添加PAS-ⅢM液后不同机型采集的单采血小板质量对比

侯亚平　张金彩　沈莉　张蕾　张燕

添加PAS-ⅢM液后不同机型采集的单采血小板质量对比

侯亚平张金彩沈莉张蕾张燕

【摘要】目的探究对比两种不同机型的血细胞分离机采集的单采血小板添加PAS-ⅢM液后，检测体外与血小板活性有关的指标的差异。方法将两种机型采集到的各6袋单采血小板，分离出血浆后加入PAS-ⅢM液，制备成PAS-ⅢM含量为70%的单采血小板，分别在实验的第1、5、7、9、13、14天对三组单采血小板检测血小板计数、MPV、PH值、HSR、PCO2、PO2、葡萄糖的含量。结果比较添加PAS-ⅢM液单采血小板和未添加PAS-ⅢM液的单采血小板(对照组)，在实验的第5、7、9、13、14天，MPV、PCO2、PO2、葡萄糖含量差异有统计学意义(P＜0.05);在实验的第13、14天血小板计数、PH值差异有统计学意义(P＜0.05)。比较两种机型采集的单采血小板制备成含量为70%的PAS-ⅢM液的单采血小板后，在实验第1～5天各项指标差异无统计学意义(P＞0.05)，从第7天开始，两种机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板的一些指标开始分化:HSR值和PO2值在第7、9、13、14天差异均有统计学意义(P＜0.05); PCO2值在第9、13、14天差异均有统计学意义(P＜0.05);葡萄糖含量在第7、9天差异有统计学意义(P＜0.05)。MPV在第1、5、7、9、13、14天差异无统计学意义(P＞0.05)。BCT机型采集的添加PAS-ⅢM液单采血小板与对照组在实验的第1～14天，HSR值差异无统计学意义(P＞0.05)。结论MCS +机型采集的单采血小板与BCT机型采集的单采血小板相比，更适合添加PAS-ⅢM液，以延长单采血小板的保存期。

【关键词】单采血小板; PAS-ⅢM液; MPV; HSR; PCO2; PO2

国内目前采集单采血小板主要有两种机型:MCS+和BCT机型，由于它们采集血小板的原理不同，血小板保存袋的材料不相同，因此添加PAS-ⅢM液后单采血小板的保存时间与血小板活性有关的检测指标可能有所不同，本实验是对比这两种不同机型采集的单采血小板在不同的保存时间段，检测体外与血小板活性有关的指标。

1　资料与方法

1.1一般资料2014年5～12月，本血液中心机采科随机选择捐献机采血小板的献血者25人，经体检和初次筛查后，符合《献血者健康检查要求》的献血者20人，均在正常范围内，其中10人使用MCS +血细胞分离机采集单采血小板，10人使用BCT血细胞分离机采集单采血小板。见表1。

表1　采前献血者血常规主要指标　n=10，±s

表1　采前献血者血常规主要指标　n=10，±s

项目MCS +　BCT WBC(×109/L)5.6±1.2　5.2±1.1 RBC(×1012/L)　4.5±0.9　4.5±0.8 HCT(%)　40±0.3　40±0.3 PLT(×109/L)　250±20　250±20 MPV(fl)9.8±0.3　9.7±0.3

1.2设备与试剂MCS +血细胞分离机(美国血液技术公司)，BCT血细胞分离机(Gambro BCT公司)，血细胞计数仪(SYSMEX有限公司)，无菌导管接口机(日本泰尔茂公司)，血小板振荡仪(苏州)，FACS流式细胞仪(美国BD公司)，PAS-ⅢM液联袋(山东威高医用高分子生物制品有限公司)。

1.3方法每位献血者均采集1个治疗量的单采血小板，共采集单采血小板20袋，经质量检测，17袋符合国家卫生部制订的单采血小板质量标准。将MCS+机型采集的单采血小板袋和BCT机型采集的单采血小板各6袋离心后，先分离出(189.0±11.2) ml的血浆，再通过无菌导管接口机连接PAS-ⅢM联袋，加入等量PAS-ⅢM液，制备成PAS-ⅢM含量为70%的单采血小板，剩余未添加PAS-ⅢM液的MCS +机型采集的单采血小板6袋和BCT机型采集的单采血小板5袋作为对照组。均放入血小板振荡仪中(22.0± 2.0)℃振荡保存。见表2。

表2　添加PAS-ⅢM液前每袋单采血小板质量指标±s

表2　添加PAS-ⅢM液前每袋单采血小板质量指标±s

项目　MCS + (n=9)　BCT(n=8)容量(ml)270±16　275±11血小板含量(10×11/L)　272±13　274±15 MPV(fl)　7.0±0.5　7.5±0.6 WBC(×108/L)　≤5.0　≤5.0

1.4观察指标在实验的第1、5、7、9、13、14天用无菌接口机对3组中的单采血小板每袋各提取10 ml样本，提取完后热合封口，继续放入血小板振荡仪中振荡保存。对样本进行标号分别检测:(1)血细胞计数仪测定血小板计数和MPV值; (2)用分光光度计测定HSR; (3)用血气仪和配套试剂盒测定pH值、PCO2、PO2、葡萄糖含量。

1.5统计学分析应用SPSS 13.0统计软件，将两种机型采集的单采血小板添加PAS-ⅢM液后保存不同时间段的测定结果相比较，以未添加PAS-ⅢM的单采血小板做对照，计量资料以±s表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.13组不同时间血小板计数比较在实验的第1～14天，两种机型采集的单采血小板添加PAS-ⅢM液后的血小板计数与第1天的血小板计数比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。在第1～9天，两种机型采集的单采血小板添加PAS-ⅢM液后与对照组在同一天的血小板计数差异无统计学意义(P＞0.05)。但第13天和14天没有添加PAS-ⅢM液的对照组单采血小板和添加PAS-ⅢM液的单采血小板数量上差异有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

表3　3组不同时间血小板计数比较　×1011，±s

表3　3组不同时间血小板计数比较　×1011，±s

注:与对照组比较，*P＜0.05

时间　对照组(n=5)　MCS + (n=6)　BCT(n=6)当天2.65±0.08　2.65±0.07　2.65±0.09 第5天　2.51±0.07　2.62±0.01　2.41±0.03 第7天　2.45±0.07　2.52±0.03　2.43±0.06 第9天　2.5±0.07　2.55±0.03　2.42±0.02 第13天　2.1±0.07　2.60±0.02*　2.50±0.04*第14天　2.0±0.07　2.57±0.05*　2.52±0.02*

2.23组不同时间MPV比较在实验的第1～14天，两个机型所采集的单采血小板添加PAS-ⅢM液后的MPV值(平均血小板体积)差异无统计学意义(P＞0.05)。添加PAS-ⅢM液后的单采血小板MPV值在实验的第5、7、9、13、14天与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表4。

表4　3组不同时间MPV比较　fl，±s

表4　3组不同时间MPV比较　fl，±s

注:与对照组比较，*P＜0.05

时间　对照组(n=5)　MCS + (n=6)　BCT(n=6)当天7±0.1　6.9±1.1　7.0±0.1 第5天　6.3±0.1　6.9±1.1*　7.0±0.3*第7天　5.8±0.1　7.0±0.8*　6.9±0.2*第9天　5.5±0.1　7.0±0.8*　7.1±0.1*第13天　5.2±0.1　7.0±0.6*　7.0±0.4*第14天　5.3±0.1　7.4±0.4*　6.9±0.4*

2.33组不同时间pH值比较两种机型采集的单采血小板添加PAS-ⅢM液后，在实验的第1～14天，pH值比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，均在正常范围内。但在第13、14天pH值与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表5。

2.43组不同时间HSR比较两种机型采集的单采血小板添加PAS-ⅢM液后在实验第1、5天，HSR差异无统计学意义(P＞0.05);在实验的7、9、13、14天，MCS +机型采集的添加PAS-ⅢM液后单采血小板HSR值明显高于BCT机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板(P＜0.05)。BCT机型采集的添加PAS-ⅢM液后单采血小板和同一天的对照组的未添加PAS-ⅢM液的单采血小板比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。见表6。

表5　3组不同时间pH值比较　±s

表5　3组不同时间pH值比较　±s

注:与对照组比较，*P＜0.05

时间　对照组(n=5)　MCS + (n=6)　BCT(n=6)当天7.0±0.3　6.9±0.3　7.0±0.3 第5天　6.9±0.2　7.0±0.3　6.9±0.2 第7天　7.0±0.2　7.1±0.2　6.9±0.3 第9天　6.89±0.2　7.2±0.5　6.6±0.3 第13天　6.3±0.2　7.1±0.3*　6.5±0.2*第14天　6.23±0.2　7.2±0.3*　6.5±0.2*

表6　3组不同时间HSR比较　%，±s

表6　3组不同时间HSR比较　%，±s

注:与对照组比较，*P＜0.05;与MCS +组比较，#P＜0.05

时间　对照组(n=5)　MCS + (n=6)　BCT(n=6)当天68.7±0.02　69±0.03　71±0.1 第5天　60.7±0.1　65±0.2　62±0.2 第7天　49.4±0.2　71±0.1*　43±0.2#第9天　41.3±5.0　72±0.2*　36±0.3#第13天　39.2±4.0　78±0.2*　38±0.4#第14天　39.8±5.0　73±0.3*　38±0.3#

2.53组不同时间PCO2和PO2水平比较PCO2在实验的第1、5、7天，两种机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板差异无统计学意义(P＞0.05)，第9、13、14天，MCS +机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板，PCO2值明显高于BCT机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板。PO2值在第7天就出现明显差异。见表7、8。

表7　3组不同时间PCO2比较　mm Hg，±s

表7　3组不同时间PCO2比较　mm Hg，±s

注:与MCS +比较，*P＜0.05

时间　对照组(n=5)　MCS + (n=6)　BCT(n=6)当天58.0±14　43.0±0.8　45.0±0.3 第5天　41.1±0.7　22.0±0.7　24.0±0.2 第7天　33.5±2.7　20.8±0.7　20.6±0.4 第9天　24.3±3.9　19.9±0.2　15.0±0.4*第13天　18.3±2.6　20.3±0.2　14.0±0.6*第14天　15.1±2.7　18.0±0.2　14.0±0.5*

表8　PO2对比表　mm Hg，±s

表8　PO2对比表　mm Hg，±s

注:与MCS +比较，*P＜0.05

时间　对照组(n=5)　MCS + (n=6)　BCT(n=6)当天58±10　95±42　95±40 第5天　90±5.3　156±8　155±8 第7天　94±4.0　106±8　160±2*第9天　100±3.2　98±7　133±7*第13天　133±4.1　99±6　145±8*第14天　137±2.9　101±6　123±6*

2.63组不同时间葡萄糖水平比较两种机型采集的添加PAS-ⅢM液单采血小板在实验的第7、9天，葡萄糖含量差异有统计学意义(P＜0.05)，第13、14天比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。见表9。

表9　3组不同时间葡萄糖水平比较　mmol/L，±s

时间　对照组(n=5)　MCS + (n=6)　BCT(n=6)当天18.4±1.2　65.0±0.2　66.0±0.3 第5天　14.3±1.1　34.0±0.3　34.0±0.1 第7天　12.3±1.3　14.0±1.1　28.0±0.2*第9天　7.3±1.2　6.5±1.2　11.0±0.3*第13天　＜1.0　7.6±11.0　7.1±0.5 第14天　＜1.0　3.0±1.2　3.5±1.2

3　讨论

正常情况下，单采血小板由于纯度高，输血反应少，在临床上已经广泛应用，但是由于单采血小板只能保存5 d，大大的减少了血小板的实用性，PAS-ⅢM液还添加了钾离子、镁离子、磷酸钠和乙酸钠等，可以更好的延长了血小板的储存期从而使血小板的功能保持良好。

MPV是反映血小板形态的重要指标，在保存的第1～14天，两种机型采集的单采血小板添加PAS-ⅢM液后没有明显差异，从这一方面反映了血小板的性状没有明显变化。未添加PAS-ⅢM液的对照组MPV值随着保存期的延长下降明显，反映出PAS-ⅢM液对维持血小板的形态的重要性。

PAS-ⅢM液中的磷酸盐主要提高血小板的缓冲能力［1］。MCS +机型采集的单采血小板添加PAS-ⅢM液后在实验的第1～14天，PH值总体高于BCT机型采集保存的单采血小板。即MCS +机型采集的单采血小板添加PAS-ⅢM液后PH值更稳定，更接近对照组第1天采集的单采血小板。

HSR实验是反映血小板功能的又一重要指标，检测单采血小板在低渗环境中发生肿胀后，由膜的完整性和能量代谢维持血小板正常体积而恢复其原有形状的抗低渗休克能力［2］。添加液中的钾离子和镁离子可以抑制血小板代谢，减少血小板活化，很好的维持了血小板膜的稳定性。MCS +机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板抗低渗休克能力优于BCT机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板。

血小板在保存期间是消耗O2，产生CO2。保存期间高PCO2值、低PO2值，更好的反映了血小板的活性。血小板在保存期间消耗大量的葡萄糖进行能量代谢，PAS-ⅢM液中的乙酸钠是有氧氧化途径最重要的物质，乙酸钠可以转变为乙酰-CoA，进入三羧酸循环后氧化代谢提供能量。减少了葡萄糖的用量［3］。两种机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板在保存期间都消耗了大量葡萄糖，葡萄糖含量和第1天相比都有明显差异。

从总体比较，在实验的第1、5天，两种机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板，各项实验指标均没有明显的差异;第7、9、13、14天，两种机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板的各项指标开始分化，MCS+机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板，各项体外实验指标均优于BCT机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板，分析主要有以下几个原因:(1)两种机型耗材的产品袋的所采用的塑料材料均为PVC，但是PVC的增塑剂不同:MCS +耗材产品袋的增塑剂为2-乙基己基; BCT耗材产品袋的增塑剂为N-丁酰基三己基。据文献报道，增塑剂对血小板的活性，特别是保存袋内的PH值影响较大［4］。(2)将BCT机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板放入MCS +耗材产品袋内保存，和MCS +机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板，保存期间在血小板数量上没有明显差异，但是血小板的功能恢复上仍没有MCS +机型采集的添加PAS-ⅢM液的单采血小板功能恢复的好。(3)两种分离机采集单采血小板的原理不同［5］:BCT机型通过离心产生高浓缩血小板，再加入合适浓度的血浆和PAS-ⅢM液; MCS +机型通过离心、淘洗、冲浪的方法制备添加PAS-ⅢM液的单采血小板。MCS +机型在采集过程中血小板不宜聚集，更好的保持了血小板的活性。(4) MCS +血细胞分离机带有检测血小板浓度的探测器，可以更好的监测血小板峰值和浓度，自动控制调节血小板和血浆的比例，更好的保证了产品的pH值; BCT血细胞分离机通过人工输入献血者血常规检测数值计算采集时间、采集血小板数量以及抗凝剂的用量，准确度低于MCS +血细胞分离机。短期内对单采血小板的保存没有明显的差异，但是长时间的保存会产生不同的影响:MCS +机型采集的单采血小板与BCT机型采集的单采血小板相比，更适合添加PAS-ⅢM液，以延长单采血小板的保存期。

参考文献

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5Ringwald J，Duerler T，Frankow O，et al.Collection of hyperconcentrated platelets with Trima Accel.Vox Sang，2006，90:92-96.

【中图分类号】R 457.1

【文献标识码】A

【文章编号】1002－7386(2016) 02－0196－03

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2016.02.010

作者单位:050071石家庄市，河北省血液中心

(收稿日期:2015－08－18)