吉林省白山市2013—2015年初治、复治结核病患者药敏检测结果对比分析

张立秀吉林省白山市传染病医院检验科，吉林白山　134300



吉林省白山市2013
—2015年初治、复治结核病患者药敏检测结果对比分析

张立秀
吉林省白山市传染病医院检验科，吉林白山134300

［摘要］目的通过对比分析吉林省白山地区痰抗酸染色阳性的初、复治肺结核病人（含初治失败转为复治的病人）及涂阴培阳病人对抗结核药物的耐药性，指导临床结核病患者的合理用药。方法选取2013年1月—2015年12月在白山市传染病医院住院及门诊的就诊，年龄在16～60岁患者394例痰培养阳性患者，其中男性287例，女性107例。用珠海贝索生物技术有限公司生产的中性及药物培养基，对白山地区394株有药物敏感性试验（简称药敏试验）结核菌的耐药情况进行结果对比分析。结果394例患者中，初治患者对一线药耐药的占8.05%，复治患者对一线药耐药的占20.25%；初治患者多耐药的占2.54%、复治患者多耐药的占10.13%；初治患者耐多药的占5.51%、复治患者耐多药的占13.29%。结论复治患者耐药比例明显高于初治患者，目前临床常用的异烟肼（INH），利福平（RFP），乙胺丁醇（EMB），链霉素（SM）、氧氟沙星5种抗结核菌的药物均存在一定的耐药性，临床应给予重视，依据药敏实验结果制定更为合理的化疗方案。

［关键词］白山市；结核杆菌；耐药性；结果分析

结核病是严重危害人类健康和生命安全的疾病，自20世纪90年代以来，抗结核化疗药物的应用使得大部分肺结核患者可以被治愈，然而近年来耐药结核分枝杆菌的流行加上抗结核新药和疫苗研发的滞后，使得结核病控制面临严峻挑战。全球结核病疫情回升，其中耐多药结核病MADR TB是疫情回升主要原因之一［1］。2012年，全球肺结核发病860万例，其中45万例为耐多药结核病［2］，因此该地区自2013年对初复治肺结核病人（含初治失败转为复治的病人），进行结核菌培养，对2013年1月—2015年12月，培养阳性的394例患者分离出的结核菌进行了抗菌药物敏感性测定，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

白山结防所代管城区（包括浑江区、江源区、靖宇县、临江市、长白县共5个区），结核病诊治工作分离自2013年1月—2015年12月住院及门诊的就诊者患者，年龄16～60岁其中男性287例，女性107例，共394例痰培养阳性患者

1.2结核分枝杆菌的分离培养

痰涂片镜检后，将阳性标本进行分离培养。

（1）标本选取：三涂两培［3］：①3份痰标本均为阳性：选取阳性级别高的2份痰标本进行培养。②3份痰标本2份阳性：选取2份阳性痰标本进行培养。③3份痰标本1份阳性：选取阳性标本和1份质量好的阴性标本进行培养。

（2）培养基的保存和准备：培养基应在4℃下密封避光保存。试验前从冰箱取出所需的培养基恢复至室温，在斜面的背面用记号笔标注进行培养的痰标本号、病人姓名、接种日期，待用。

（3）前处理：吸取1～2 mL痰标本至前处理管中，视样本性状，加入1～2倍体积4%氢氧化钠前处理液，置涡旋振荡器上振荡30～60 s至标本充分混匀，室温放置15 min。

（4）接种：前处理完成后，以无菌吸管吸取前处理液0.1 mL，均匀接种在2支酸性罗氏培养基斜面上。保持斜面水平向上37℃培养24 h后，直立放置37℃继续培养。

（5）观察和结果报告：接种后第3和7日观察培养情况，此后每周观察1次，并按下列标准报告阳性结果（见表1）。

表1　观察和结果报告

所有阳性培养物应保存4℃冰箱内，在药敏实验前不得打开培养管。

（6）培养后应将痰标本放置于-20℃冰箱暂时保存，以备发生污染的培养管重新培养用。

1.3药物敏感性测定［4］

（1）首先进行涂片抗酸染色，确定为抗酸菌者应作抗结核药物敏感性测定。（2）药物敏感性测定采取比例法，检测的药物有：异烟肼（INH），利福平（RFP），乙胺丁醇（EMB），链霉素（SM）、氧氟沙星。每种药物在培养基中的终浓度（见表2）。（3）含药培养基制备：水溶性药物以灭菌蒸馏水溶解，脂溶性药物经少量二甲基甲酰胺溶解，以灭菌蒸馏水定容至所需的工作液浓度。准确吸取1 mL工作液加入到100 mL制备好的无淀粉改良罗氏培养液中，混匀后分装试管，经培养基蒸汽凝固灭菌箱85 ℃50 min凝固灭菌。4℃保存，1个月内使用。（4）菌液制备：新鲜菌落制成1.0 mg/mL菌悬液，依次稀释至10-2mg/mL和10-4mg/mL。（5）接种：分别取10-2mg/mL和10-4mg/mL菌液各0.01 mL接种至对照及含药培养基斜面上，最终接种量为10-4和10-6mg。（6）培养：37℃培养4周。（7）结果的判读、解释和报告：计算耐药百分比，即含药培养基上菌落数与无药培养基上菌落数相比的百分比。小于1%报告敏感，大于或等于1%报告耐药。（8）注意事项，所有操作均在生物安全柜中操作，分离培养阳性的痰标本以及发生污染的培养管应经过高压灭菌后处理［5］。

表2　每种药物终浓度

2　结果

394株结核菌对5种抗菌药物的耐药情况，见表3。

表3　394株结核菌对5种抗结核菌药物不同耐药类型的统计分析

3　讨论

结核病是古老的传染性疾病，疫情在引入有效化疗药物的化疗时代得到了有效控制。但是，近十几年来，由于耐药，尤其是多药耐药性结核病的发生和迅速传播等原因，全球结核病疫情急剧恶化。人类进入21世纪后的今天，结核病仍然是严重威胁人民生命和健康的重要公共卫生问题，耐药、耐多药结核病的控制是其中的重要挑战和核心课题之一。我国是全球结核病高负担国家之一，结核病耐药疫情也十分严重［6］，我国2000年流调结果显示，初始耐药率和获得性耐药率分别为18.6%和46.5%［7］；初始耐多药率和获得性耐多药率分别为7.6%和17.1%。近年来耐药结核杆菌的流行加上抗结核新药和疫苗研发的滞后，使得结核病控制面临严峻挑战。随着TB药物的广泛使用，它的耐药率仍在不断升高，开展药敏试验，选择最敏感的抗生素治疗，是临床治疗TB病的重要方法。全世界2/3的结核病患者处于发生MDRTB的危险之中，MDRTB呈增加趋势，MDRTB的治疗是广大结核病防治工作者面临的最为棘手的难题之一，各国学者正致力于寻找对其进行治疗的良策，其中新药的研制和应用是重要的一环，开发一种新的抗结核药物既需要财力和时间还要评估在体外、体内和临床的效果，并非易事，可谓任重而道远。但抗结核药物的发展前景比几十年前大大开阔，我们或许能从中得到点启示，致力于其中，在众多研究者的不断积极探索中，会有新的发现，以最终达到控制结核病的目的。但实现真正的新药上市，最早可能也要到21世纪的20年代。化疗仍是治疗MDRTB的主要手段，所以这段时间的对耐药、耐多药结核病的治疗是在现有的抗结核药物中选择，力求完善DOTS，适当辅以免疫治疗，介入治疗等方法。

［参考文献］

［1］张国钦，商健，张玉华，等.天津市城区肺结核患者对吡嗪酰胺耐药的现状及特征［J］.中国防痨杂志，2015（5）：508-513.

［2］Word Health Organization.Global TB report，2013.Gebeva：Word Health Organization［Z］.2013.

［3］赵雁林，逄宇，等.分枝杆菌分离培养标准化操作程序，结核病实验室检验规程［Z］.2015.

［4］王宇，赵雁林，王黎霞，等结核分枝杆菌药物敏感性试验标准化操作程序及质量保证手册［Z］.

［5］王宇，赵雁林，王黎霞，等.结核分枝杆菌分离培养标准化操作程序及质量保证手册［Z］.

［6］赵明刚，王宇，肖东楼，等.中国结核病防治规划实施工作指南［Z］.

［7］丁北川，万康林，成诗明，等.中国结核病防治规划痰涂片镜检质量保证手册［Z］.

Comparison and Analysis of Drug Sensitivity Test Results of 2013—2015 and TB Patients in Baishan City，Jilin Province，in the Beginning of the Year

ZHANG Li-xiu
Hospital of Infectious Diseases in Jilin of Baishan City Province，Baishan，Jilin Province，134300 China

［Abstract］Objective Through the comparative analysis in Baishan region，Jilin Province sputum acid fast staining positive initial and retreatment pulmonary tuberculosis patients（with initial treatment failure turn for retreatment of patients）and smear negative and culture positive patients anti tuberculosis drug resistance to guide rational use of drugs in clinical TB patients.Methods In December 2015 January 2013 in Baishan City infectious disease hospital inpatient and outpatient clinic patients，aged 60 to 16 years old 394 cases of sputum culture positive patients，including male 287 cases，female 107 cases.Take proportion method and medium with Zhuhai beisuo Biological Technology Co.，Ltd.is the production of neutral and drug，of Baishan region of 394 strains have drug sensitivity test（referred to as drug sensitivity test）of Mycobacterium tuberculosis drug resistance were analyzed.Results 394 patients naive patients on first-line drug resistance 8.05%.Retreatment of patients on first-line drug resistance（20.25%for initial treatment of patients with multi drug resistant （2.54%and retreatment patients with multi drug resistant（10.13%patients with newly diagnosed resistance multidrug accounted for 5.51%，retreatment patients resistant to many drugs accounted for 13.29%.Conclusion Analysis results show that the retreatment of the proportion of resistant cases were significantly higher than those in untreated patients，at present the clinical commonly used isoniazid（INH），rifampicin（RFP），ethambutol（EMB），streptomycin（SM），ofloxacin 5 kinds of anti TB drugs there are certain antibiotic resistance，clinical should pay more attention to，according to drug susceptibility test results to develop a more reasonable chemotherapy.

［Key words］Baishan City；Mycobacterium tuberculosis；Drug resistance

［中图分类号］R7

［文献标识码］A

［文章编号］1672-5654（2016）04（a）-0113-03

DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.10.113

［作者简介］张立秀（1973.11-），女，本科，主管检验师，主要从事临床医学检验工作。

收稿日期：（2016-01-07）