HPLC法测定稳心颗粒中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd与党参炔苷的含量*

南　国，张　鹏，王　萌，王跃飞，朱　彦，吴红华

（1.天津中医药大学，天津市现代中药重点实验室，天津 300193；2.天津国际生物医药联合研究院中药新药研发中心，天津 300457）

HPLC法测定稳心颗粒中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd与党参炔苷的含量*

南国1，2，张鹏1，2，王萌1，2，王跃飞1，2，朱彦1，2，吴红华1，2

（1.天津中医药大学，天津市现代中药重点实验室，天津 300193；2.天津国际生物医药联合研究院中药新药研发中心，天津 300457）

［目的］建立高效液相法（HPLC）同时测定稳心颗粒中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd与党参炔苷的含量。［方法］采用Agilent1260 DAD高效液相色谱仪，Amethyst C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，4 μm），乙腈-水为流动相，检测波长为210 nm，流速1 mL/min。［结果］三七皂苷R1对照品在8～247 mg/L线性关系良好，平均回收率为102.69%，RSD=2.74%（n=6）；人参皂苷Rg1对照品在14～422 mg/L线性关系良好，平均回收率为98.72%，RSD=1.85%（n= 6）；党参炔苷对照品在1.5～42 mg/L线性关系良好，平均回收率为97.69%，RSD=1.94%（n=6）；人参皂苷Rb1对照品在2.65～847 mg/L线性关系良好，回收率为102.11%，RSD=1.96%（n=6）；人参皂苷Rd对照品在8～255 mg/L线性关系良好，平均回收率为99.66%，RSD=2.49%（n=6）。［结论］本实验中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd和党参炔苷的含量测定方法稳定可靠，可作为稳心颗粒中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd与党参炔苷含量测定方法。

稳心颗粒；高效液相色谱法；三七皂苷R1；人参皂苷Rg1；党参炔苷；人参皂苷Rb1；人参皂苷Rd

稳心颗粒是由三七、党参、黄精、甘松和琥珀等组成的复方制剂［1］，其配伍特点与炙甘草汤一脉相承，具有活血化瘀、行气导滞、益气养阴的功效［2］。稳心颗粒是目前中国首个通过美国实验室论证，具有多离子通道［钠离子（Na+）、钾离子（Ka+）、钙离子（Ca2+）］调节作用的中成药［3-4］，能从根本上改善心律失常的原发病［5-6］，临床将其用于室性早搏的治疗，疗效显著［7］。方中党参为君药，补中益气，帅血而行，使心脉通而不滞；三七活血化瘀，定惊安神，为佐药［8］。

2015年药典记载了稳心颗粒中三七皂苷R1，人参皂苷Rg1、Rb1的定量方法。本实验在此研究的基础上，简化实验步骤，引入了两个新定量指标：人参皂苷Rd与党参炔苷。使得稳心颗粒的定量成分不再局限于三七药材，使得质量标准更加全面。为稳心颗粒的质量控制及后续作用机制研究打下基础。

1　实验材料

1.1仪器Agilent1260 DAD高效液相色谱仪；超纯水仪（Milli-Q，美国Millipore公司）；十万分之一天平（METTLER TOLEDO XS205，瑞士METTLER公司）；万分之一天平（METTLER TOLEDO AL204，瑞士METTLER公司）；SCIENTZ SB 25-12DTN超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2药品与试剂稳心颗粒（无蔗糖，每袋5 g由山东步长制药有限公司提供；人参皂苷Rg1（批号110703-201529）、人参皂苷Rb1（批号110704-201424）、人参皂苷Rd（批号111818-201302）标准品由中国药品生物制品检定所提供，纯度为95%；三七皂苷R1（批号AB160N）、党参炔苷（批号AB323L）标准品由一方科技公司提供，纯度为98%；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2　实验方法

2.1色谱条件色谱柱AmethystC18（4.6mm×250mm，4 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0～14 min，22%～30%A；14～35 min，30%～38%A；35～45 min，38%～38%A；45～47 min，38%～95%A；47～62 min，95%～95%A；62～65 min，95%～22%A）；流速1 mL/min；检测波长210 nm；柱温27℃。

2.2对照品溶液的制备取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd和党参炔苷适量，精密称定，加甲醇配制成每1mL含有三七皂苷R10.247mg、人参皂苷Rg10.422 mg、党参炔苷0.042 mg、人参皂苷Rb10.847 mg和人参皂苷Rd 0.255 mg的混合溶液，即得。

*基金项目：科技部国际国家合作专项（2013DFA31620）。

作者简介：南国（1988-），男，硕士研究生，主要从事中药分析工作。

通讯作者：吴红华，E-mail：wuhonghua2003@163.com。

2.3供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水饱和的正丁醇50 mL，密塞，称定质量，浸泡12 h，超声处理（功率300 W，频率40 kHz）1 h，放冷，再称定质量，用水饱和的正丁醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4专属性实验按处方中药味的比例，分别去除三七与党参，制成缺三七与党参的阴性样品，按“2.3”项下方法制备阴性对照溶液测定，结果在三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd与党参炔苷相同保留时间处未显明显色谱峰，故认为无干扰，见图1。

2.5线性关系考察将混合对照品溶液稀释0、2、4、8、16、32倍，分别注入液相色谱仪，分别计算同一保留时间下的峰面积，以浓度X为横坐标，以峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线。回归方程：三七皂苷R1：Y=984.18X-0.546 3，r=0.999 9，对照品在8～247 mg/L线性关系良好；人参皂苷Rg1：Y=1 298.9X+6.829 2，r=0.999 9，对照品在14～422 mg/L线性关系良好；党参炔苷：Y=38 187X-16.383，r=0.999 9，对照品在1.5～42 mg/L线性关系良好；人参皂苷Rb1：Y=441.49X-1.838 8，r=0.999 9，对照品在26.5～847 mg/L线性关系良好；人参皂苷Rd：Y=1009.8X+1.3961，r=0.9996，对照品在8～255 mg/L线性关系良好。

2.6精密度实验精密吸取同一供试品溶液（批号1412042），进样10 μL，重复进样6次，测定峰面积。三七皂苷R1的RSD=1.61%，人参皂苷Rg1的RSD= 0.32%，党参炔苷的RSD=1.41%，人参皂苷Rb1的RSD=0.60%，人参皂苷Rd的RSD=1.37%，表明仪器精密度良好。

2.7稳定性实验精密吸取同一供试品溶液（批号1412042），在室温下保存，分别于0、1、2、4、8、12、24、48 h的时间间隔，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。三七皂苷R1的RSD=1.56%，人参皂苷Rg1的RSD=0.46%，党参炔苷的RSD=0.94%，人参皂苷Rb1的RSD=0.82%，人参皂苷Rd的RSD= 1.21%，表明供试品溶液在48 h内基本稳定。

2.8重现性实验按前述供试品溶液制备方法制备，对同一批样品（批号1412042）取6份进行测定。三七皂苷R1的RSD=1.06%，人参皂苷Rg1的RSD= 1.34%，党参炔苷的RSD=0.54%，人参皂苷Rb1的RSD=1.10%，人参皂苷Rd的RSD=1.67%，表明方法的重现性良好。

图1　对照品（A）、样品（B）、缺三七阴性样品（C）和缺党参阴性样品（D）HPLC图Fig.1　The HPLC chromatograms of the chemical reference substances（A），samples（B），negative samples of Panax notoginseng（C）and Codouopsis pilosula（D）

2.9加样回收率实验取已知含量的稳心颗粒样品（批号1412042，三七皂苷R10.829 7 mg/g，人参皂苷Rg13.307 2 mg/g，党参炔苷0.089 7 mg/g人参皂苷Rb15.464 3 mg/g，人参皂苷Rd 0.787 4 mg/g）约0.5 g，精密称定6份，加入与样品中各成分含有量相当的对照品的溶液，按“2.3”项下方法制备供试溶液，依法测定峰面积并计算回收率。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd与党参炔苷的回收率RSD分别为2.74%、1.85%、1.94%、1.96%与2.49%，表明本测定方法的回收率良好。

2.10样品测定按上述色谱条件对6批样品进行测定，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd与党参炔苷的含量测定结果，见表1。

表1样品测定结果Tab.1　Sample determination resultsmg/g

3　讨论

本实验参照2015版《中国药典》方法，为最大限度防止定量成分损失，精简实验方法，将药典关于稳心颗粒的定量方法改进为“2.3”项下供试品制备方法。进而确定稳心颗粒的定量成分：三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd与党参炔苷。以上4类皂苷成分归属于三七药材［9］，党参炔苷为党参中的化学成分［10］。据文献报道，三七可以通过缩短钙通道的开放时间，延长关闭时间，从而促进心律失常的恢复［11］。党参提取物能在不增加心率的情况下提高心排血量，增加脑、内脏和下肢的血液量以及循环量［12］。党参炔苷具有抗肿瘤、抗菌、抗炎、镇静、降压作用，还能调节前列腺素代谢，亦可作为质量控制的指标性成分［13］。本实验方法简便易操作，稳定性良好，为稳心颗粒的后续研究奠定了良好的基础。

［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药曲（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2015.

［2］徐莺，杨青，朱海燕，等.稳心颗粒治疗心血管疾病研究进展［J］.中国中医药信息杂志，2011，18（12）:100-102.

［3］郭继鸿.抗心律失常中药的应用优势［J］.中国循证心血管医学杂志，2010，2（4）:198-201.

［4］崔长琮.稳心颗粒对家兔左心室内、外膜电生理特性的影响［J］.世界中医药，2007，2（5）:304-305.

［5］桑旭，张明.步长稳心颗粒治疗心律失常研究及应用进展概述［J］.辽宁中医药大学学报，2010，12（10）:208-210.

［6］郭继鸿，崔长琮.抗心律失常中西药与离子通道［M］.北京:人民卫生出版社，2008:130-132.

［7］孟令飞.步长稳心颗粒治疗室性早搏疗效观察［D］.吉林:吉林大学，2013.

［8］陆永平，郭继鸿.稳心颗粒治疗心律失常机制探讨［J］.光明中医杂志，2009，24（10）:1987-1988.

［9］江刘平，焦林如.三七总皂苷的药用生物学活性研究进展［J］.氨基酸和生物资源杂志，2013，35（3）:17-21.

［10］贺庆，朱恩圆，王峥涛，等.党参中党参炔苷的HPLC分析［J］.中国药学杂志，2005，40（1）:56-57.

［11］何芳.稳心颗粒抗心律失常作用研究进展［J］.人民军医，2014，57（8）:896-897.

［12］李晓峰.党参的化学成分及药理作用研究概况［J］.中国乡村医药杂志，2014，12（21）：83-84.

［13］宋丹，王峥涛，李龙云，等.党参炔苷对胃溃疡模型大鼠胃黏膜损伤保护作用的研究［J］.中国中医急症杂志，2008，17（7）:963-964，968.

（本文编辑：高杉，滕晓东）

Determination of Notoginsenoside R1，Ginsenoside Rg1，Rb1，Rd and Lobetyolin in Wenxin Keli by HPLC

NAN Guo1，2，ZHANG Peng1，2，WANG Meng1，2，WANG Yue-fei1，2，ZHU Yan1，2，WU Hong-hua1，2
（1.Tianjin State Key Laboratory of Modern Chinese Medicine，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Research and Development Center of Traditional Chinese Medicine，Tianjin International Joint Academy of Biotechnology and Medicine，Tianjin 300457，China）

［Objective］To establish a HPLC method for simulataneous determination of Notoginsenoside R1（1），Ginsenoside Rg1（2），lobetyolin（3），Ginsenoside Rb1（4），Ginsenoside Rd（5）in Wenxin Keli by HPLC.［Methods］The HPLC was conducted on Amethyst C18column（4.6 mm×250 mm，4 μm）with acetonitrile-water solution as themobile phase.The detection wavelength was 210 nm，and flow rate was 1 mL/min.［Results］Linearity of each standard was established within the concentration range of 8～247 mg/L for 1，14～422 mg/L for 2，1.5～42 mg/L for 3，26.5～847 mg/L for 4 and 8～255 mg/L for 5.The average recovery（n=6）of the compound 1-5 was 102.69%with RSD of 2.74%，98.72%with RSD of 1.85%，97.69%with RSD of 1.94%，102.11%with RSD of 1.96%，99.66%with RSD of 2.49% respectively.［Conclusion］The treatment of samples was stable and reliable.The method can be used for determination of notoginsenoside R1，lobetyolin，ginsenoside Rg1，Rb1and Rd in Wenxin Keli.

Wenxin Keli；HPLC；Notoginsenoside R1；Ginsenoside Rg1；Lobetyolin Ginseno-side Rb1；Ginsenoside Rd

R284.2

A

1672-1519（2016）07-0434-03

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.07.13

2016-01-12）