氧气湿化瓶消毒方法及保存时限的研究

2016-06-08张廷轩

河北医药 2016年2期

关键词：消毒

张廷轩

氧气湿化瓶消毒方法及保存时限的研究

张廷轩

【摘要】目的观察集中及分散清洗消毒后的氧气湿化瓶存放不同时间质量变化，为降低医疗成本和保存期限提供依据，根据细菌耐药情况为临床经验用药提供保证。方法通过现场采样、细菌检测和耐药性监测的方法，对两种不同消毒方法消毒后的备用湿化瓶不同时间内进行质量评价。结果2组前7 d，细菌培养合格率均为100%，传统方法组与改进后方法组出现细菌菌落数超标分别为第8天和第10天，且2组数据随着时间变化呈逐渐递增。此次检出109株病原菌，主要以G－杆菌为主。其中大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌分别占32.1%、16.5%、8.3%、22.9%、7.3%。铜绿假单胞菌对青霉素族的哌拉西林、奎诺酮类的环丙沙星、氨基糖苷类的阿米卡星、碳青霉烯类的氨曲南及头孢类的抗菌药的耐药率低于肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希菌和不动杆菌，铜绿假单胞菌对碳青霉烯类的亚胺培南耐药率为5.6%，金黄色葡萄球菌对青霉素、头孢噻肟、环丙沙星、氧氟沙星、亚胺培南和万古霉素的耐药率分别为100%、50.0%、62.5%、62.5%、37.5和0。结论氧气湿化瓶采取集中清洗消毒，统一采用无纺布包装，既节约了成本，延长了氧气湿化瓶保存期限，减轻了临床护士工作量，又达到了消毒的目的。

【关键词】氧气湿化瓶;消毒;保存时限;细菌培养

氧气湿化瓶作为医院必备的抢救设备之一，同时他也是患者发生医院感染传播的途径之一。国内外众多学者曾对湿化瓶引起的医院感染进行报道。荆伟丽等［1］曾对综合ICU的湿化瓶污染菌与患者下呼吸道感染进行研究发现，氧气湿化瓶上的污染菌与患者下呼吸道感染病原菌基本一致。因此，湿化瓶的消毒也成为了许多从事医院感染及消毒工作学者的研究对象。目前，绝大多数医疗机构由临床科室进行浸泡消毒，少数有条件的医院由消毒供应中心进行统一回收、集中清洗消毒。笔者为了比较氧气湿化瓶的消毒效果，寻求氧气湿化瓶合适的消毒方法，自行设计进行分析研究。

1　材料与方法

1.1实验试剂与材料

1.1.1氧气湿化瓶:为北京博瑞康洁工程技术有限公司生产。

1.1.2消毒液:使用杭州郎索医用消毒剂有限公司生产的二氯异氰尿酸钠消毒片配置。批准文号:卫消字(2006)第0199号。其有效氯含量为33%～38%，规格:含有效氯500 mg/片，100片/瓶。生产批号为20110110。有效期为24个月。

1.1.3采样棉签:河南飘安高科股份有限公司生产的医用棉签。批准文号为:豫新食药监械(准)字2010 第1640058号。生产批号为20110311，经环氧乙烷灭菌，保质期为2年。

1.1.4无菌检验洗脱液:使用蛋白胨、氯化钠、吐温、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾加无菌蒸馏水配置，加0.1%硫代硫酸钠调节使其pH值7.2～7.4，进行高压灭菌。

1.1.5普通营养琼脂培养基:按照GB/T4789，28-2003进行配置。将配置好的营养琼脂熔化后，冷却至45℃的营养琼脂培养基15～20 ml倾注于平皿内，小心摇匀放置于平台上，琼脂凝固后待用。

1.1.6全自动微生物分析仪:为美国BD公司生产，其型号为phoEnix100，生产日期为2001年9月12日。

1.2研究方法

1.2.1氧气湿化瓶的消毒及保存方法:传统方法:氧气湿化瓶清洁后，使用500 mg/L的含氯消毒剂浸泡30 min，无菌蒸馏水冲洗干净后倒置在无菌巾上晾干，然后置于无菌贮槽内备用。改进后方法:将集中收集的氧气湿化瓶放入全自动清洗机内清洗(多酶洗液洗涤—漂洗—500 mg/L的含氯消毒剂浸泡30 min—终末漂洗)，干燥(70℃) 15 min达到物理消毒及干燥效果，最后使用灭菌的1次性无纺布包装保存备用，并在外包装上注明消毒日期。

1.2.2氧气湿化瓶分组:传统方法组:每天从单个临床科室无菌物品储存柜中，随机抽取消毒后第0天，及第1～12天的湿化瓶，每天抽取60个进行采样监测。改进后方法组:从消毒供应中心随机抽取消毒后第0天湿化瓶60个，同时从传统方法组同一临床科室随机抽取消毒供应中心集中处理后第1～12天的湿化瓶，每天抽取60个进行采样监测。

1.2.3氧气湿化瓶的采样:用浸有无菌洗脱液的棉签在氧气湿化瓶的内表面进行反复涂擦，以无菌操作剪去手接触部分，置于10 ml无菌洗脱液试管内，送检验科予以检验。此外，采样后的湿化瓶不进行重复采样。2002年版《消毒技术规范》规定，物体表面消毒采样效果监测Ⅱ类区域细菌总数≤5 cfu/cm2，并未检出致病菌为合格。

1.2.4微生物培养及耐药性:采样后的无菌洗脱液进行震荡后，取1 ml洗脱液倾注于普通营养琼脂培养基上进行培养，37℃培养48 h。阳性菌株用美国BD全自动微生物分析仪进行耐药性分析。

1.3各种偏倚的控制

1.3.1消毒质量的控制:同一种消毒方法的所有湿化瓶均由同一个人按照标准进行消毒，保证湿化瓶的消毒质量。此外，改进后方法组进行湿化瓶无菌包装过程中严格控制包装人员无菌操作，完全按照无菌操作技术规范进行操作。

1.3.2保存环境的控制:除第0天保存环境不同外，两种消毒方法的湿化瓶均保存在相同科室的治疗室的无菌储存柜内。

1.3.3样品的采集:样品采集完全按照无菌操作技术要求，且由同一个人进行采集。

1.3.4培养及细菌读数:所有湿化瓶的微生物实验室检验均在相同条件下进行，包括人员、环境、设备及器材等。

1.4评价指标2组氧气湿化瓶细菌计数、所含致病菌、致病菌耐药情况、每组湿化瓶的合格数及合格率、各组湿化瓶的保存时间。菌落计数计算方法细菌总数(cfu/cm2)= (平板菌落数×稀释倍数) /采样面积(cm2)。

1.5统计学分析应用SPSS 11.5统计软件，描述统计结果采用±s或中位数±四分位数间距表达，2组湿化瓶合格率比较采用X2检验成确切概率检验，相关分析采用直线相关回归分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.12种消毒方法湿化瓶培养后的细菌计数传统方法组与改进方法组前7 d，细菌培养合格率均为100%，传统方法组从第8天开始陆续出现细菌菌落数超标或有致病菌生长，第8天至第12天采样合格率分别为88.3%、66.7%、55%、48.3%和40%。而改进后方法组，直到第10天，部分湿化瓶采样才出现菌落数超标，第11和12天采样合格率分别为85%和71.7%。经检验，改进后方法组与传统方法组第8天至12天比较差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.2氧气湿化瓶保存时间与菌落数相关关系根据传统方法组与改进方法组菌落均数做散点图，可见2组数据随着时间变化呈逐渐递增，传统方法组湿化瓶细菌培养数据其斜率大于改进方法组湿化瓶，且其相对应值改进方法组要低于传统方法组的湿化瓶细菌培养数。二者同时间的线性关系分别为:传统方法组:Y1=0.6211×X1 +0.0296。改进方法组:Y2=0.4315 ×X2－0.0681。经检验，二者与时间的相关系数| r1|、| r2|均大于0，小于1，查表，可以看出v= n－1时，| r1|、| r2|大于相应r的临界值，氧气湿化瓶细菌培养菌落数与时间密切相关。见图1。

表1　2组检验合格数及其率的比较　个(%)

图1　氧气湿化瓶保存时间与细菌培养菌落数之间的关系

2.3氧气湿化瓶细菌培养阳性菌株分布本次共检出109株病原菌，主要以G－杆菌为主。其中大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌分别占32.1%、16.5%、8.3%、22.9%、7.3%。但2组处理方法所收集菌株进行比较，传统方法组主要以大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯氏菌为主。改进方法组主要是以大肠埃希菌和肺炎克雷伯氏菌为主。铜绿假单胞菌在2组间差异有统计学意义(P＜0.05)，其余菌种均没有统计学意义，并且所有菌的总菌种数在2组之间差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2、3。

2.4常见革兰阴性杆菌和阳性球菌细菌耐药性分析医院常见的革兰阴性杆菌主要以铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希菌及不动杆菌为主。消毒后保存中的氧气湿化瓶中发现的阴性菌株的耐药率，铜绿假单胞菌对青霉素族的哌拉西林、奎诺酮类的环丙沙星、氨基糖苷类的阿米卡星、碳青霉烯类的氨曲南及头孢类的抗菌药的耐药率低于肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希菌和不动杆菌，值得注意的是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类的亚胺培南耐药率为5.6%，而其他三种细菌的耐药率均为0。金黄色葡萄球菌对青霉素、头孢噻肟、环丙沙星、氧氟沙星、亚胺培南和万古霉素的耐药率分别为100%、50.0%、62.5%、62.5%、37.5和0。见表4、5。

表2　氧气湿化瓶生物监测病原菌构成比

表3　消毒氧气湿化瓶保存过程中污染菌分离鉴定结果　株(%)

表4　革兰阴性杆菌对常用抗菌药物的耐药率　株(%)

表5　金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药率　n=8，(%)

3　讨论

3.1氧气湿化瓶造成医院感染的因素研究证明:氧气湿化瓶细菌污染是引起医院感染的潜在传染源［2］。因此氧气湿化瓶的无菌对防止医源性感染至关重要。氧气湿化瓶污垢的清洗、消毒效果、干燥、包装、保存环境、保存时间、湿化液的种类及更换时间直接影响湿化瓶的清洁，间接造成住院患者医院感染，尤其是气道直接开放的患者生命安全。同传统方法相比，本次研究的氧气湿化瓶经过自动清洗，并使用含氯消毒剂进行消毒，物理烘干及二次低温消毒后，采用无纺布进行包装，统一发放。从各个环节保证了氧气湿化瓶不被污染。

3.2氧气湿化瓶两种消毒方法的优劣本研究可以看出两组湿化瓶消毒后第0天进行采样监测合格率均能达到100%，二者差异无统计学意义(P＞0.05)。常规消毒可以有效杀灭氧气湿化瓶内的细菌，其污染的细菌主要来自消毒后氧气湿化瓶空气重新被细菌污染、湿化液细菌污染，并且随着时间的延长污染加重，这与孙玉卿等［3］的研究基本一致。因此，为了防止氧气湿化瓶的二次污染，氧气湿化瓶进行了烘干及外包装处理。烘干能够迅速蒸发水分，防止潮湿环境下生长的细菌滋生。外包装避免了氧气湿化瓶与空气直接接触，阻止空气中致病菌附着在氧气湿化瓶上，造成湿化瓶污染。传统的消毒方法将消毒后的湿化瓶采取晾干的方式暴露于环境中，为细菌的滋生提供了外在条件。

3.3氧气湿化瓶监测的主要致病菌此次研究中发现，在消毒后保存过程中的氧气湿化瓶，污染的细菌主要以革兰阴性杆菌为主，包括大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌等条件致病菌，这与国内报道的医院常见细菌种类相近［4］。

消毒后保存中的氧气湿化瓶检出的铜绿假单胞菌是下呼吸道感染的主要病原菌之一。病情严重、高龄及长期使用广谱抗生素、皮质激素和抗肿瘤药物，致使免疫功能受损加重，使其成为医院感染铜绿假单胞菌的易感人群。此外，潮湿的氧气湿化瓶为铜绿假单胞菌的繁殖提供了有利条件，由于铜绿假单胞菌易形成生物被膜，促进了铜绿假单胞菌在氧气湿化瓶中黏附和寄殖。铜绿假单胞菌在人体定植少，可能存在于消化道及鼻、腋下、会阴等部位［5］。医院中医疗用液体，如冲洗液、透析液等，及呼吸器等医疗器械或淋浴头等经常被该菌污染。

不动杆菌属多处于潮湿或干燥表面，并可在正常人皮肤上定植，通常不致病。医院中蒸馏水容器、静脉营养液、湿化器吸引管、冲洗液人工通气装置等可能受到该菌污染［6］。近年来，不动杆菌属引起的医院获得性下呼吸道感染已见报道［7］，尤其是鲍曼不动杆菌呈现的多重耐药，已成为临床治疗的难题。检出的大肠埃希菌是人和动物肠道内的正常菌群，在自然界中广泛存在，是医院感染的主要条件致病菌。由于免疫抑制剂的广泛应用，侵入性治疗以及不合理使用抗菌药物等诸多原因，致使大肠埃希菌临床感染不断增加，引起呼吸道感染，尿道感染及败血症等。第三代头孢类抗菌药物的大量使用，加速了大肠埃希菌耐药谱的不断变迁，产ESBLs的大肠埃希菌也逐渐上升。国内外已有多起关于耐药菌暴发流行的相关报道［8，9］。

革兰氏阳性球菌中的金黄色葡萄球菌是引起院内和社区感染的重要病原菌［10］，抗菌药物的不合理使用，造成大量耐药菌的出现，国内有很多监测一直在跟踪金黄色葡萄球菌的药物敏感性，尤其是耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)。此次在消毒后保存中的氧气湿化瓶上检出的各类致病菌，提示我们:氧气湿化瓶是医院感染不可忽视的一个重要途径。

本研究改进后方法的氧气湿化瓶由消毒供应中心统一收集，进行清洗、消毒、干燥，包装后进行发放，与传统方法相比，各个环节加强了氧气湿化瓶管理，防止发生二次污染。改进后方法组消毒效果优于传统方法，能够抑制细菌的生长，延长氧气湿化瓶的保存时间。此次检出的阳性菌株及其耐药性为临床用药提供了科学依据。

参考文献

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4苏丹红，邬全会，肖庆忠.医院感染常见革兰阴性细菌分布及耐药性分析.中华医院感染学杂志，2004，14:9.

5孙琪，齐桂云，刘军，等.铜绿假单胞菌的临床分布及耐药性监测.中华医院感染学杂志，2011，21:142-143.

6邹明祥，梁伟，武文君，等.长沙地区鲍曼不动杆菌临床分布特征及耐药性分析.中国现代医学杂志，2010，21:826-832.

7刘丁，陈萍，陈伟，等.鲍曼不动杆菌医院感染的危险因素及基因分型研究.中华流行病学杂志，2003，24:140-142.

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