透骨消痛胶囊中巴戟天的药代动力学

2016-08-10范哲贤李孝栋福建中医药大学药学院福建福州350122

福建中医药 2016年3期

范哲贤，杨　　霖，李孝栋（福建中医药大学药学院，福建福州 350122）

透骨消痛胶囊中巴戟天的药代动力学

范哲贤，杨霖，李孝栋
（福建中医药大学药学院，福建福州 350122）

目的研究透骨消痛胶囊中巴戟天的药代动力学。方法采用高效液相色谱法，考察药代动力学参数，得去乙酰基车叶草苷酸的回归方程。结果线性关系良好，精密度高，提取回收率、符合生物样本分析的要求。结论高效液相色谱法可作为研究巴戟天中去乙酰基车叶草苷酸的有效工具。

透骨消痛胶囊；去乙酰基车叶草苷酸；药代动力学；高效液相色谱法

膝骨性关节炎（knee osteoarthritis，KOA），是一种以关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征的慢性关节病，随着我国进入老龄化社会，其发病率有增加的趋势。透骨消痛胶囊是刘献祥教授的经验方［1-2］，为福建中医药大学附属第二人民医院的院内制剂，具有补肾柔肝、活血祛风的作用。前期研究［3-5］发现，该胶囊用于KOA疗效较好。它以巴戟天为君药，具有抗肿瘤、强壮骨骼、抗疲劳、抗炎镇痛、补血、促进造血干细胞增殖和分化等作用［6-8］。去乙酰基车叶草苷酸是巴戟天环烯醚萜苷类成分之一，具有较强的抗炎、镇痛作用，为巴戟天祛风湿的物质基础成分［9-11］。本实验采用HPLC法研究巴戟天在大鼠血液中的代谢和分布，为透骨消痛胶囊的作用机制研究提供实验依据。

1材料

1.1仪器LC-20AT型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；AR-2140十万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；FA2004N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；VXH-3型微型旋涡混合器（上海跃进医疗器械厂）；TDL80-2B型高速离心机、TDL-4型低速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；采血管（江苏康健医疗用品有限公司，批号：120101）。

1.2试药透骨消痛胶囊（福建中医药大学附属第二人民医院院内制剂，批号：20141017）；去乙酰基车叶草苷酸对照品（上海将来实业有限公司，批号：JL14022530）；甲醇（国药集团化学试剂有限公司，色谱纯，批号：20140323103）；其它试剂均为分析纯。

1.3动物清洁级健康雄性SD大鼠，体质量（250± 10）g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号：SCXK（沪）2012-0002。

2透骨消痛胶囊灌胃溶液配制

称取透骨消痛胶囊内容物3.7 g置于100 mL瓶中，加纯化水超声，使内容物形成均匀的混悬状态，用纯化水定容，摇匀，即得相当于成人每日临床剂量的药物溶液。

3给药方法与血样采集

取大鼠60只，按体质量随机分为10组，每组6只。1组灌胃生理盐水，其余9组灌胃透骨消痛胶囊内容物溶液，按10 mg/kg剂量灌胃给药，在给药后30、45 min，1、2、4、6、8、10、24 h，通过眼眶采血2.5 mL，置于含乙二胺四乙酸的采血管中，3 800 r/min离心10 min，吸取上清液血浆，-20℃保存备用。

4高效液相色谱法

4.1色谱条件色谱柱：Vision HT C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；去乙酰基车叶草苷酸流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（5∶95）；检测波长：237 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：25℃。

4.2血浆样品预处理取血浆样品100 μL置1.5 mL具塞塑料离心管中，加甲醇200 μL，涡旋2 min混匀，14 000 r/min离心 10 min，取上清液作为HPLC检测样品，进样10 μL。

4.3线性关系精密称取去乙酰基车叶草苷酸对照品2.09 mg，置10 mL瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得去乙酰基车叶草苷酸209 μg/mL的对照品储备液。用甲醇梯度稀释，得去乙酰基车叶草苷酸浓度分别为 4.18、20.9、41.8、83.6、104.5、209.0 μg/mL的对照品溶液。取大鼠空白血浆100 μL，加入上述系列对照品溶液200 μL，按4.2项操作，以血浆样品质量浓度（C）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标作图，得去乙酰基车叶草苷酸的回归方程：

Y＝19166C＋11125r＝0.9995

结果表明，混合药物总质量浓度在（2.79～139.33）μg/mL，线性关系良好。4.4方法专属性取大鼠空白血浆100 μL，按4.2项操作。将浓度为41.8 μg/mL的去乙酰基车叶草苷酸对照品溶液加入空白血浆中，同法操作。取受试大鼠给药后收集的血浆样品，同法操作，结果见图1～图3。结果表明大鼠血浆中的内源性物质不干扰去乙酰基车叶草苷酸成分的测定。

4.5精密度实验制备去乙酰基车叶草苷酸低、中、高3种浓度（5.57、27.87、69.67 μg/mL）的样品，每个浓度平行做5份，按4.2项操作，测定日内精密度和日间精密度，结果低、中、高3种浓度去乙酰基车叶草苷酸的日内精密度和日间精密度RSD分别为0.09%、0.53%、1.13%和3.62%、1.48%、1.03%。

4.6提取回收率和方法回收率实验制备低、中、高3种浓度的样品，按4.2项操作，测定各成分的峰面积，并与相应浓度对照品甲醇溶液测得的峰面积相比，计算样品的提取回收率，每个浓度平行做5份，结果低、中、高3种浓度水平去乙酰基车叶草苷酸的萃取回收率分别为113.24%（RSD为3.65%）、98.42%（RSD为3.65%）、109.95%（RSD为8.57%）。将各个样品测得的峰面积代入回归方程计算浓度，所得浓度与实际浓度的比值即为方法回收率，结果低、中、高3种浓度水平去乙酰基车叶草苷酸的方法回收率分别为105.36%（RSD为3.58%）、109.59% （RSD为1.67%）、95.05%（RSD为4.39%）。

4.7样品稳定性考察制备低、中、高3种浓度的样品，按4.2项操作，于室温下放置3 d，每日吸取10 μL样品测定1次，计算其3天的稳定性，结果低、中、高3种浓度水平去乙酰基车叶草苷酸的RSD分别为1.32%、1.59%、0.49%。

4.8药代动力学参数大鼠灌胃口服透骨消痛胶囊后不同时间点血浆中去乙酰基车叶草苷酸平均血药浓度-时间曲线见图4。结合DAS2.0软件确定房室模型，计算去乙酰基车叶草苷酸在大鼠体内各药代动力学参数，结果表明，大鼠口服透骨消痛胶囊后其药时曲线符合单室模型，药动学参数见表1。

表1　　去乙酰基车叶草苷酸的药代动力学参数（±s）

药动学参数吸收速率常数（Ka）消除半衰期（T1/2）达峰时间（Tmax）最大血药浓度（Cmax）血药浓度-时间曲线下面积（AUC0～24）清除率（CL/F）表观分布容积（V/F）单位h-1 h h μg/L mg·h/L参数值0.89±0.02 1.73±0.22 2.09±0.03 2.27±0.45 10.64±0.69 L/（kg·h）L/kg 1.29±0.21 3.86±0.39

由表1 Ka＝0.89/h、T1/2＝1.73 h可知，吸收入血快，分布迅速。因Tmax＝2.09 h，说明经过2.09 h达到最大血药浓度Cmax＝2.27 μg/mL，T1/2＝1.73 h，CL/F＝1.29 L/（kg·h）。所以，药物消除较慢，总浓度维持时间较长。