不同产地木香中两种倍半萜内酯的含量测定

饶文霞 ，张开元，尹显梅，薛倩倩，李杰，尹鸿翔

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不同产地木香中两种倍半萜内酯的含量测定

饶文霞 ，张开元，尹显梅，薛倩倩，李杰，尹鸿翔

目的：测定不同产地木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为Comatex C18( 250 mm × 4.6 mm，5 μm)，以甲醇－水（65∶35）为流动相，检测波长225 nm，流速 1.0 mL．min-1，柱温30℃。结果：木香烃内酯在0.2108 μg～1.2648 μg、去氢木香内酯在0.2332 μg～1.3992 μg范围内线性关系良好，木香烃内酯、去氢木香内酯回收率分别为100.75% ,100.21% 。结论：不同产地木香药材中木香烃内酯和去氢木香烃内酯的含量差别较大，产地对药材质量有明显影响。

高效液相色谱法；木香；木香烃内酯；去氢木香内酯

木香为传统常用中药，为菊科植物木香(Aucklandia lappa Decne.）的干燥根。性温，味辛、苦，具有行气止痛、健脾消食的功效，临床上用于胸脘胀痛、泻痢后重、食积不消、不思饮食等症[1]。

木香主含挥发油，其主要活性成分木香烃内酯和去氢木香内酯具有松弛平滑肌和解痉作用[2-3]，含量高低可作为木香质量优劣的评价指标之一。本文参考相关文献[4-6]，以木香烃内酯和去氢木香内酯的含量为指标，用HPLC法对11个不同产地木香的木香烃内酯和去氢木香内酯含量进行了测定。

1 仪器与试药

美国Agilent 1200高效液相色谱仪（四元泵、自动进样器、柱温箱、检测器、工作站），SB-52000超声波清洗器（宁波新艺超声设备有限公司），ULUP-1-10T 型超纯水机（成都优普超纯水科技有限公司），BSA124S 电子分析天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司），电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司），SHZ—D（Ⅲ）型循环水真空泵（上海一科仪器有限公司），FW-200高速粉碎机（北京中兴伟业仪器有限公司），木香烃内酯对照品（批号：140720，纯度≥98%）、去氢木香内酯对照品（批号：141027，纯度≥98%）均购自成都普菲德生物技术有限公司，甲醇为色谱纯，水为超纯水。木香药材于2014年分别在不同产地进行采集，经成都中医药大学尹鸿翔副教授鉴定为菊科植物木香（Aucklandia lappa Decne.）的根，来源见表1。

表1 木香样品采集情况

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Comatex C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：甲醇—水（65∶35），流速：1 mL．min-1，柱温：30 ℃，检测波长：225 nm。

2.2 对照品溶液的制备

取木香烃内酯、去氢木香内酯对照品，精密称定，加甲醇制成木香烃内酯质量浓度为0.1054 mg．mL-1、去氢木香内酯质量浓度为0.1166 mg．mL-1的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

将木香药材于60 ℃烘箱中干燥，粉碎，过4号筛，取木香粉末约0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理（功率：250 W，频率：40 kHz）30 min，取出，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，用0.22 μm的微孔滤膜滤过，即得。

2.4 测定波长的选择

取木香烃内酯、去氢木香内酯对照品，用甲醇溶解后，用紫外-可见分光光度计扫描，测得木香烃内酯最大吸收波长为211 nm，去氢木香内酯最大吸收波长为209 nm，参考相关文献及考虑到末端吸收，选择文献报道常用的225 nm作为测定波长。吸收光谱图见图 1、图 2。

图 1 木香烃内酯对照品吸收光谱

图 2 去氢木香内酯对照品吸收光谱

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系考察 精密吸取木香烃内酯和去氢木香内酯对照品混合溶液 2，4，6，8，10，12 μL，注入色谱仪，测定不同进样量下木香烃内酯和去氢木香内酯的峰面积，以进样量(μg)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线。木香烃内酯的回归方程为：Y=1453.4X-3.4733，R=1，去氢木香内酯的回归方程为：Y=1149.9X-4.6133，R=0.9999，结果表明木香烃内酯在0.2108 μg～1.2648 μg，去氢木香内酯在0.2332 μg～1.3992 μg范围内线性关系良好。

2.5.2 重复性考察 取同一批药材6份，每份约 0.3 g，精密称定，照供试品溶液制备方法制备，进样10 μL，测定木香烃内酯、去氢木香内酯的含量，结果木香烃内酯和去氢木香烃内酯的RSD分别为 0.38%、0.67%，表明该方法重复性良好。

2.5.3 精密度考察 精密吸取同一供试品溶液10 μL，按上述色谱条件，连续进样 6 次，测定峰面积值，结果木香烃内酯峰面积RSD为0.19%，去氢木香内酯峰面积RSD为0.27%，表明方法精密度良好。

2.5.4 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，在0、4、8、12、16、24 小时进样10 μL，测其峰面积，结果木香烃内酯峰面积RSD为0.25%，去氢木香内酯峰面积RSD为 0.38%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.5.5 加样回收率考察 取已知含量同一批木香药材6 份（木香烃内酯含量2.05%，去氢木香内酯含量2.68%），每份约 0.1 g，精密称定，精密加入一定量的木香烃内酯、去氢木香内酯对照品，照供试品溶液制备方法制备，进样10 μL，计算木香烃内酯、去氢木香内酯的含量，并计算回收率，结果见表2、3。

表2 木香烃内酯加样回收率试验

40.10232.1020 1.05403.1660100.95 50.10352.12661.05403.1801 99.95 60.10342.12461.05403.1771 99.86

表3 去氢木香内酯加样回收率试验

木香烃内酯平均回收率为100.75%，RSD为1.59 %；去氢木香内酯平均回收率为100.21%，RSD为1.70%，表明该方法回收率好，方法可行。

2.6 不同产地木香中木香烃内酯、去氢木香内酯含量测定

精密吸取对照品和供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，计算含量。含量测定结果见表4，色谱图见图3、4。

图3 对照品色谱图

图4 供试品色谱图

表 4 11批木香药材中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量测定结果(n=3)

3 讨论

从11个不同产地的木香烃内酯和去氢木香烃内酯的含量来看，除个别产地外，大多数去氢木香内酯的含量高于木香烃内酯含量，不同产地之间两者含量差别比较大，说明木香药材受产地影响较大。木香的传统产区为云南，被奉为道地产区，实验结果表明云南丽江、大理的木香两种成分含量总和高达5.40%和5.77%，说明云南产的木香质量较佳，符合道地产区的内涵。其次是四川的宣汉及九寨沟等地，近年来，四川已成为木香的主要产区，说明道地药材引种后仍能保持很好的质量，这对于木香的产地扩大具有重要意义。

[1] 林明侠.木香的药理及临床研究概况[J].中医药信息,2005,22(3)： 18.

[2] 肖培根.新编中药志： 第一卷[M].北京： 化学工业出版社,2001： 184．

[3] 王永兵,王强,毛福林.木香的药效学研究[J].中国药科大学学报,2001,32(2)：146.

[4] 刘正清.不同产地和采收时间木香药材中木香烃内酯和去氢木香内酯的测定[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(16)：116.

[5] 赵小民,殷高彬.不同产地木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的 HPLC 测定[J]. 安徽医药,2009,13(6)：617.

[6] 徐宇,方鲁延,谈红,等.HPLC 法测定木香中去氢木香内酯的含量[J].中草药,2004,35(12)： 1416.

(责任编辑：李芸霞）

Determination of the contents of two kinds sesquiterpenoids in Muxiang produced in different areas

/RAO Wen-xia, ZHANG Kai-yuan, YIN Xian-mei, XUE Qian-qian, LI Jie,YIN Hong-xiang//(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine , Chengdu 611137, Sichuan )

Objective:To determine costunolide and dehydrocostuslactone in Muxiang from different productive areas.Method:HPLC method was used in the determination with Comatex C18column. The mobile phase was methanol-water (65：35), and detection wavelength was set at 225 nm with the flow rate of 1.0 mL．min-1. Column temperature was 30℃.Result:The peak area of Costunolide was linear within the range of 0.2108 μg～1.2648 μg. The peak area of Dehydrocostuslactone was linear within the range of 0.2332 μg-1.3992 μg. The average recovery of costunolide and dehydrocostuslactone was 100.75% and 100.21%, respectively.Conclusion:The contents of costunolide and dehydrocostuslactone are greatly different in Muxiang produced in different areas, which indicates that production area significantly influence Muxiang quality.

HPLC; Muxiang; costunolide; dehydrocostuslactone

R282.6

A

1674-926X(2016)05-003-03

科技部“边远贫困地区、边疆民族地区和革命老区人才支持计划科技人员专项 计划”

成都中医药大学，四川 成都 611137

饶文霞，女，硕士研究生，主要从事生药学方向研究 Tel：18314514527 Email：1192884154@qq.com

尹鸿翔，男，副教授，主要从事民族药资源可持续利用及质量评价研究 Email：hongxiangy@126.com

2015-09-25