氟尿嘧啶联合姜黄素纳米剂型抑制肝癌细胞的研究*

董伟，刘福晨，倪俊声，李鹏鹏，郭兴刚，刘辉

（第二军医大学东方肝胆外科医院 肝外三科，上海 200438）

氟尿嘧啶联合姜黄素纳米剂型抑制肝癌细胞的研究*

董伟，刘福晨，倪俊声，李鹏鹏，郭兴刚，刘辉

（第二军医大学东方肝胆外科医院 肝外三科，上海 200438）

目的探究纳米层状双氢氧化物（LDH）共载氟尿嘧啶（Fu）姜黄素（Cur）混合剂型对肝癌细胞的抑制作用。方法通过共沉淀法合成纳米LDH混合剂型，并对其进行详细表征，如电镜（TEM）、X射线衍射（XRD）及动态光散射技术（DLS）检测，细胞计数试剂盒（CCK8）测定Fu组、Fu+Cur组及纳米剂型组对7721、Hep G2和LM3细胞的增殖抑制作用，同时凋亡试剂盒检测各组对7721细胞的凋亡效应，Western blot检测各组对细胞抗凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达及下游Caspase的活化情况。结果合成的纳米LDH混合剂型具有较好的均一性，DLS检测提示其粒径约为400nm，XRD提示Fu及Cur通过水平方式插入LDH层间；CCK8结果提示，相对于单纯的Fu组、Fu+Cur组和LDH-Fu组，LDH-Fu-Cur组对LM3、Hep G2和7721细胞具有更强的增殖抑制作用（P＜0.05）。相对于单纯的Fu组、Fu+Cur组和LDH-Fu组，LDH-Fu-Cur组对LM3、Hep G2和7721细胞具有更强的促凋亡效应作用（P＜0.05），35μg/ml浓度的Fu纳米混合剂型组凋亡率高达（87.0±4.7）%，而单纯Fu仅为（23.0±2.3）%；Western blot检测结果显示，纳米混合剂型能够下调7721细胞Bcl-2水平。结论纳米LDH混合剂型具有良好的抗肿瘤效应，其机制可能为下调肿瘤抗凋亡基因Bcl-2从而引起下游Caspase活化。

层状双氢氧化物；肝细胞癌；氟尿嘧啶；姜黄素；细胞凋亡

原发性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）位于肿瘤发病率的第5位，其死亡率在肿瘤中居第3位［1］。早期HCC患者的最佳治疗措施是手术切除，然而HCC起病隐匿，确诊时多属晚期，已丧失手术机会。有数据显示，早期进行手术切除的肿瘤患者，其术后也具有较高的复发率［2］，因此临床上化学治疗对于上述患者具有重要的治疗意义。

单一化疗药物，如氟尿嘧啶（Fluorouracil，Fu），存在治疗窗口窄、毒副作用大等缺点。临床上常采取的多种化疗药物联用治疗也存在不足，如多种药物之间可能存在相互作用，多种药物副作用的叠加效应等［3-5］。近年来，传统中药的抑制肿瘤作用越来越受到关注，中药辅助临床常用的化疗药物不仅存在经济上的优势，还因中药的毒副作用小而具有相对安全性。姜黄素（Curcumin，Cur）是来源于食物的天然药物，具有廉价、安全等诸多优点。研究表明，大剂量的姜黄素对于人体没有明显的毒副作用，基础实验也证实姜黄素具有抗炎、抗氧化及抗肿瘤等多重作用［6］。同时文献报道显示，联合化疗药物与姜黄素能够抑制肿瘤生长［7］。但是姜黄素具有水溶性差、体内代谢快等不足，如何充分发挥姜黄素的强大功能值得探究。

纳米技术的发展为肿瘤药物剂型提供新方向，纳米技术具有诸多优点：纳米载体的pH敏感性、温度敏感性，以及修饰的不同配体可以实现主动及被动靶向至肿瘤部位，基于纳米技术的联合用药不仅局限于两种药物机械混合使用，还可以实现化疗药物的时序性、协同性作用［8-9］。层状双氢氧化物（layered double hydroxide，LDH）是一类具有双层板状结构的阴离子型黏土，因具有无毒、高载药量和pH敏感性等优点，而受到广泛关注。LDH板间带负电荷，可用于阴离子物质交换，可附载电离为阴离子的药物及小分子的核酸，如LI等［10］采用LDH附载尿嘧啶和siRNA可用于肿瘤的药物、基因联合疗法，为逆转肿瘤耐药提供新思路。

基于文献报道以及前期的实验结果，本实验利用LDH附载氟尿嘧啶、姜黄素纳米混合剂型，并对其进行一系列的表征，采用7721、LM3和Hep G2细胞为模型，研究纳米剂型对肝癌多细胞系的抑制作用，并对其作用机制进行初步探讨。

1　材料与方法

1.1实验材料

六水硝酸镁［Mg（NO3）2·6H2O，分析纯］、九水硝酸铝［Al（NO3）3·9H2O，分析纯］、氢氧化钠（NaOH，分析纯）及二甲基亚砜［（dimethyl sulfoxide，DMSO），分析纯］购自上海化学试剂公司，高纯氮购自上海比欧西气体工业有限公司，1640培养液、小牛血清、胰酶-乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）、活细胞计数法试剂盒（cell counting kit 8，CCK8）及凋亡试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司，氟尿嘧啶购自大连美仑生物有限公司，姜黄素购自阿拉丁试剂，7721、LM3、Hep G2和LO2细胞株购自中科院上海细胞库，同济大学生命科学院冷冻保存，所有抗体均购自美国Cell Signaling Technology （CST）公司。

1.2纳米材料的合成

LDH的合成依据实验室前期基础。称取NaOH 0.272 g溶于40 ml除二氧化碳CO2去离子水，于三口烧瓶中氮气氛围下充分搅拌5 min，10 ml溶解0.796 g Mg（NO3）2·6H2O和0.372 g Al（NO3）3·9H2O快速加入三口烧瓶中，60℃水浴快速搅拌，1 h后离心收集，除二氧化碳CO2去离子水清洗3遍。用40ml 0.15 mol NaOH溶液，其中溶解氟尿嘧啶或氟尿嘧啶加姜黄素，重悬上述离心收集的浆液。三口烧瓶60℃水浴快速搅拌1 h后，除CO2去离子水清洗3遍，70 ml除CO2去离子水重悬，放置于水热釜中100℃、16 h后室温冷却，去离子水清洗3次即得LDH-Fu（LF）和LDH-Fu-Cur（LFC）。

1.3纳米材料的表征

通过电镜观察LF和LFC的形貌，动态激光散射仪测定其粒径，X射线衍射观察其晶型结构。紫外分光光度测定纳米材料的载药量。分别测定氟尿嘧啶在265 nm处及姜黄素在425 nm处的药物标准曲线，根据标准曲线和待测样品紫外吸收光密度（optical density，OD）值计算其相对应的浓度。

1.4细胞培养

7721、LM3、Hep G2及LO2细胞培养于含10%小牛血清及1%双抗的1640培养基中，37℃、5%CO2培养，细胞的传代消化选用含EDTA的胰酶。

1.5增殖抑制试验

7721、LM3和Hep G2细胞消化后重悬，接种于96孔板，接种数目约为每孔5 000个。待细胞增殖至约板底50%时，加入不同Fu浓度的Fu、LF、LFC及Fu+Cur组，每孔100μl（Fu浓度分别为15、20、25、30和35μg/mL）。37℃、5%CO2细胞培养箱内培养24 h，吸去上清液培养基，用磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffer saline，PBS）清洗细胞2次后加入含10% CCK8的新鲜培养基。37℃、5%CO2环境下培养，孵育适当时间，用酶标仪450nm测定OD值。根据对照组计算细胞存活率，每组3个复孔。LDH安全性评价采取不同浓度的LDH悬液作用于正常LO2肝脏细胞，步骤同上。

1.6凋亡实验

7721细胞消化后重悬，接种于12孔板，计数约为10万个/孔。待细胞长至板底约60%时，换1 ml新鲜培养基，设分别包含不同Fu浓度的Fu、LF、LFC 及Fu+Cur组（Fu浓度分别为25、30和35μg/ml，LDH采取最高LFC对应的LDH浓度评价LDH的促凋亡效应），24 h后消化收集细胞，用无菌PBS清洗细胞2次，细胞凋亡双染试剂盒膜联蛋白-别藻蓝素/7-氨基放线菌素D（annexin V-allophycocyanin/ 7-amino-actinomycinD，AnnexinVAPC/7-AAD）固定液500μl重悬，依次加入5μl APC和5μl 7-AAD，于流式细胞仪检测。

1.7Western blot检测

7721细胞消化离心后接种于6孔板，约15万个/孔。分别加入LDH、Fu、LF、LFC及Fu+Cur（各组Fu为25μg/ml，LDH为LFC相对应的LDH浓度），蛋白提取试剂盒提取全蛋白后采取二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）法定量，分组点样于10%聚丙烯酰胺凝胶进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）电泳，聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）转膜后加封闭液室温封闭1 h，分别加入Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）一抗4℃孵育过夜后加入二抗，室温轻摇1 h，加入增强化学发光法（enhanced chemiluminescence，ECL）发光剂，置于凝胶成像仪中观察结果，并拍照记录。

1.8统计学方法

采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，双因素多水平方差分析，两两比较用SNK（Student-Newman-Keuls）法，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1纳米材料的表征

根据实验室前期基础，成功制备LF和LFC，结果显示，LF具有较为均一的正六面体形貌（见图1A），而LFC出现显著的形貌变化（见图1B）；XRD检测用于评估氟尿嘧啶和姜黄素载入LDH的方式，各组材料均出现003和006特征峰（见图1C）；动态激光散射测定LF平均半径为（94.0±5.5）nm，LFC平均半径为（200.0±6.4）nm（见图1D），提示LDH具有良好的晶体结构。LF的2θ角（003）发生在11.28°，晶面间距d为0.78 nm；LFC的2θ角（003）发生在10.64°，晶面间距d为0.84 nm，减去LDH板层的0.48 nm，剩余间距均非常接近氟尿嘧啶和姜黄素的层面高度，分别为0.34和0.32 nm，提示两者是水平被插入LDH层间。另外结果还显示，LFC特征峰显著变弱变宽，提示姜黄素晶体结构差，有利于药物的释放；LF中Fu的载药量为（19.56±0.32）%，LFC 中Fu和Cur的载药量分别为（18.32±0.27）%和（15.64±0.25）%。

2.2肝癌细胞的增殖抑制试验

增殖抑制结果显示，各浓度下单纯的LDH对正常肝脏细胞LO2的细胞存活率＞80%，提示LDH生物安全性良好（见图2A）。相对于单纯的Fu组，纳米剂型对LM3、Hep G2和7721不同肝癌细胞系均有不同程度的增殖抑制效应（见图2B～D），从柱状图可以看出LFC各浓度下细胞存活率均小于Fu组，且在最高浓度下（Fu浓度为35μg/ml），LFC组7721细胞的存活率＜10%（见图2D），LF及LFC组细胞存活率随着药物浓度的增加而下降。采取析因设计资料的方差分析比较浓度（检验值和P值为F1，P1）、组别（检验值和P值为F2，P2）对LM3、Hep G2、7721细胞存活率差异的影响，结果显示，在给定的5%显著性水平下，组别和浓度对LM3（F1=732.12，P1=0.000；P2=460.09，P2=0.000）、Hep G2（F1=604.87，P1=0.000；F2=1487.48，P2=0.000）和7721（F1=3401.73，P1=0.000；F2=4497.85，P2=0.000）细胞存活率的抑制作用比较，差异有统计学意义，且组别与浓度间存在交差效应（LM3：F=119.75，P=0.000；Hep G2：F=110.61，P= 0.000；7721：F=651.89，P=0.000）。各浓度间LM3、Hep G2和7721细胞存活率比较，差异有统计学意义。SNK多重比较结果显示，随着药物浓度的提高，细胞致死率明显增加，35μg/ml组药物处理后，细胞存活率低于其他组；SNK多重比较分别对LM3、Hep G2和7721细胞存活率差异进行组间两两比较，结果提示，3种细胞中Fu+Cur与Fu、LF与Fu、LFC与Fu、LF与Fu+Cur、LFC与Fu+Cur、LFC与LF两组间细胞存活率比较，差异具有统计学意义（P＜0.05），说明Fu+Cur、LF、LFC较Fu均能降低LM3、Hep G2 及7721细胞存活率，而LFC组最强，即LFC组较其他组对于LM3、Hep G2和7721细胞具有明显的增殖抑制作用。笔者采取7721细胞进行下一步实验。

图1LF及LFC的表征

2.3凋亡实验

从流式凋亡结果图可以看出，最高LFC浓度组的LDH浓度对于7721细胞的诱导凋亡率低，仅约为9%，提示LDH生物安全性良好。LFC组各浓度下的细胞凋亡率均高于单纯Fu组，Fu浓度为35μg/ml时Fu、Fu+Cur、LF及LFC对应的凋亡率分别为（23.5±2.3）%、（40.0±3.5）%、（74.0±2.5）%和（87.0±4.7）%（见图3）。采取析因设计资料的方差分析比较浓度、组别对7721细胞凋亡率差异的影响，结果提示，不同处理浓度对7721细胞凋亡率比较差异有统计学意义（F=18.27，P=0.000），说明各浓度药物处理后诱导细胞的凋亡率存在差异，经SNK法比较，得出35μg/ml组促进细胞凋亡率最明显（P＜0.05）。不同组别处理7721细胞后细胞凋亡率比较差异有统计学意义（F=52.56，P=0.000），提示各组间细胞的凋亡率比较差异有统计学意义，组间和浓度间无交差效应。进一步采用SNK法对7721细胞进行组间两两比较，结果提示，Fu+Cur与Fu、LF 与Fu、LFC与Fu、LF与Fu+Cur、LFC与Fu+Cur、LFC 与LF两组间7721细胞的凋亡率比较，差异有统计学

意义（P＜0.05），两组间7721细胞凋亡率比较差异有统计学意义，说明Fu+Cur、LF、LFC较Fu都能促进7721细胞凋亡，而LFC组促凋亡率最高，即LFC较其他组对于7721细胞具有明显的促凋亡效应。

图2　细胞增殖抑制试验

图3　7721细胞凋亡实验

2.4Western Blot检测

Bcl-2是调节细胞凋亡的重要基因，在细胞发生损伤时，可以使细胞逃逸死亡，下调Bcl-2可以引起下游Caspase活化，有效诱导细胞凋亡。Western blot检测结果显示，LFC组Bcl-2较其他组明显下调，同时Caspase-3、Caspase-9较其他组明显上调（见图4），提示LFC具有较强的促凋亡效应。

图4　Western blot检测

3　讨论

肝癌起病隐匿且恶性程度高，发现多属晚期，化学药物在肝癌治疗中必不可少，然而化疗药物的毒副作用常导致剂量降低或患者放弃治疗，临床上常采取的多种化疗药物联合应用也存在诸多不确定因素［3，5］。传统中药具有较强的抗肿瘤效果，且安全性高，却存在生物利用度低等缺陷，本实验成功制备LDH附载氟尿嘧啶和姜黄素的混合剂型，改善姜黄素水溶性差、生物利用度低等缺陷，充分发挥其抗肿瘤效果。

LDH是一类具有pH敏感性的双层片状结构的纳米载体，因其具有低毒、高细胞摄取率及高载药量而被广泛关注［11］，与本实验结果相一致。实验中LFC 中Fu和Cur的载药量分别高达18.32%和15.64%，同时250μg/ml LDH对于正常肝脏LO2细胞没有明显的抑制作用，显示其优越的生物安全性。课题组前期报道显示，LDH很容易被MDDCs细胞摄取，归因于其Zeta电位为正电，容易被带负电的肿瘤细胞获取［12］。

有文献报道，联合应用氟尿嘧啶和姜黄素能够实现更好地抗肿瘤效果［13］。而本实验中，单纯的氟尿嘧啶及氟尿嘧啶和姜黄素的机械混合剂型对于7721细胞无明显的增殖抑制效果，而LF和LFC均有明显的增殖抑制效果，且LFC明显强于LF，可能归结于LDH的特殊作用。有文献报道指出，纳米材料能更大程度的被肿瘤细胞摄取，而纳米载体本身具有缓释性能，同时不易被细胞泵出，从而实现药物在肿瘤内的聚集，达到更好的抗肿瘤效应［14］。

凋亡结果提示，低浓度的氟尿嘧啶、氟尿嘧啶和姜黄素机械混合剂型均表现出有限的诱导细胞凋亡率。而引入LDH后的LF及LFC均对照组有明显的促凋亡效果，且LFC明显强于LF，这不仅从另一方面显示LDH的特殊作用，还可能与姜黄素相关。姜黄素是一类植物提取的天然性药物，具有多重药理活性［15］。文献报道显示，姜黄素能够显著下调Bcl-2水平，而Bcl-2是调节细胞凋亡的重要基因，在细胞发生损伤时，可以使细胞逃逸死亡，下调Bcl-2可以有效诱导细胞凋亡［16-18］。在本实验中，Western Blot检测结果显示，LFC能够显著下调Bcl-2，从而激活Caspase信号通路，进而促进细胞凋亡。

综上所述，笔者合成共载氟尿嘧啶及姜黄素的层状双氢氧化物纳米剂型，增殖抑制及凋亡结果显示其优越的抗肝癌效果，其机制可能与LDH纳米材料的特殊性能及姜黄素的多重药理活性相关，其重要机制可能是下调Bcl-2水平促进细胞凋亡。层状双氢氧化物共载氟尿嘧啶姜黄素实现传统中药的老药新用及中、西药的联用，为肝癌的化学治疗提供新思路。

［1］JEMAL A，SIEGEL R，WARD E，et al.Cancer statistics［J］.CA Cancer J Clin，2009，59（4）：225-249.

［2］MANCUSO A，PERRICONE G.Hepatocellular carcinoma and liver transplantation：state of the art［J］.Journal of clinical and translational hepatology，2014，2（3）：176-181.

［3］SHAKADO S，IWATA K，TSUCHIYA N，et al.Pilot study of hepatic arterial infusion chemotherapy with Interferon-beta and 5-fluorouracil：a new chemotherapy for patients with advanced hepatocellular carcinoma［J］.Hepato-gastroenterology，2014，61（131）：557-562.

［4］SONG M J，BAE S H，CHUN H J，et al.A randomized study of cisplatin and 5-Fu hepatic arterial infusion chemotherapy with or without adriamycin for advanced hepatocellular carcinoma［J］. Cancer Chemotherapy and Pharmacology，2015，75（4）：739-746.

［5］乔彬彬，虞希祥，王舒婷，等.TACE术中灌注氟尿嘧啶、奥沙利铂及吡柔比星治疗原发性肝癌的临床效果分析 ［J］.介入放射学杂志，2015，24（4）：349-353.

［6］HEGER M，VAN GOLEN R F，BROEKGAARDEN M，et al. The molecular basis for the pharmacokinetics and pharmacodynamics of curcumin and its metabolites in relation to cancer［J］. Pharmacological Reviews，2014，66（1）：222-307.

［7］张莉鑫.姜黄素联用5-Fu对人结肠癌细胞凋亡的影响［J］.中国现代医学杂志，2010，20（15）：2298-2301.

［8］YOKOYAMA M.Polymeric micelles as drug carriers：their lights and shadows［J］.Journal of Drug Targeting，2014，22（7）：576-583. ［9］ZHU Y，WU Y，ZHANG H，et al.Enhanced anti-metastatic activity of etoposide using layered double hydroxide nano particles［J］. Journal of Biomedical Nanotechnology，2015，11（12）：2158-2168.

［10］LI L，GU W，CHEN J，et al.Co-delivery of siRNAs and anti-cancer drugs using layered double hydroxide nanoparticles［J］. Biomaterials，2014，35（10）：3331-3339.

［11］RIAZ U，ASHRAF S M.Double layered hydroxides as potential anti-cancer drug delivery agents［J］.Mini Reviews in Medicinal Chemistry，2013，13（4）：522-529.

［12］WANG J，ZHU R，GAO B，et al.The enhanced immune response of hepatitis B virus DNA vaccine using SiO2 LDH nanoparticles as an adjuvant［J］.Biomaterials，2014，35（1）：466-478.

［13］SADZUKA Y，NAGAMINE M，TOYOOKA T，et al.Beneficial effects of curcumin on antitumor activity and adverse reactions of doxorubicin［J］.International Journal of Pharmaceutics，2012，432（1/2）：42-49.

［14］CHEN Y，CHEN H，SHI J.Inorganic nanoparticle-based drug codelivery nanosystems to overcome the multidrug resistance of cancer cells［J］.Molecular Pharmaceutics，2014，11（8）：2495-2510.

［15］刘红艳，王海燕，叶松，等.姜黄素药理作用及其机制研究进展［J］.中国现代医学杂志，2012，22（6）：48-51.

［16］董伟，刘辉.姜黄素抗肿瘤新剂型研究进展［J］.第二军医大学学报，2015，36（7）：771-775.

［17］YANG J，NING J，PENG L，et al.Effect of curcumin on Bcl-2 and Bax expression in nude mice prostate cancer［J］.International Journal of Clinical and Experimental Pathology，2015，8 （8）：9272-9278.

［18］WENG Q，FU L，CHEN G，et al.Design，synthesis，and anticancer evaluation of long-chain alkoxylated mono-carbonyl analogues of curcumin［J］.European Journal of Medicinal Chemistry，2015，103（20）：44-55.

（童颖丹 编辑）

Co-delivery of fluorouracil and curcumin by nano-layered double hydroxide for inhibition of hepatocellular carcinoma cellsin vitro*

Wei Dong，Fu-chen Liu，Jun-sheng Ni，Peng-peng Li，Xing-gang Guo，Hui Liu
（The Third Department of Hepatic Surgery，Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital，the Second Military Medical University，Shanghai 200438，China）

Objective To evaluate the effects of fluorouracil and curcumin co-loaded nano-layered double hydroxide（NLDH）on proliferation and apoptosis of hepatocellular carcinoma cell lines.Methods NLDH was synthesized by co-precipitation method.Detailed characterizations of NLDH such as its morphology，structure and particle size were performed by electron microscopy，X-ray diffraction（XRD）and dynamic light scattering technique（DLS）.The function of pure fluorouracil，fluorouracil and curcumin，fluorouracil loaded NLDH （LDH-Fu），fluorouracil and curcumin co-loaded NLDH（LDH-Fu-Cur）on cell viability of 7721，LM3 and Hep G2 cell lines was measured by CCK-8 kit.Meanwhile，apoptosis kit was applied to detect apoptosis of 7721 cells in the aforementioned groups.In order to explore the mechanism of apoptosis induced by fluorouracil and curcumin co-delivered NLDH，Western blot was used to detect the expression levels of apoptotic proteins such as Bcl-2，Caspase-3 and Caspase-9.Results NLDH，with a size of 400 nm，presented a good uniformity under electron microscope.XRD results indicated that fluorouracil and curcumin were horizontally inserted intothe interlayer of NLDH.CCK8 results indicated that LDH-Fu-Cur more efficiently inhibited the growth of 7721，LM3 and Hep G2 cell lines compared with pure fluorouracil，fluorouracil plus curcumin，and LDH-Fu （P＜0.05）.Similarly，LDH-Fu-Cur was more effective in promoting apoptosis than pure fluorouracil，fluorouracil plus curcumin，and LDH-Fu，as was evidenced by the apoptosis rate of LDH-Fu-Cur which was（87.0± 4.7）%with the fluorouracil concentration of 35 μg/ml while the apoptosis rate of pure fluorouracil was only （23.0±2.3）%with that concentration（P＜0.05）.Western blot results showed that NLDH could significantly down-regulate the Bcl-2 gene expression of 7721 cells and induce cell apoptosis by activating Caspase-3 and Caspase-9.Conclusions NLDH presents as a good carrier for anti-cancer drugs such as fluorouracil and curcumin and exhibits a potent anti-tumor effect，which make it a promising candicate for cancer therapy.

nano-layered double hydroxide；hepatocellular carcinoma；curcumin；fluorouracil；cell apoptosis

R735.7

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.09.004

1005-8982（2016）09-0016-07

2015-11-26
*

国家自然科学基金面上项目（No：NSFC81271694）；科技部国际合作专项（No：010S2012ZR0058、2011DFA32980）

刘辉，E-mail：happyehbh@163.com；Tel：021-81875524