液相串联质诺法测定四环素类药物残留方法的改进

徐向阳

摘要：本研究进行了液相串联质谱测定四环素类药物残留方法的改进，通过前处理，液相条件的优化，为批量检测畜产品中四环素类药物残留提供一种快速有效的方法。

关键词：畜产品；四环素；残留；质谱

四环素类抗生素是一种广谱抗生素，主要通过抑制细菌蛋白质合成达到抗菌效果，在化学结构上都属于氢化并四苯环衍生物，故称四环素类，代表物有四环素、土霉素、金霉素、强力霉素等。对革兰氏阳性菌、阴性菌、立克次体、支原体、衣原体都有很好的抑制作用。由于价格低廉，使用方便，效果良好，四环素类被作为药物添加剂广泛应用于畜禽养殖业。但是四环素类容易诱导耐药菌株，且会在畜产品中残留。本文研究在GBT21317-2007和农业部1025号公告-12-2008基础上，优化了前处理方法，液相方法。经试验验证，改进后的方法，简便、准确，适合批量检测四环素类药物残留的需要。

1.前处理方法

1.1提取

1）鸡肉、猪肉，称取2±0.02g匀质样品，置于50mL离心管内，加8mLMcllvaine-Na2EDTA，涡旋混匀，中速振荡10min，14000r/min离心5min，转移上清液于另一50mL离心管内。重复提取一次，合并提取液，混匀，并14000r/min离心10min，去上清液8mL待净化。

2）鸡蛋，称取2±0.02g匀质样品，置于50mL离心管内，加9mLMcllvaine-Na2EDTA，涡旋混匀，中速振荡10min，14000r/min离心5min，转移上清液于另一50mL离心管内。重复提取一次，合并提取液，混匀，并14000r/min离心10min，去上清液10mL待净化

1.2净化

HLB固相萃取柱依次用甲醇3mL、水3mL活化。取备用液过柱，并依次用3mL水、3mL5%甲醇淋洗，挤干，弃去。用5mL甲醇洗脱并收集，55C°下氮气吹干，加1mL30%甲醇复溶、过滤。吸取过滤液0.2mL，加30%甲醇0.8mL，混匀后上机。

2.仪器条件

2.1色谱条件

色谱柱：WatersAcquityBEHC18（2.1mm×50mm，1.7um）柱温：30℃，流动相：A：乙腈；B：0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱（梯度洗脱程序见表1）进样量：2uL

2.2质谱条件

离子源：电喷雾ESI；扫描方式：正离子扫描；采集模式：多反应监测MRM；毛细管电压：3.3kV；锥孔电压：25.00V；离子源温度：150℃；雾化温度：500℃；定性、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞电压（见表2）。

3.结果

回收率及精密度取空白猪肉试样，进行加标试验，测得回收率81.3%～102.6%，精密度0.5%～5.8%，数据（见表3）。

4.分析

国标方法中前处理和梯度洗脱程序冗长，本研究通过减少称样量，相对增加Mellvaine-Na2EDTA提取液用量，利用高速涡旋和14000转速的高速冷冻离心，加快了前处理速度，前处理步骤得到简化。优化了梯度洗脱程序，洗脱效率得到极大提高，也得到了较好的质谱离子化效率。该方法既提高了检测效率，也保证了检测的可靠性。（编辑：赵晓松）