HPLC法测定复方双花颗粒中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

何远景 廖雪青

【摘要】目的：建立HPLC法测定复方双花颗粒中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。方法：色谱柱为Welch -C18 柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-水（52∶48），流速为1.0ml/min，检测波长： 穿心莲内酯为225nm，脱水穿心莲内酯为254nm。结果：穿心莲内酯在2.55～51μg范围内线性关系良好，r=0.9999；脱水穿心莲内酯在2.662～53.24μg范围内线性关系良好，r=0.9999。穿心莲内酯平均回收率分别为97.9%，RSD=1.16%；脱水穿心莲内酯平均回收率100.13%、RSD= 1.86%。结论：此法重复性好、灵敏度高、定量准确，可作为该复方双花颗粒质量控制指标之一。

【关键词】复方双花颗粒；穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯；HPLC

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）09-0030-02

复方双花颗粒主要由金银花，板蓝根，连翘和穿心莲四味药组成，具有清热解毒，利咽消肿的功效。其中，穿心莲具有清热解毒、凉血、消肿功效[1]，主要有效成分为穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯等二萜内酯类成分。2010年版《中国药典》一部“穿心莲”药材以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量作为质量控制指标。研究复方双花颗粒中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯两者总含量的检测方法，为其质量控制提供实验基础。

1仪器与材料

1.1仪器岛津 LC-2010CHT高效液相色谱仪（SPD-M20A检测器，LC-Solution色谱工作站）；Waters 2695型高效液相色谱仪（Waters 2487检测器，Waters -Solution色谱工作站）；BSA224S型电子分析天平；Sartorius CPA225D电子分析天平；数显恒温水浴锅。

1.2材料穿心莲内酯（批号：110854-200306）、脱水穿心莲内酯（批号：110797-200307）购于中国药品生物制品检定研究院；复方双花颗粒 （批号：141201、141202、111102、111101）。

甲醇为色谱纯（美国TEDIA公司）；水为超纯水；其他所用试剂均为分析纯。

2方法和结果

2.1色谱条件色谱柱：Welch-C18柱（250×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（52∶48）；流速：1.0ml/min，检测波长[2]： 穿心莲内酯为225nm，脱水穿心莲内酯为254nm；柱温：25℃；进样量：20μl。理论塔板数按穿心莲内酯峰计不低于3000，脱水穿心莲内酯峰计不低于2500。

2.2供试品溶液的制备取装量差异下本品研细，取约1.0g，精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇25ml，称定重量，90℃水浴加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加于中性氧化铝柱（200～300目，5g，内径为1.5cm）上，用甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，置于50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.3线性关系考察精密称取穿心莲内酯对照品适量加甲醇超声溶解，制成每1ml含2.55、5.1、10.2、12.75、25.5、51μg的系列标准溶液；另精密称取脱水穿心莲内酯对照品适量加甲醇超声溶解，制成每1ml含2.66、5.32、10.64、13.31、26.62、53.24μg的系列标准溶液。分别精密吸取上述系列标准溶液20μl，注入液相色谱仪，以对照品的浓度为横坐标，测得的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得穿心莲内酯回归方程：Y=43662X+1753.3，r=0.9999，线性范围为2.55～51μg；脱水穿心莲内酯回归方程：Y=28283X-2757.8，r=0.9999，线性范围为2.66～53.24μg。

2.4精密度试验精密吸取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品溶液进样6次，进样20μl，测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰面积，计算其RSD值，分别为0.2%、0.3%，表明仪器精密度良好。

2.5重复性试验取批号为141201供试品6份，平行制成供试品溶液，测得穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯总含量为1.41 mg/g，RSD为1.50%，表明本方法重复性良好。

2.6回收率试验取同一批已知含量（批号：141201，穿心莲内酯含量为0.959 mg/g，脱水穿心莲内酯含量为0.454 mg/g）样品粉末0.5g，平行6份，分别精密加入穿心莲内酯（0.0204mg/g）和脱水穿心莲内酯（0.0106mg/g）混合对照品溶液25ml，同法制成加样供试品溶液，测定并计算，穿心莲内酯平均回收率为97.9%，RSD为 1.16%；脱水穿心莲内酯平均回收率100.13%、RSD为 1.86%，表明回收率试验良好。

2.7专属性取处方中穿心莲以外的药材，按处方工艺，制得阴性对照溶液。按“2.1”项下色谱条件测定，结果未见阴性对照溶液对试验有干扰。

2.8稳定性取同一份供试品溶液，分别在0、1、2、4、6、8、10h进样测定并记录其峰面积，结果不同时间点以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的峰面积总和计，其RSD值为0.32%，表明供试品溶液在室温放置10h内具有比较好的稳定性。

2.9耐用性分别比较了不同仪器（岛津LC-2010CHT 和Waters2695高效液相色谱仪）和不同柱子（A：Welch Ultimate AHP-C18；B：Phenomenex-C18），结果均无统计学差异。

2.10样品测定精密称取4批样品，每批样品平行制备供试品溶液2份，进行测定，按外标法计算穿心莲内酯（C20H30O5）和脱水穿心莲内酯（C20H28O4）总含量，结果四批样品含量分别为8.53、8.57、4.97、5.05 mg/袋，平均值6.78 mg/袋。

3讨论

3.1目前关于复方双花颗粒的报道不多，且多数为金银花中绿原酸的定量分析。因此，实验选取了处方中穿心莲进行定量分析研究。

3.2样品处理方法的确定复方双花颗粒样品甲醇提取后色谱峰杂质干扰严重，为进一步纯化，使用中性氧化铝柱进行处理。结果表明，过中性氧化铝柱后，穿心莲内酯峰附近杂质峰明显减少，分离度更好，脱水穿心莲内酯峰对称性更好。

3.3使用中性氧化铝柱柱处理前，先将柱内的中性氧化铝填充严实。洗脱液加入柱内要使用玻棒引流，速度要慢，以免柱内产生漩涡，影响洗脱剂的洗脱能力。

3.4穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯为结构相近的酯类成分，二者之间容易相互转化，因此选用双波长测定，按二者的总含量计。4批样品以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量总和计，含量在4.97～8.57mg范围内，按最低含量4.97mg/袋的80%定标准限度为4.0mg/袋。综上所述，拟规定含量限度为：每袋含穿心莲以穿心莲内酯（C20H30O4）和脱水穿心莲内酯（C20H28O4）的总量计，不得少于4.0mg。

参考文献

[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（65卷）[M].北京：科学出版社，1982： 74-75.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：251-252.

（收稿日期：2016.03.08）