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Siglec-1在溃疡性结肠炎患者外周血单核细胞中的表达

2016-06-21江明万吴泽成

胃肠病学和肝病学杂志 2016年7期
关键词:活动期单核细胞溃疡性

陈 平,孔 梅,于 双,江明万,刘 辉,吴泽成

重庆三峡中心医院 1.消化内科; 2.肾内科,重庆 404000

Siglec-1在溃疡性结肠炎患者外周血单核细胞中的表达

陈 平1,孔 梅1,于 双1,江明万1,刘 辉1,吴泽成2

重庆三峡中心医院 1.消化内科; 2.肾内科,重庆 404000

目的 分析Siglec-1在溃疡性结肠炎(ulcerative colitic,UC)患者外周血单核细胞中的表达水平,并分析其临床意义。方法 收集40例UC活动期患者、30例UC缓解期患者、40名健康体检者的全血,流式细胞术检测各组患者外周血单核细胞中Siglec-1的表达水平。结果 UC活动期患者外周血单核细胞Siglec-1的阳性细胞数明显高于健康对照组和UC缓解期组,差异有显著统计学意义(P<0.01);不同分级(轻度、中度、重度)UC活动期患者外周血单核细胞Siglec-1阳性细胞数差异也有统计学意义(P<0.05)。结论 Siglec-1可能与UC的发生、发展有关,有望成为评价UC患者病情活动性及严重程度的指标之一。

溃疡性结肠炎;Siglec-1;流式细胞术;外周血单核细胞

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种病因和发病机制尚不明确的直肠和结肠慢性非特异性炎症性疾病。肠道黏膜免疫系统异常反应所导致的炎症过程在UC的发病中起重要作用[1]。唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin 1, Siglec-1,也称CD169)是单核-巨噬细胞激活的标志物,研究[2]发现其在免疫调节和炎症反应中起重要作用。Siglec-1是否在UC的发病中起作用尚不清楚。本文拟通过流式细胞仪测定UC患者外周血单核细胞中Siglec-1的表达水平,并分析其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集重庆三峡中心医院消化内科2011年1月-2015年2月确诊为UC的患者70例,其中活动期患者40例,缓解期患者30例,并选取同期健康体检者40名作为对照。UC诊断标准参照《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012年·广州)》[3]。根据病例资料建立数据库,录入每位患者的年龄、性别、排便次数、便血、脉搏、体温、血红蛋白、红细胞沉降率、内镜表现、医师总体评价等资料。所有研究对象均签署知情同意书,本研究获得医院伦理委员会审核批准。

1.2 流式细胞术检测Siglec-1的表达 取50 μl用枸橼酸钠抗凝的UC患者及对照组人员的全血,加入10 μl PE标记小鼠抗人Siglec-1单克隆抗体(eBioscience公司)和10 μl FITC标记小鼠抗人CD14单克隆抗体(BD公司),混匀后室温避光孵育20 min,同时与抗体相匹配的小鼠IgG1同型对照孵育反应作为阴性对照(同型对照是指与单抗种属来源相同、亚型相同、标记荧光素相同的未免疫动物的免疫球蛋白)。加入1 ml红细胞裂解液,混匀后室温避光孵育20 min,以1 500 r/min离心5 min后弃上清,用2 ml Stain buffer(pH 7.4的磷酸钠盐缓冲液加2 g/dl小牛血清加0.1 d/dl叠氮钠)洗2次,细胞沉淀用200 μl Stain buffer悬浮后上流式细胞仪检测。每份标本获取10 000个细胞,重复检测3次后取平均值。

1.3 UC活动期患者病情分级 根据改良的Mayo评分系统进行UC活动期患者病情分级:轻度12例、中度20例、重度8例。

2 结果

2.1 临床资料比较 70例UC患者中男41例,女29例,年龄19~56岁,平均年龄(40.60±5.80)岁,活动期40例,缓解期30例。以40名健康体检者为对照,男21名,女19名,年龄23~65岁,平均年龄(40.11±3.05)岁。两组性别、年龄相比,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性(见表1)。

表1 UC患者与健康对照者临床特征比较

Tab 1 Comparison of the clinical characteristics between two groups

组别例数性别[n(%)]男女平均年龄(x±s,岁)UC7041(58.6)29(41.4)40.60±5.80 活动期UC4024(60.0)16(40.0)40.83±6.13 轻度127(58.3)5(41.7)38.16±5.45 中度2012(60.0)8(40.0)42.61±6.73 重度85(62.5)3(37.5)39.26±3.06 缓解期UC3017(56.7)13(43.3)41.06±4.78健康对照组4021(52.5)19(47.5)40.11±3.05P值 0.7950.626

2.2 Siglec-1在外周血单核细胞中的表达 健康对照(1.46%)、UC活动期(8.70%)、UC缓解期(2.73%)外周血单核细胞Siglec-1的阳性细胞数经单因素方差分析,差异有统计学意义(F=20.169,P<0.01)。经SNK-q检验进一步两两比较可见,UC活动期明显高于健康对照组和UC缓解期,差异有统计学意义(P<0.01);健康对照组与UC缓解期相比,差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3 不同病情分级UC患者Siglec-1的表达差异 将40例UC活动期患者分为轻度、中度和重度,进一步分析各亚组患者外周血单核细胞Siglec-1的表达水平,轻度、中度、重度组阳性细胞百分数分别为4.13%、8.56%、15.9%。经单因素方差分析,不同分级UC患者外周血单核细胞Siglec-1含量不同,差异有统计学意义(F=19.380,P<0.05);经SNK-q检验进一步两两比较可见,病情分级重者,Siglec-1含量越高(P<0.05)。

3 讨论

Siglecs家族是特异性表达于各种免疫和造血细胞表面的一类免疫球蛋白样黏附分子,通过识别含有唾液酸的糖链结构而促进细胞与细胞间结合和相互作用,介导细胞信号传导,从而调节造血细胞和免疫细胞的功能[4]。

Siglec-1属于Siglecs家族。它在正常人外周血单核细胞上并不表达,而是组成性表达于特定组织巨噬细胞上,是单核-巨噬细胞活化的标记物[5]。Siglec-1参与原发性胆汁淤积性肝硬化[6]、系统性硬化[7]、系统性红斑狼疮[8]等多种免疫炎症性疾病的发生、发展。

Siglec-1作为单核巨噬细胞激活的重要标志,是否参与UC的初始发病过程,至今未见相关报道。本研究利用流式细胞术检测70例UC患者及40名健康体检者外周血单核细胞中Siglec-1的表达水平,结果发现Siglec-1在UC患者外周血单核细胞中表达水平明显高于健康对照者,不同病情分级患者血浆Siglec-1含量也存在差异。结果提示Siglec-1与UC密切相关,Siglec-1可能参与了UC的发生、发展,且血浆Siglec-1可以反映UC病情的活动程度,Siglec-1有望成为评价UC患者病情活动性及严重程度的指标之一。

我们推测Siglec-1参与UC的可能发病机制是:UC患者外周血单核细胞受到病原微生物、环境等因素刺激后,发生巨噬细胞化后细胞膜上Siglec-1表达增加,通过Siglec-1和血管内皮细胞表面含唾液酸结构的糖链复合物结合而黏附血管内皮,向血管内皮下移动并激活,分泌巨噬细胞炎症蛋白-1α/β(MIP-1α/β)、MCP-1、IL-8等趋化因子诱导更多的巨噬细胞和淋巴细胞募集和活化,从而参与UC的发病过程。通过研究巨噬细胞及相关细胞因子可以进一步了解UC的发病机制,并通过活化调节巨噬细胞及相关细胞因子的方法治疗UC 将会有广阔前景。

[1]王吉耀. 内科学[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2010: 443-449. Wang JY. Internal medicine [M]. Beijing: People’s Medical Publishing House, 2010: 443-449.

[2]O’Neill AS, van den Berg TK, Mullen GE. Sialoadhesin-a macrophage-restricted marker of immunoregulation and inflammation [J]. Immunology, 2013, 138(3): 198-207.

[3]中华医学会消化病学分会炎症性肠病学组. 炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012年·广州)[J]. 中华内科杂志, 2012, 51(10): 818-831. Inflammatory Bowel Disease Study Group of Digestive Disease Branch of Chinese Medical Association. The diagnosis and treatment of inflammatory bowel disease consensus [J]. Chin J Intern Med, 2012, 51(10): 818-831.

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[6]周晔, 奚伟强, 蒋廷旺, 等. 原发性胆汁性肝硬化患者Siglec-1蛋白的表达及其临床意义[J]. 临床军医杂志, 2009, 37(5): 748-750. Zhou Y, Xi WQ, Jiang TW, et al. Expression of Siglec-1 mRNA in monocytes from patients with primary biliary cirrhosis and its clinical significance [J]. Clin J Med Offic, 2009, 37(5): 748-750.

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[8]Rose T, Grützkau A, Hirseland H, et al. IFNα and its response proteins, IP-10 and SIGLEC-1, are biomarkers of disease activity in systemic lupus erythematosus [J]. Ann Rheum Dis, 2013, 72(10): 1639-1645.

(责任编辑:王豪勋)

Expression of Siglec-1 in peripheral blood mononuclear cells of ulcerative colitis patients

CHEN Ping1, KONG Mei1, YU Shuang1, JIANG Mingwan1, LIU Hui1, WU Zecheng2

1.Department of Gastroenterology; 2.Department of Nephrology, Chongqing Three Gorges Central Hospital, Chongqing 404000, China

Objective To investigate the expression of Siglec-1 in peripheral blood mononuclear cells of ulcerative colitic (UC) patients and to evaluate its clinical significance.Methods The expression of Siglec-1 in peripheral blood mononuclear cells was detected by flow cytometry in 40 patients with UC in active stage, 30 patients with UC in remission stage and 40 healthy controls.Results The number of positive cells of Siglec-1 in peripheral blood mononuclear cells of UC patients in active stage was obviously higher than that in healthy controls and UC patients in remission stage, there was statistically significant difference among three groups (P<0.01); the level of Siglec-1 among different grades (mild, moderate, severe) of UC patients in active stage was also obviously different (P<0.05).Conclusion Siglec-1 may be associated with the occurring and development of UC, it is expected to be one of the evaluation indexes of the disease activity of UC patients.

Ulcerative colitis; Siglec-1; Flow cytometry; Peripheral blood mononuclear cells

重庆市万州区科技计划项目(201303008)

陈平,硕士,主治医师,研究方向:消化疾病的诊疗。E-mail:chenping53520@163.com

吴泽成,主治医师,研究方向:免疫肾脏病学。E-mail:wufeng53520@163.com

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.07.009

R574.62

A

1006-5709(2016)07-0749-03

2015-09-25

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