VEGF 和bFGF在增生性玻璃体视网膜病变患者玻璃体中的表达及意义

西安市第四医院眼科(西安710004)　薛晓辉



VEGF 和bFGF在增生性玻璃体视网膜病变患者玻璃体中的表达及意义

西安市第四医院眼科(西安710004)薛晓辉

摘要目的：探讨血管内皮生长因子 (VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)患者玻璃体中的表达及意义。方法：选取经B超及眼底荧光血管造影检查诊断为增生性玻璃体视网膜病变的患者42例(外伤性24例,原发性18例)，同时选取同时间段符合本研究要求行眼球摘除的外伤患者28例作为对照组，分别采取玻璃体标本检测VEGF 和bFGF含量。结果：外伤性PVR和原发性PVR VEGF和bFGF含量均明显高于对照组(P<0.01)；外伤性PVR中D级VEGF含量高于B级、C级,原发性PVR中C级、D级VEGF含量高于B级(P<0.05)；外伤性PVR 中VEGF含量均低于同级别原发性PVR中VEGF含量(P<0.05或P<0.01)；外伤性PVR中bFGF含量D级>C级>B级，原发性PVR中bFGF含量C级、D级>B级(P<0.05)；外伤性PVR中bFGF含量均高于同级别原发性PVR中bFGF含量(P<0.05或P<0.01)。结论：外伤性PVR和原发性PVR 中VEGF和bFGF含量均明显高于对照组,且呈现出和病变程度正相关的趋势，VEGF在原发性PVR中表现出较高主导性，而bFGF在外伤PVR中表现出较高主导性,这为进一步研究其发病机制提帮助。

主题词玻璃体视网膜病,增生性血管内皮生长因子成纤维细胞生长因子因果律

增生性玻璃体视网膜病变(PVR)作为一种在视网膜表面、视网膜下和玻璃体腔内增生性的疾病,近年来发病率持续升高，其发病原因主要由于神经胶质细胞、视网膜色素上皮细胞和炎性细胞等增生导致。临床常见的发病因素涉及外伤、炎症性、血管性视网膜病变等，或由于裂孔源性视网膜脱离长期未得到复位或者术后细胞纤维增生导致膜的收缩牵拉引起视网膜脱离[1]。临床治疗多采用手术或药物治疗，但效果不佳。本研究通过探索血管内皮生长因子 (VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与增生性玻璃体视网膜病变的相关性，试图为研究其发病机制提供帮助,为临床靶向性的治疗提供依据。

资料与方法

1一般资料本研究通过医院伦理委员会批准,并告知患者本研究具体内容及方法，患者签署知情同意书。选取2010年1月至2015年11月我院就诊并经B超及眼底荧光血管造影检查诊断为增生性玻璃体视网膜病变患者42例。诊断标准参考惠延年《眼科学(第5版)》[2],分级方法参考1983年国际视网膜学会分级方法[3]。纳入标准：①经B超及眼底荧光血管造影检查有影像学改变；②经确诊为因外伤或为孔裂性视网膜脱离致PVR;③患者视网膜病变分级为B～D级；④入院各项常规指标(血糖、血常规、心电图等)正常者。排除标准：①排除糖尿病并发症等系统疾病致眼底病变患者；②排除研究前有巩膜扣带、眼内注气或视网膜光凝等手术治疗史患者；③排除肝肾功能不全或凝血功能不全影响本次手术治疗患者。外伤性PVR患者24例,原发性PVR患者18例,男25例,女17例,均为一只眼发病,年龄24～69岁,平均46.6±13.9岁,体质指数平均22.4±2.4 kg/m2，病程2～48周,平均16.5±7.9周。外伤性PVR患者病变分级：视网膜B级13例,C级7例,D级4例；原发性PVR患者病变分级：视网膜B级10例,C级4例,D级4例。同时选取同时间段在我院急诊入院后行眼球摘除的外伤患者28例,男18例,女10例,年龄23～70岁,平均45.6±13.9岁,均排除其他眼底病变，为对照组。

2术中标本采集手术过程均由同一医师完成,采用Alcon Accurus 400VS玻璃体切割仪,行标准三切口玻璃体切除术,灌注管未打开前,首先使用玻璃体切割头(19G)切去中央玻璃体0.2 ml作为标本,接着进行气液交换、视网膜光凝、注药或硅油等填充。

3检测方法采取酶联免疫分析法(ELISA)检测VEGF；采取免疫组化染色法测定bFGF的阳性表达。VEGF Elisa分析试剂盒和bFGF免疫组化试剂盒、抗体、DAB显色剂，均购自博士德生物科技公司。

4数据分析采用酶标仪对VEGF进行含量水平测定，采用Image-Pro Plus图像分析软件对bFGF免疫组化图片进行分析，400倍光镜下随机选取5个视野进行分析，计算平均积分吸光度值，吸光度值和阳性表达率呈正比，阳性率越高说明细胞增生越多。免疫组化染色后细胞核有明显棕黄色颗粒的出现视为阳性标准，胞浆染成棕黄色不视为阳性，并且对增生细胞边缘非特异性染色予以排除。

结果

1VEGF含量检测结果见表1。外伤性PVR和原发性PVR VEGF含量均明显高于对照组(P<0.01)；外伤性PVR中D级VEGF含量高于B级、C级。原发性PVR中C级、D级VEGF含量高于B级(P<0.05)；外伤性PVR VEGF含量均低于同级别原发性PVR的VEGF含量(P<0.05或P<0.01)。

表1　VEGF的表达水平

2bFGF含量检测结果见表2。外伤性PVR和原发性PVR bFGF含量均明显高于对照组(P<0.01)；外伤性PVR中bFGF含量D级> C级>B级；原发性PVR中bFGF含量C级、D级>B级(P<0.05)；外伤性PVR bFGF含量均高于同级别原发性PVR的bFGF含量(P<0.05或P<0.01)。

表2　bFGF的平均积分吸光度值

讨论

VEGF和血管内皮细胞的增生关系密切,可以调节相关酶的活性,刺激受体产生生物效应,有研究显示：其含量的变化表现出和视网膜病变的相关性,VEGF及其受体在正常角膜各层均有表达,当眼底玻璃体视网膜增生病变发生时,其前房液中表达率显著升高,引发内皮细胞增生,前移等病理性改变,表明VEGF因子对视网膜上皮细胞的分化和增值有重要影响[4]。bFGF作为一种能促进细胞分裂的细胞活化因子广泛分布于人体各种组织细胞中,可促进视网膜色素上皮细胞、视网膜胶质细胞和成纤维细胞增殖,参与视网膜病变过程。有研究表明[5-6]：外伤容易导致视网膜炎症和玻璃体积血,容易引发巨噬细胞和成纤维细胞细胞大量增值,进而促进视网膜上皮细胞的增生表达,当视网膜病变发生时,bFGF基因大量表达,合成一种多肽物质,促进视网膜色素上皮细胞的分裂增殖。彭艳阳等[7]通过研究bFGF对视网膜上皮细胞的影响,结果表明bFGF可以加速视网膜上皮细胞的分裂期转变,进而促进增值。

本研究结果显示外伤性PVR和原发性PVR VEGF和bFGF含量均明显高于对照组并且呈现出和病变程度正相关的趋势,表明两种细胞因子参与了PVR的发病过程；VEGF含量在原发性PVR中高于外伤性PVR,表明其参与发病可能主要通过内源性物质刺激而大量表达,而bFGF含量在外伤性PVR中较高，表明其对外伤性相关刺激更为敏感，在外伤引发的病变中起主导作用。可见虽然增生性视网膜玻璃体病变过程涉及的增生细胞有巨噬细胞、成纤维细胞、视网膜色素上皮细胞及神经胶质细胞等,但外伤性损伤和内源性损伤的发病机制可能存在一定区别,如当外伤等外来炎症刺激视网膜玻璃体时,巨噬细胞等免疫细胞的表达可能会引起碱性成纤维细胞因子活化,进而驱使相关细胞因子大量增殖，产生纤维增殖膜，而内源性视网膜玻璃体病变可能由于视网膜自身病变或其它病原性病变引发血管内皮细胞增殖,产生了血管性病变,进而引发视网膜脱离等病变。

综上,外伤性PVR和原发性PVR 中VEGF和bFGF含量均明显高于对照组并且呈现出和病变程度正相关的趋势，VEGF在原发性PVR中表现出较高主导性,而bFGF在外伤PVR中表现出较高主导性,两种因子参与PVR的发病机理存在一定差异,这将为进一步研究其发病机制提帮助。

参考文献

[1]焦明菲,颜华.增生性玻璃体视网膜病变的药物治疗[J].眼科研究,2010,28(4)：381-383.

[2] 惠延年.眼科学[M].6版.北京：人民卫生出版社,2006：6.

[3] Retina Society Terminology Committee.The classification of retinal detachment with proliferative vitreoretinopathy[J].Ophthalmology,1983,90(2)：121-125.

[4] 石蕊,薛雨顺,王峰.糖尿病视网膜病变合并白内障患者血清及房水中VEGI和VEGF的含量分析[J].陕西医学杂志,2015,44(10)：1393-1395.

[5] 万志荔,赖史胜.增生性玻璃体视网膜病变中水通道蛋白-1表达的实验研究[J].眼科新进展,2015,35(9):821-823.

[6]徐洋,周荣奎,崔海滨,等.曲安奈德预防术后增殖性玻璃体视网膜病变患者的临床分析[J].中国现代医生,2015,53(9):88-90.

[7]彭艳阳,吴伟,曾丽娜,等.重组人表皮生长因子和碱性成纤维生长因子促进人角膜上皮细胞的增殖[J].中国组织工程研究,2014,18(17)：1045-1046.

(收稿：2016-01-11)

【中图分类号】R776.4

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.06.027