制字Z05050027]是我院研制，用于治疗呼吸道感染的中药制剂，由清热润肺煎剂改剂型而成，该制剂由生地黄、黄芩、牡丹皮、玄参、连翘、金银花等10味中药组成，具有清热润肺、止咳平喘之功。主要用于咳嗽、喘促、痰黏稠色黄，身热，渴喜冷饮等症[1]。临床以汤剂的形式应用多年，经过长期的临床观察和研究，显示出较好的临床疗效。为方便患者，我们将汤剂改为合剂，为保证制剂质量及疗效，用正交试验对合剂的提取工艺进行优选，以黄芩苷含量及出膏率为评价指标。

1　仪器与试药

1.1仪器日本岛津LC-10AD高效液相色谱仪，SPD-10AV紫外-可见检测器，Anastar工作站；AUW220D型岛津分析天平。

1.2试剂黄芩苷(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：111810-201304)；中药材均由河北祁奥中药饮片有限公司提供，经本溪市药检所鉴定，符合《中华人民共和国药典》2010年版一部项下规定[2]。甲醇、磷酸为色谱纯，水为纯化水。其他化学试剂均为分析纯。

1.3工艺设计根据处方中所含10味中药材的成分分析[3]，均可用水提法提取有效成分，用正交试验对提取工艺进行优选。

1.3.1正交试验设计考虑水提取工艺的主要影响因素，选择加水量(A)、煎煮次数(B)、煎煮时间(C)为考察因素，按L9(34)正交试验表进行试验，以黄芩苷含量及出膏率为考察指标，因素与水平见表1。

表1　提取工艺的因素水平表

1.3.2样品制备按处方比例称取9份处方中各药味，每份样品按正交表安排的条件进行提取，合并提取液，备用。

1.4黄芩苷含量测定

1.4.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱为十八烷基键合硅胶为填充剂，色谱柱为DiamonsilC18(4.6mm×200mm)；流动相为甲醇-水-磷酸(45∶55∶0.2)；检测波长为315mm；柱温为室温；理论塔板数按黄芩苷色谱峰计算，不低于3000；主峰与其他物质峰的分离度应符合规定。

1.4.2对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品(60℃减压干燥4h)适量，加甲醇溶解，制成每1mL含0.031mg的对照品溶液。

1.4.3标准曲线的制备精密量取黄芩苷对照品溶液3kμL，6μL，9μL，12μL，15μL，按上述色谱条件进样测定峰面积，以黄芩苷峰面积积分值为纵坐标(y),进样量(μg)为横坐标(x),进行线性回归，得同归方程y=0.00000453x-0.0000152，Chi-Square：3.821。结果表明，黄芩苷在0.0928～0.4648μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。分析方法的系统适用性实验结果及精密度、重现性、回收率结果均符合分析要求[1]。

1.5出膏率的测定精密量取提取液50ml，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，置干燥器中冷却1h，称重，计算出膏率[出膏率=干膏重(g)/药材总重(g)×100%]

2　结果

2.1正交实验结果与分析根据经验知道，黄芩苷含量比出膏率更重要，因此，两个指标的权重系数分别取为ω1=0.6和ω2=0.4。为使各指标单位统一，把试验结果的每项指标中最好的指标定为60分和40分，综合评分为100分。在统一标准下加权评分为：出膏率：y1=(y1÷32.12×100)×0.4；黄芩苷含量：y2=(y2÷6.98×100)×0.6；综合评分：y= y1+y2。正交试验结果见表2。

表2　正交实验结果

2.2方差分析结果以综合评分值为指标，对结果进行方差分析，列出方差分析表。方差分析表明，因素A为不明显因素，可根据生产实际情况确定加水量；因素B、C对综合指标有显著性影响，最佳试验组合应为B3C3；但从生产实际出发考虑，B2与B3的试验结果之间相差不大，煎煮3次能耗较大且易煎出更多杂质，给后期分离带来困难，所以选B2较为合适。因此，最佳工艺为水煎2次，每次煎煮时间为1.5h。见表3。

表3　方差分析表

注：F0.05(2,2)=19.00,F0.01(2,2)=99.00

2.3工艺验证试验按处方比例称取各药材，共3份，按优选的最佳工艺分别进行提取，按“1.4”“1.5”项下方法测定提取液中黄芩苷含量和出膏率。该验证试验结果理想，表明优选工艺合理、可行，可用于清热润肺合剂提取。结果见表4。

表4　验证试验结果

3　讨论

中药提取过程对于中药质量、疗效有着举足轻重的影响。众所周知，中药的疗效是通过一系列相似结构的化合物群(有效成分)的协同作用而体现的。要保证中药产品的质量稳定，疗效可靠，就必须对中药提取物的生产过程进行研究和标准化建设。

本工艺的筛选指标确定为3个。黄芩系方中君药，黄芩苷是黄芩抗菌消炎的主要药效物质，且其结构上存在较多共轭双键结构，紫外吸收非常明显，测定灵敏性更高。因此，选择以黄芩苷含量作为提取工艺主要的评价指标进行综合评价[4]。而干浸膏是药物治疗疾病的物质基础，故也应作为检测指标[5]。本试验以多指标控制和评价中药制剂质量，使试验结果更科学、合理、全面。

[1]张冬梅.清热润肺合剂质量标准的研究[J].辽宁中医杂志,2009,36(9)：1559-1560.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京:化学工业出版社，2010:282.

[3]肖庆祥，江纪武.植物药有效成分手册[M].北京:人民卫生出版社,1986:20.

[4]张璐,仇继玺,刘瑞新. 柴芩合剂提取工艺研究[J].中医学报,2014,19(191):540-542.

[5]彭凯丽,李新民,李元林,等.正交试验优选复方桑菊口服液中药材的提取工艺[J].中国药房,2014,25(3):243-245.

The Extraction Technology of Orthogonal Experiment Optimization of Qingre Runfei Mixture

XU Yong

(Department of Pharmacy, Benxi Hospital of TCM, Liaoning, Benxi 117000, China)

ObjectiveTo optimize the best extraction technology of Qingre Runfei mixture. MethodsThe orthogonal experiment method was employed to study the best extracted technique with the content of baicalin and extraction rate taken as indexes by water volume, decocting times and decocting time as factors. ResultsThe best optimal water extraction technology conditions for optimization were as follows: decocted in water twice for 1.5 hour each time. ConclusionThe research provided basis for the dosage form reform of Qingre Runfei mixture and optimization of extraction technology.

Orthogonal experiment; Qingre Runfei mixture; Extraction technology; Baicalin

辽宁省本溪市中医院药剂科(本溪 117000)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.03.022

1003-8914(2016)-03-0348-02

(本文校对：张叶2015-05-11)