血管内皮生长因子在鼻咽癌中的表达及与临床病理特征的关系研究

陈阳静

(西安交通大学第一附属医院，陕西 西安 710000)



血管内皮生长因子在鼻咽癌中的表达及与临床病理特征的关系研究

陈阳静

(西安交通大学第一附属医院，陕西 西安 710000)

[摘要]目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)表达与鼻咽癌患者临床病理特征的关系，为鼻咽癌诊治提供理论依据。方法收集85例临床资料完整的鼻咽癌组织切片以及40例正常的鼻咽组织切片，采用免疫组织化学染色(SP)法检测标本中VEGF的表达情况，分析鼻咽癌组织切片中VEGF的表达与年龄、性别、TNM分期及有无复发等病理特征的关系。结果VEGF阳性表达主要位于细胞质内。鼻咽癌组织切片中VEGF阳性表达72例(85%)，正常鼻咽组织切片中VEGF阳性表达3例(8%)，鼻咽癌组织中VEGF阳性表达率明显高于正常鼻咽组织(P<0.05)。不同年龄及性别鼻咽癌患者VEGF阳性表达率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)，而不同TNM分期及复发情况患者阳性表达率比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论VEGF在鼻咽癌切片组织中阳性表达率较高，其表达率与肿瘤TNM分期、有无复发有明显的关系，检测VEGF表达情况能为鼻咽癌诊治提供理论依据。

[关键词]血管内皮生长因子；鼻咽癌；血管形成；血管通透性；肿瘤TNM分期

鼻咽癌(NPC)是指发生于鼻咽腔顶部和侧壁的恶性肿瘤，是我国高发恶性肿瘤之一，发病率居耳鼻咽喉恶性肿瘤之首[1]。肿瘤的病因、发病机制及其预防措施等是目前医学研究的重点和难点[2]。研究表明，通过抑制血管的形成进而抑制肿瘤的生长已经成为肿瘤治疗的一个新方向[3-4]。血管内皮生长因子(VEGF)属于血小板源生长因子家族[5]，是从黏液细胞或神经母细胞瘤中提取的特异作用于血管内皮细胞的血管生成因子，它能够诱导血管内皮细胞发生分裂增生，增强血管通透性，从而促进肿瘤的形成与转移[6-7]。本研究观察了VEGF在鼻咽癌中的表达情况及与临床病理特征的关系，旨在为鼻咽癌的诊治提供理论依据。

1临床资料

1.1一般资料选取2010—2014年我院收集的病例资料完整的85例患者鼻咽癌组织标本，诊断前患者均未接受任何抗癌治疗，排除无效组织及组织过小的标本，其中男53例，女32例；年龄21～76岁，中位年龄42岁；国际抗癌协会(UICC)肿瘤TNM分期[8]Ⅰ期9例，Ⅱ期36例，Ⅲ期28例，Ⅳ期12例。选取同期40例健康人正常鼻咽组织标本作为对照，男24例，女16例；年龄18～68岁。

1.2方法采用免疫组织化学染色(SP)法[9]检测所有标本中VEGF阳性表达情况。将石蜡组织切片在60 ℃恒温箱中烘烤20 min后，将石蜡切片置于二甲苯中浸泡10 min，更换二甲苯再浸泡10 min，后依次用无水乙醇、95%乙醇、70%乙醇浸泡5 min进行脱蜡及水化，将切片浸PBS洗3次，每次5 min；再置于新鲜配制的3% H2O2中以阻断内源性过氧化物酶的活性，室温静置15 min，PBS缓冲液冲洗2～3次，每次5 min。在微波炉里加热0.01 mol/L枸橼酸钠缓冲溶液(pH 6.0)至沸腾后将切片放入，断电，间隔5～10 min，反复1～2次进行抗原修复，PBS缓冲液冲洗3次，每次5 min。滴加正常山羊血清封闭液，室温20 min，封闭非特异性抗原。滴加一抗(VEGF鼠抗人单克隆抗体，美国Sigma公司产品)，4 ℃过夜后在37 ℃复温45 min，用PBS洗3次，每次5 min。滴加二抗SP试剂盒(德国罗氏公司产品)，室温静置，用PBS缓冲液冲洗。滴加DAB(DAB显色试剂盒购自北京中山公司)显色5～10 min，在显微镜下掌握染色程度，PBS冲洗10 min，苏木精复染2 min，用自来水冲洗10～15 min；二甲苯透明，中性树胶封片，用BM-37XB倒置生物显微镜(上海彼爱姆光学仪器制造有限公司提供)观察切片显色情况，记录结果，拍照。

1.3结果判断标准用PBS代替一抗的空白对照，VEGF表达以免疫组织化学染色出现棕黄色、褐色颗粒为阳性。每一切片随机选择4个视野，在显微镜(×400)下计算每个视野中100个细胞中阳性细胞的比例，以4个视野的平均百分数作为判定结果。阳性细胞比例≤10%为阴性计0分，10%～25%为弱阳性计1 分，25%～50%为阳性计2分，>50%为强阳性计3分。并参照Rodrigo方法对细胞的着色程度进行评定，无色计0分，淡黄色计1分，黄色计2分，棕黄色即3分，棕褐色计4分。两项合并综合评分0～1分为阴性，2～3分为弱阳性，4～5分为阳性，6～7分为强阳性。

1.4统计学方法釆用SPSS 19.0统计软件对本次实验数据进行分析。率的比较采用卡方检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2结果

2.1VEGF阳性表达情况在鼻咽癌组织中，VEGF主要在细胞胞浆内表达，部分在肿瘤间质中的纤维细胞及血管内皮细胞表达，见图1。正常鼻咽组织中镜下阳性细胞极少，细胞多为无色，见图2。85例鼻咽癌组织中VEGF阳性表达72例占率85%，40例正常鼻咽组织中VEGF阳性表达3例占8%，两者比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.2鼻咽癌患者VEGF表达情况与临床病理特征的关系不同年龄、性别患者鼻咽癌组织中VEGF阳性表达率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)，而不同TNM分期和复发情况鼻咽癌患者VEGF阳性表达率比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表2。

图1　鼻咽癌组织中VEGF表达情况(×400)

图2　正常鼻咽组织中VEGF表达情况(×400)

例(%)

注：①与正常鼻咽组织比较，P<0.05。

表2　鼻咽癌患者VEGF表达情况与

3讨论

鼻咽癌的发生及发展是一个复杂的过程，致病因素有生物因素、遗传因素及环境因素[10]。研究鼻咽癌的发生发展机制有利于鼻咽癌的治疗，从而提高患者的生存质量。VEGF可特异性地促进内皮细胞生长及血管生成，增加血管的通透性，促进血管内物质的渗漏,为血管内皮的迁移和肿瘤细胞的转移提供基质[11]。随着对VEGF家族研究的深入，发现肿瘤细胞不仅分泌VEGF，而且在人体的肿瘤细胞组织中存在大量VEGF表达，正常组织却极少表达[12-13]；且VEGF作为生长因子，能诱导肿瘤细胞的增殖，其在肿瘤的形成及发展过程很可能有着非常重要的作用，通过阻断VEGF受体的表达，有可能达到抑制肿瘤生长的目的[14-15]。

Wakisaka等[16]及赵素萍等[17]研究报道VEGF的表达不仅与肿瘤临床分期有关，还与鼻咽癌有无淋巴结转移以及远处转移密切相关；赵国旗等[18]研究表明血清VEGF表达升高意味着预后不良。本研究结果显示鼻咽癌组织中VEGF阳性表达率明显高于正常鼻咽组织，且不同肿瘤TNM分期及复发情况的患者鼻咽癌组织中VEGF阳性表达率比较差异有统计学意义，鼻咽癌组织中VEGF阳性表达率随着肿瘤TNM分期分期的进展而增高，有复发者VEGF阳性表达率显著高于无复发者，表明VEGF在鼻咽癌的发展中起一定作用。

总之，VEGF在鼻咽癌组织中存在高表达，且与肿瘤TNM分期及有无复发密切相关，抑制VEGF的表达可能成为有效治疗鼻咽癌的途径之一，有待继续研究。

[参考文献]

[1]Jones PA,Baylin SB. The epigenomics of cancer[J]. Cell,2007,128(4):683-692

[2]吴慧玲,董盛宇,叶耀耀,等. S100蛋白表达与鼻咽癌临床关系的研究[J]. 中国现代医药杂志,2013,15(5):15-18

[3]宋勇春,王平. VEGF、LMP-1在鼻咽癌中的表达及其与预后的相关性[J]. 天津医科大学学报,2007,13(4):556-559

[4]张海,王志新. VEGF和MMP-9在鼻咽癌中的表达及其与远处转移的关系[J]. 中国肿瘤临床与康复,2008,15(5):389-393

[5]王晓雪,王光明,潘云,等. VEGF与鼻咽癌的研究现况及其临床意义[J]. 中国医学创新,2014,11(2):149-151

[6]Leblebisatan G,Antmen B,Samaz I,et al. Vascular endothelial growth factor levels in childhood acute lymphoblastic and myeloblastic leukemia[J]. Indian J Hematol Blood Transfus,2012,28(1):24-28

[7]Jennbacken K,Welén K,Olsson A,et al. Inhibition of metastasis in a castration resistant prostate cancer model by the quinoline-3-carboxamide tasquinimod (ABR-215050)[J]. Prostate,2012,72(8):913-924

[8]朱超纲,赵淑芬,陈新林,等. EB病毒DNA定量测定与鼻咽癌“中国2008TNM分期”的关系[J]. 中国肿瘤,2011,20(10):772-774

[9]饶洁,赵利容,罗泊涛,等. 鼻咽癌组织中ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白的表达变化及其相关性[J]. 山东医药,2014,54(31):1-3

[10] 姚行齐,杨长亮,阳光,等. 鼻咽癌患者预后因素分析[J]. 实用癌症杂志,2014,29(2):146-148

[11] Li J,Zhang YP,Kirsner RS. Angiogenesis in wound repair:Angiogenic growth factors and the extracellular matrix[J]. Microscopy Res Tech,2003,60(1):107-114

[12] Von MZ. De novo expression of vascular endothelial growth factor in human pancreatic cancer:Evidence for an autocrine mitogenic loop[J]. Gastroenterology,2000,119(5):1358-1372

[13] 商黎明. 鼻咽癌中VEGF及其受体EGFR的表达及相关性的初步研究[D]. 杭州：浙江大学,2011

[14] Qin LX,Tang ZY. The prognostic molecular markers in hepatocellular carcinoma[J]. World J Gastroenterol,2002,8(3):385-392

[15] Walter A,Etienne-Selloum N,Khallouf H,et al. Intake of grape-derived polyphenols reduces C26 tumor growth by inhibiting angiogenesis and inducing apoptosis[J]. FASEB J,2010,24(9):3360-3369

[16] Wakisaka N,Wen QH,Yoshizaki T,et al. Association of vascular endothelial growth factor expression with angiogenesis and lymph node metastasis in nasopharyngeal carcinoma[J]. Laryngoscope,1999,109(5):810-814

[17] 赵素萍,王承龙. 血管内皮生长因子在鼻咽癌中的表达及其临床意义[J]. 湖南医科大学学报,2003,28(2):114-116

[18] 赵国旗,许奕,王蔷. 鼻咽癌放射治疗前测定血管内皮生长因子的意义[J]. 中西医结合学报,2005,3(4):274-277

Study on VEGF expression and its relationship with clinical pathological features in nasopharyngeal carcinoma

CHEN Yangjing

(The First Affiliated Hospital of Xi’an Jiao Tong University, Xi’an 710000, Shaanxi, China)

Abstract:Objective It is to observe the expression of vascular endothelium growth factor (VEGF) in nasopharyngeal carcinoma (NPC), and investigate the relationships of VEGF with the clinical pathological features, in order to provide the theory for treats NPC. Methods 85 cases of nasopharyngeal carcinoma tissues section of patients with complete clinical data and 40 cases of normal nasopharyngeal tissues section were collected and the expression of VEGF in them were detected by immunohisto-chemistry (SP) method. The relationship of VEGF expression with the clinical pathological features included age, sex, TNM stage and recurrence in NPC tissue were analyzed.Results The positive expression of VEGF in NPC was observed mainly in cytoplasm of cells. There were 72 cases (85%) of nasopharyngeal carcinoma and 3 cases (8%) of normal tissues with positive express of VEGF, the positive expression rate of VEGF in NPC tissues was significantly higher than that in normal nasopharyngeal tissues (P<0.05). There were no significant difference in the positive expression of VEGF in NPC tissue between different age and sex (all P>0.05), but were significant difference between different TNM stages and recurrence state (all P<0.05).Conclusion The positive expression rate of VEGF in NPC tissue is higher, and it has relationship with TNM stage and recurrence. The detection of VEGF expression can provide a theoretical basis for the diagnosis and treatment of NPC.

Key words:vascular endothelium growth factor; nasopharyngeal carcinoma; angiogenesis; vascular permeability; TNM stage

[作者简介]陈阳静，男，主治医师，研究方向为耳鼻咽喉头颈外科疾病的诊治。

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.03.006

[中图分类号]R-33

[文献标识码]A

[文章编号]1008-8849(2016)03-0245-03

[收稿日期]2015-07-20