黄连上清片与黄连上清丸中黄芩苷、栀子苷、欧前胡素等量性对比研究

曹恒涛申斌（安阳市食品药品检验所，河南 安阳 455000；安阳市妇幼保健院）

黄连上清片与黄连上清丸中黄芩苷、栀子苷、欧前胡素等量性对比研究

曹恒涛1申斌2
（1安阳市食品药品检验所，河南 安阳 455000；2安阳市妇幼保健院）

目的：比较黄连上清片、黄连上清丸的质量等量性。方法：通过测定样品中栀子苷、黄芩苷和欧前胡素的含量，比较片剂与丸剂中3种成分的含量差异。结果：黄连上清片3种成分的含量为4.15，1.056，0.072 mg/剂次；水丸为9.17，2.75，0.049 mg/剂次；蜜丸为5.49，3.79，0.026 mg/剂次。这3种成分之和分别为5.28，11.97，9.31 mg/剂次。结论：黄连上清丸与黄连上清片这3种成分的含量之间存在明显的不同，黄连上清片与黄连上清丸这3种成分之和也存在明显的差异，黄连上清片与黄连上清丸的质量不等量。

黄连上清片；黄连上清丸；栀子苷；黄芩苷；欧前胡素；对比研究

黄连上清丸与黄连上清片为临床常用中成药，均收载于《中国药典》2010年版［1]。两者处方相同，功效用法相同，唯剂型不同。两者因处方相同，同样的服用量时，其所含有效成分的含量也应相近方能保证功效相近。《中国药典》2010年版（一部）中规定了盐酸小檗碱的含量而对其他成分含量未进行测定。方中栀子功偏上焦，清热泻火，去肺胃实热，黄芩清热燥湿，泻火解毒，二者皆为君药；白芷解表散寒，祛风止痛，为臣药，其有效成分欧前胡素为其香豆素类代表成分。本文拟通过测定三者中的有效成分：栀子苷、黄芩苷和欧前胡素的含量，比较黄连上清丸与黄连上清片中3种成分含量差异，从而确定其功效是否一致，以达到改良处方或生产工艺，保证用药有效的目的。

1仪器与材料

1.1实验仪器

Waters e2695高效液相色谱仪（美国waters公司），MSA225-000-DU型电子天平（德国赛多利斯公司）。

1.2试剂与样品

栀子苷（批号：110749-201115，99.7%），欧前胡素（批号：110827-201109），黄芩苷（批号：110715-201117，91.7%），均为中国食品药品检定研究院提供。乙腈（色谱纯，J.T.Baker公司）。超纯水为Molecular纯水机制备。黄连上清片、黄连上清丸购于市场。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：WatersSymmetry C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈，水；检测器：waters 2998 PDA检测器，240 nm处检测栀子苷，300 nm处检测黄芩苷及欧前胡素；流速：1.0 mL/min；柱温：25℃。流动相梯度如表1。对照品图谱、样品图谱和阴性样品图谱见图1。

表1　　流动相梯度

图1　黄连上清片高效液相色谱图

2.2对照品溶液的制备

精密称取栀子苷、黄芩苷和欧前胡素，加甲醇配制成浓度分别为0.127 9 mg/mL及83.117，4.011 μg/mL的对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

取黄连上清片10片（水丸10 g），糖衣片除去糖衣，研细，精密称取2 g（水丸精密称取4 g）；或取重量差异项下大蜜丸，剪碎，精密称取4 g，加硅藻土4 g，研细。置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声提取30 min，放冷，用甲醇补足减失的质量，滤过，即得。

2.4阴性对照样品的制备

按处方制备缺黄芩、栀子、白芷的阴性对照样品，照“2.3”项下方法制得阴性样品溶液。

2.5线性关系的考察

取“2.2”中对照品溶液按“2.1”色谱条件分别进样 1，2，5，10，20，30和 40 μL并测定峰面积。以峰面积（Y，A）和进样量（X，μg）做标准曲线。结果表明，栀子苷在0.128～2.558 μg范围内线性关系良好，回归方程为：

Y=1 221 760.2X+30 384.2（r=0.999 6）；

黄芩苷在 0.083～ 3.325 μg范围内线性关系良好，回归方程为：

Y=3 450 113.5X-31 148.7（r=0.999 9）；

欧前胡素在0.004 01～ 0.160 44 μg范围内线性关系良好，回归方程为：

Y=4 711 175.81X-2 340.98（r=0.999 9）。

2.6精密度试验

取供试品溶液，连续进样6次，测定各成分的峰面积。结果栀子苷RSD为0.66%；黄芩苷RSD 为1.51%；欧前胡素RSD为1.15%。

2.7稳定性试验

取同一样品溶液，分别在0，2，5，12，24 h测定含量。栀子苷RSD为0.66%，黄芩苷RSD为1.51%，欧前胡素RSD为1.15%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8重复性试验

同一样品按“2.3”方法制备供试品溶液6份，按上述色谱条件测定。结果栀子苷含量的RSD为4.1%，黄芩苷含量的RSD为2.25%，欧前胡素含量的RSD为2.03%。

2.9加样回收率测定

取样品片剂30片，糖衣片除去糖衣，研细，精密称取0.45 g 6份。分别精密加入欧前胡素0.026 74 mg，黄芩苷0.415 584 mg，栀子苷1.023 2mg，称定质量，超声提取30 min，放冷，用甲醇补足减失的质量，滤过，进样，计算加样回收率。结果见表2。

2.10样品测定

取样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，并转换为每次服用量的含量（mg/剂次）。结果见表3。

3讨论

3.1因栀子苷在 300 nm处无紫外吸收而黄芩苷和欧前胡素在240 nm无紫外吸收，因此采用PDA检测器检测，并在不同的波长处进行测定并计算含量。

3.2大蜜丸因含蜂蜜而不能粉碎，且甲醇超声或加热回流并不能使大蜜丸在溶液中彻底分散。在大蜜丸中加入不等量的硅藻土研细后依法检测，发现不等量硅藻土并不会影响3种成分的含量。因此本文采用大蜜丸加硅藻土适量研细后再提取的方法来改进提取效率。

3.3中药复方制剂质量的不均一性仍然是影响其质量的首要问题，质量的不均一也是使得中药复方制剂的药效物质基础无法确切说明的重要原因之一［2]。刘睿［3]对中药注射剂的研究也指出，各个生产步骤的工艺条件不同，批间操作一致性差，导致中药注射剂质量难以保证均一稳定。为减少因工艺差异引起的误差，选用水丸作为比较。本文测定的3批水丸样品的栀子苷含量相差近4倍，黄芩苷相差近3倍，欧前胡素相差近8倍。分析这种差异可能的原因是原料药材的质量有差别，或者未按处方量投料。而11批样品中有两批蜜丸未检出欧前胡素，应当是投料时未投白芷，这与张少君等［4]的研究结论是一致的。因此要保证药品质量或者功效的均一性，原料药材的均一性和生产工艺的均一性缺一不可。

表2　　黄连上清片加样回收率测定结果

表3　样品含量测定结果　（mg/剂次）

3.4黄连上清丸、黄连上清片其处方、用法与功效相同，一次服用量时其有效成分含量应相当。对于药材的处理会使药材中的有效成分有所损失，因此依据生产工艺推测，有效成分的含量为水丸＞蜜丸 ＞ 片剂，而实验结果分别为 11.97，9.31，5.28 mg/剂次，证明了这一推论。

3.5黄连上清片的一次服用量的3个成分的总计为5.28 mg/剂次，而水丸为11.97 mg/剂次，蜜丸为9.31 mg/剂次，黄连上清片的3种待测成分与丸剂相应成分相差近2倍，说明两者的质量不等量，进而功效相差悬殊。因此欲使黄连上清片达到与黄连上清丸相同的功效，应当修改黄连上清片的服用量、处方或者生产工艺，使有效成分与黄连上清丸相当，才能保证用药的有效。

［1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S].北京：中国医药科技出版社，2010：1067-1068.

［2]唐显虹.不同厂家黄连上清片特征指纹图谱比较［J].中国实验方剂学杂志，2011，17（24）：67-71.

［3]刘睿.中药注射剂质量控制的研究进展［J].中国执业药师，2013，10（3）：37-42.

［4]张少君，车燕妮，苏秀娟，等.高效液相色谱法构建黄连上清丸指纹图谱［J].中国科技信息，2013，（19）：32-35.

Compartive Study on Quality Equivalence of Geniposide，Baicalin and Imperatorin in Huanglianshangqing Tablets and Huanglianshangqing Pills

Cao Hengtao1，Shen Bin2（1 Anyang City Institute of Food and Drug Control，Henan Anyang 455000，China；2 Anyang Maternal and Child Health Care Hospital）

Objective：To compare the quality equivalence of huanglianshangqing tablets and huanglianshangqing pills.Methods：The contents of geniposide，baicalin and imperatorin in huanglianshangqing tablets and pills were determined and compared.Results：The contents ofgeniposide，baicalin and imperatorin in huanglianshangqing tablets were 4.15，1.056 and 0.072 mg/dose while those in water pills were 9.17，2.75 and 0.049 mg/dose，those in honeyed pills were 5.49，3.79 and 0.026 mg/dose，and the sums of the three components were 5.28，11.97 and 9.31 mg/dose，respectively.Conclusion：The contents and sums of three components were significantly different in huanglianshangqing tablets and pills，indicating that the qualities of the tablets and pills were non-equivalent. KEY WORDSHuanglianshangqing Tablets；Huanglianshangqing Pills；Geniposide；Baicalin；Imperatorin；Comparative Study

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.05.005

曹恒涛，男，硕士，主管中药师。研究方向：药物分析。通讯作者E-mail：aycht@163.com

2016-02-05）