Clobenpropit在胰腺癌动物模型中与吉西他滨抗肿瘤的协同作用

西安市中心医院普外一科(西安710003)　曾　文　李　琳　郑　晨



Clobenpropit在胰腺癌动物模型中与吉西他滨抗肿瘤的协同作用

西安市中心医院普外一科(西安710003)曾文李琳郑晨

摘要目的：探讨Clobenpropit作为一种特定的H3受体拮抗剂和H4受体激动剂，在胰腺癌中与吉西他滨共同使用的抗肿瘤作用。方法：通过人胰腺癌细胞株(PANC-1)建立裸鼠模型进行研究，通过尾静脉注射药物，测量肿瘤生长及抑制情况，并最终处死后行进一步研究以评价两种药物对细胞增殖、凋亡的影响。结果：Clobenpropit与吉西他滨联用可显著提高吉西他滨对肿瘤的抑制作用，而单用Clobenpropit的抗肿瘤效果不如单用吉西他滨显著。其联合使用可能是通过抑制细胞迁移、上调钙粘附蛋白E等实现的。结论：Clobenpropit可以增强吉西他滨对胰腺癌细胞的抗肿瘤作用。

主题词胰腺肿瘤 小鼠，裸 @Clobenpropit@吉西他滨

胰腺癌是一种预后较差的消化系统恶性肿瘤，目前治疗的进展多体现在对生存期延长。手术切除是胰腺癌唯一可能治愈的治疗方法，但临床中大约只有15%的患者有手术切除的机会[1]。因此化疗药物在胰腺癌中得到了广泛的应用，吉西他滨作为一种标准的经典化疗药物，主要通过吉西他滨三磷酸盐进入DNA发挥其细胞毒性作用，导致DNA链合成终止。然而实际应用中胰腺癌是高度对化疗不敏感的肿瘤之一，包括对吉西他滨的应用[2]。如何找到新的治疗靶点和提高胰腺癌化疗敏感性的药物是目前研究的热点方向。组织胺通过肿瘤细胞膜上的四个受体H1、H2、H3、H4在肿瘤细胞的增殖或凋亡上扮演了重要的角色。先前的研究表明，胰腺癌细胞的生长和增殖中与其H3受体增加，H4受体减少密切相关[3]。Clobenpropit作为一个特定的H3受体拮抗剂和H4受体激动剂，能抑制乳腺癌的扩散[4]。因此，我们的目的是探讨在人类胰腺癌细胞中吉西他滨联合Clobenpropit的抗癌效果。

材料与方法

1材料56只健康成年裸鼠，由西安交通大学医学院提供。Clobenpropit进口自Sigma-Aldrich公司；吉西他滨进口自 LILLY FRANCE公司。

2动物分组和处理动物随机分为Clobenpropit组、吉西他滨组、联合用药组及生理盐水空白对照组。体外培养人胰腺癌细胞株进行裸鼠皮下注射，待皮下瘤生长至直径约2 cm大小后开始给药，其中Clobenpropit组每隔一天行尾静脉注射(20 μmol/kg)、吉西他滨组每周两次行尾静脉注射(125mg/kg)、联合用药组给药方法为单独用药两组组合。

3抑瘤效果评价每周测量每只裸鼠的体重，并游标卡尺定期测定肿瘤大小。40 d后统一处死裸鼠，取肿瘤标本行病理及免疫组化研究。

4统计学方法使用SPSS 10.0进行统计学分析。t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

结果

1在胰腺癌裸鼠皮下瘤模型建立成功后，进行随机分组裸鼠的体重测量，提示组间平均体重无显著差异。所有的裸鼠均存活至实验结束。裸鼠的平均体重变化、肿瘤体积变化如表1、2所示。结果显示裸鼠体重变化各组间并无明显差异，肿瘤体积变化中联合用药组较其他组有明显抑制，空白对照组较其他组有明显增大。最终处死后肿瘤标本的瘤重结果提示Clobenpropit与吉西他滨联合应用相比其他治疗组明显的抑制了肿瘤生长(P<0.05)(表3)。

表1　各组裸鼠的平均体重变化结果(g)

表2　各组裸鼠的肿瘤体积变化结果(mm3)

表3　各组裸鼠处死后肿瘤标本的瘤重比较(mg)

2免疫组化提示Clobenpropit单独及与吉西他滨联合用药组中均较对照及吉西他滨单独用药组明显上调了钙粘附蛋白E(E-cadherin)的表达(P<0.05)(附图)。

附图　各组间E-cadherin免疫组化对比

讨论

组胺及其受体在肿瘤发生发展的过程中作用是复杂的。本实验中，我们评估了一个特定的组胺受体及其受体激动剂对人胰腺癌细胞的影响。目前越来越多的证据表明，上皮间质化(EMT)与肿瘤关系密切，EMT在多种实体肿瘤的进展和转移中起到了重要的作用，包括胰腺癌[5]。E-cadherin主要分布于上皮组织中，是重要的细胞间粘附分子之一。它在恶性细胞转化中起重要作用，尤其在肿瘤的发生、发展过程中起着重要作用，其缺失与肿瘤的侵袭和转移相关[6]。此外，E-cadherin表达缺失已与一些癌症的临床不良预后相关。在本实验中，H4受体激动剂也印证了可增加小鼠体内移植瘤的E-cadherin的表达[7]。Clobenpropit发挥了重要的作用，通过上调E-cadherin抑制了EMT过程，从而达到干扰胰腺癌细胞的迁移和增加吉西他滨对细胞化疗敏感性的目的。

不同的胰腺癌细胞株对化疗的敏感性不同，其中Panc-1是已知的对吉西他滨化疗不敏感细胞株[8]。为了阐明Clobenpropit的效果，我们选用了该细胞株。众所周知，胰腺癌细胞发生与EMT表达增加相关。本实验表明对异种移植的裸鼠在联合治疗组与对照组相比下肿瘤体积明显减小，表明胰腺癌细胞的凋亡在吉西他滨和Clobenpropit联合治疗后明显增加。这些结果说明靶向治疗逆转EMT能增加胰腺癌对化疗的敏感性。然而通过H4受体抑制EMT的分子机制仍需要下一步的深入研究。

参考文献

[1]Lennon A M， Wolfgang C L， Canto M I，etal. The early detection of pancreatic cancer: what will it take to diagnose and treat curable pancreatic neoplasia?[J]. Cancer Research，2014，74(13): 3381-3389.

[2]Ansari D， Urey C， Hilmersson K S，etal. Apicidin sensitizes pancreatic cancer cells to gemcitabine by epigenetically regulating MUC4 expression[J]. Anticancer Research， 2014， 34(10): 5269-5276.

[3]Falus A， Gilicze A. Tumor formation and antitumor immunity; the overlooked significance of histamine[J]. Journal of Leukocyte Biology， 2014， 96(2): 225-231.

[4]Martinel Lamas D J， Cortina J E， Ventura C，etal. Enhancement of ionizing radiation response by histamine in vitro and in vivo in human breast cancer[J]. Cancer Biology & Therapy， 2015， 16(1): 137-148.

[5]Li Y， Kong D， Ahmad A，etal. MicroRNA Targeted Therapy for Overcoming Drug Resistance， Reversal of EMT and Elimination of Cancer Stem Cells in Prostate and Pancreatic Cancer[M]//MicroRNA Targeted Cancer Therapy. Springer International Publishing， 2014: 199-217.

[6]Van Roy F. Beyond E-cadherin: roles of other cadherin superfamily members in cancer[J]. Nature Reviews Cancer， 2014， 14(2): 121-134.

[7]Martinel L D J， Rivera E S， Medina V A. Histamine H4 receptor：insights into a potential therapeutic target in breast cancer[J]. Frontiers in Bioscience (Scholar edition)， 2014， 7：1-9.

[8]Zhang H， Chen L， Bu H Q，etal. Effects of emodin on the demethylation of tumor-suppressor genes in pancreatic cancer PANC-1 cells[J]. Oncology Reports， 2015， 33(6): 3015-3023.

(收稿：2015-07-09)

【中图分类号】R735.9

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.02.009