螺旋藻对抗生素相关性腹泻小鼠大便中菌群的影响

豆新志

摘 要 通过对腹泻小鼠灌食螺旋藻，对比给药组、模型组和正常组小鼠大便中菌种的变化，探索螺旋藻对抗生素相关腹泻小鼠肠道菌群的影响。结果表明：抗生素相关性腹泻导致小鼠的大便菌群异常，异常菌群有一定的自我恢复能力，生理盐水对其无明显治疗作用，螺旋藻灌胃可以明显抑制大便菌群的异常增殖，并促进其中双歧杆菌和乳杆菌菌群数量回升，对菌群异常的恢复有显著效果。

关键词 螺旋藻；抗生素；腹泻；小鼠；大便菌群

中图分类号：R151 文献标志码：B 文章编号：1673-890X（2016）09--03

螺旋藻是一种广泛使用的保健食品。中医认为，螺旋藻甘淡而平，不寒不热，既能扶正又不恋邪，祛邪而不伤正，补泻兼备，调整机体阴阳，使脏腑经络功能恢复正常[1]，是不可多得的天然保健品。现代医学研究证实，螺旋藻能促进肠道益生菌的增殖[2，3]，近年来，大量研究表明，肠道菌群与多种疾病直接相关[4-6]，正常肠道菌群平衡与人体健康密切相关。而滥用抗生素能导致的肠道菌群紊乱[7]，本文通过制造抗生素相关性腹泻小鼠模型，研究螺旋藻对肠道菌群的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物

近交系BALB/C小鼠，昆明种小鼠40只，体质量18～22 g。

1.2 药物

市售山东天健螺旋藻粉；注射用氨苄青霉素（山东鲁抗医药）。

1.3 培养基

EMB培养基：肠杆菌培养基；BDS培养基：拟杆菌培养基；TPY琼脂培养基：双歧杆菌培养基；TSC培养基：产气荚膜梭菌培养基；改良MC培养基：乳杆菌培养基。均购自青岛海博生物技术有限公司。

1.4 仪器设备（见表1）

1.5 动物分组

所有小鼠进行一周适应性饲养后，于实验前禁食6 h（自由饮水）。小鼠随机分成4组：正常组、模型组、生理盐水对照组和螺旋藻组，每组10只。

1.6 抗生素相关性腹泻模型的建立

对模型组、生理盐水对照组、螺旋藻组的小鼠，每次灌胃0.45 g/mL的氨苄青霉素[8]0.5 mL，每天2次，连续3 d，正常组每次灌胃0.5 mL生理盐水，每天2次。3d后，正常组小鼠大便正常，其余3个小组的小鼠均出现水样稀便，抗生素相关性腹泻造模成功。

1.7 造模后小鼠的喂养

造模成功后，每天除正常喂食外，生理盐水对照组每天用生理盐水灌胃2次，每次0.5 mL；螺旋藻组每天用3.34g/L螺旋藻悬液灌胃2次，每次0.5 mL；模型组自然恢复。

1.8 取样及样品处理

造模成功后，第0 d、2 d、4 d、6 d对各组小鼠新鲜大便无菌采样，将样品连续10倍稀释至10-6，每个稀释度取样0.1 mL涂于EMB、TPY、TSC、BDS、改良MC培养基，37 ℃培养48 h后分别对肠杆菌、双歧杆菌、产气荚膜梭菌、拟杆菌和乳杆菌进行平板计数。

1.9 数据处理

数据用均数±标准差（）表示，采用SPSS软件处理，不同实验组之间的差异分析采用t检验，P<0.05为差异有显著性统计学意义，P<0.01为差异有极显著性统计学意义。

2 结果与分析

2.1 正常组和模型组小鼠大便菌群比较分析

由表1可知，模型组相对健康组，肠杆菌、双歧杆菌、拟杆菌、乳杆菌群数量明显减少，产气荚膜梭菌菌群数量明显增加，模型组与正常组小鼠大便菌群间存在显著性差异（P<0.01），结果显示模型组小鼠大便中的出现菌群紊乱。

2.2 造模后各组小鼠大便中菌群的比较分析

由图1～图5可以看出，正常组小鼠在喂养过程中大便菌群数量都很稳定，无明显波动。图1、图3、图4可以看出，造模成功后2 d，模型组、生理盐水对照组、螺旋藻组小鼠大便中的肠杆菌、拟杆菌、产气荚膜梭菌菌群相对于正常组出现了异常增殖，远高于正常组（P<0.01）；随后4 d、6 d，模型组、生理盐水对照组、螺旋藻组中这3种菌群数量逐渐下降，其中模型组和生理盐水对照组的菌群数量接近，无显著差异，螺旋藻组中3种菌群数量下降速度相对模型组和生理盐水对照组更快，差异显著（P<0.01），并逐渐接近正常组水平。图2和图5中可以看出，造模成功后2 d，模型组、生理盐水对照组、螺旋藻组小鼠大便中双歧杆菌和乳杆菌菌群数量低于正常组（P<0.01）；随后4 d、6 d，3组小鼠大便中的双歧杆菌和乳杆菌菌群数量都趋向回升，模型组和生理盐水对照组菌群数量接近，螺旋藻组相对于前2组回升速度明显更快（P<0.01）。

3 结论与讨论

小鼠大便次数较多，新鲜大便中的菌群能够反映出肠道菌群的情况。从本文实验数据分析可以看出，抗生素相关性腹泻导致小鼠的大便菌群异常，异常菌群有一定的自我恢复能力，生理盐水对其无明显治疗作用，而螺旋藻灌胃可以明显抑制大便菌群的异常增殖，并促进其中双歧杆菌和乳杆菌菌群数量回升，对菌群异常的恢复有显著效果。大便菌群的变化反映出肠道菌群的变化，氨苄青霉素导致的腹泻使小鼠肠道菌群紊乱，肠道菌群能够缓慢自我恢复，生理盐水对其恢复无明显作用，螺旋藻则能显著促进小鼠肠道菌群的恢复，促进益生菌的增殖。

参考文献

[1]曾文炉，蔡昭铃，欧阳藩.二十一世纪的理想食品-螺旋藻[J].中国生物工程杂志，2001（5）.

[2]梁冰，昊力克，张学成.螺旋藻在体外对肠道菌群增殖的促进作用[J].中国海洋药物杂志，1999（3）.

[3]周熙成，梁明.螺旋藻及其水提物对肠道菌群体外生长的影响[J].中国微生态学杂志，2002（5）.

[4]杨景云.肠道菌群与健康[M].肠道微生态学，2008（6）.

[5]孙川喻，汤庆娅.肠道微生态与炎性肠病及益生菌的治疗作用[J].临床消化病杂志，2014（5）.

[6]周雪燕，抗生素相关性腹泻的发病机制[J].中国微生态学杂志，2004（6）.

[7]任洁，罗彦英.肠道微生物与肠道疾病[J].中国中西医结合外科杂志，2015（6）.

[8]熊德鑫，祝小枫，赵小燕.肠道菌群失调的腹泻动物模型的制备[J].中国微生态学杂志，1996，8（6）.

（责任编辑：赵中正）